一种病理标本墨汁染色快速固定液及其制备方法、应用方法

1.本发明涉及生物技术领域，具体的是病理标本墨汁染色快速固定液及其制备方法、应用方法。


背景技术：

2.在临床病理工作中，我们常常需要制作病理标本，来作为疾病诊断的依据。病理标本的切缘对判断许多标本(尤其是肿瘤组织)是否切除干净非常重要。切缘的染色对病理医师在显微镜下判断组织是否是手术切缘以及判断组织的定位和方向十分重要。目前多用不同颜色的墨汁来对新鲜标本进行染色，待后续制片后，镜下一目了然地观察外科切缘有无残余肿瘤组织。
3.对切缘等需要染色的组织进行墨汁染色在基层医院应用较少。这主要是由两个原因造成的：第一，新鲜组织标本使用墨汁染色后，若不使用固定液，则需要非常长的时间才能干燥，通常需要等待半个小时以上，并且无论是涂后马上取材或是晾干后再取，墨汁都会溶于水中，搞得取材台一片狼藉，最后制成的切片，墨汁所剩无几，几乎无法辨识，不适合临床广泛推广。第二，国外的做法是在墨汁涂上后，使用bouin’s溶液(在去离子水中加入75％苦味酸饱和水溶液、25％福尔马林滴在墨汁上进行固定，再用吸水纸吸干，起到快速固定的效果。然而bouin’s溶液含有苦味酸，苦味酸具有爆炸性和毒性，不适合推广临床应用。
4.综上，本发明提供一种病理标本墨汁染色快速固定液，与现有技术相比，具有更好的安全性和临床实用性，本发明的应用对提高我国病理事业发展和临床病理诊疗水平具有重要意义。


技术实现要素：

5.为了克服现有技术中的缺陷，本发明实提供了病理标本墨汁染色快速固定液及其制备方法、应用方法，具有成本低、易配置、使用方便的特点，并且本发明固定液不需要使用具有爆炸性和毒性的苦味酸。本发明公开了一种病理标本墨汁染色快速固定液，以重量份计，包括以下成分：
6.冰醋酸100～200份、
7.乙醇200～400份、
8.甲醇200～400份、
9.10叔戊醇50～200份、
10.福尔马林50～200份。
11.在一些实施例中，一种病理标本墨汁染色快速固定液，以重量份计，包括以下成分：
12.冰醋酸200份、
13.15乙醇300份、
14.甲醇300份、
15.叔戊醇100份、
16.福尔马林100份。
17.本发明还公开了一种固定液的制备方法，包括以下步骤：
18.步骤一：将冰醋酸100～200份、乙醇200～400份、甲醇200～400份超声混合均匀得a液；
19.步骤二：将叔戊醇50～200份、福尔马林50～200份充分混合均匀得b 液；
20.步骤三：将步骤一中的a液与步骤二中的b液超声混合均匀得到固定液。
21.可选的，步骤一中超声混合的超声波功率100w，超声时间10～15min，混合温度为室温。
22.可选的，步骤三中超声混合的超声波功率200w，超声时间20～25min，混合温度为室温。
23.本发明同时公开了一种病理标本墨汁染色固定方法，包括以下步骤：
24.步骤一：病理标本切缘取样，使用墨汁染色，静置30s；
25.步骤二：向步骤一中染色的样本均匀喷洒上述制备的固定液，静置30s；
26.步骤三：用水冲样本，冲洗固定后多余的试剂。
27.可选的，病理标本大小为0.025cm2～4cm2。
28.在一些实施例中，病理标本为肺膜，其墨汁染色固定方法，包括以下步骤：
29.步骤一：肺组织切缘取肺膜样本，使用墨汁染色，静置30s；
30.步骤二：向步骤一中染色的样本均匀喷洒固定液，静置30s；
31.步骤三：用水冲样本，冲洗固定后多余的试剂。
附图说明
32.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
33.图1为用实施例1染色固定的效果图，图中显示染色均匀，残余染料较少，效果好。
34.图2为用实施例2染色固定的效果图，图中显示染色均匀，残余染料较少，效果好。
35.图3为用实施例3染色固定的效果图，图中显示染色均匀，残余染料较少，效果好。
36.图4为用实施例4染色固定的效果图，图中显示染色不均匀，残余染料较少，效果一般。
37.图5为用对比例1染色固定的效果图，图中显示染色均匀，残余染料较多，效果一般。
具体实施方式
38.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
39.以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
40.实施例1制备墨汁染色快速固定液：
41.将冰醋酸100份、乙醇200份、甲醇200份超声混合均匀得a液，其中超声波功率100w，超声时间10～15min，混合温度为室温；
42.将叔戊醇200份、福尔马林200份充分混合均匀得b液；
43.将a液和b液超声混合均匀得到固定液，超声波功率200w，超声时间20～25min，混合温度为室温。
44.实施例2
45.将冰醋酸200份、乙醇400份、甲醇400份超声混合均匀得a液，其中超声波功率100w，超声时间10～15min，混合温度为室温；
46.将叔戊醇50份、福尔马林50份充分混合均匀得b液；
47.将a液和b液超声混合均匀得到固定液，超声波功率200w，超声时间20～25min，混合温度为室温。
48.实施例3
49.将冰醋酸200份、乙醇300份、甲醇300份超声混合均匀得a液，其中超声波功率100w，超声时间10～15min，混合温度为室温；
50.将叔戊醇100份、福尔马林100份充分混合均匀得b液；
51.将a液和b液超声混合均匀得到固定液，超声波功率200w，超声时间20～25min，混合温度为室温。
52.实施例4
53.将冰醋酸200份、乙醇400份、甲醇400份超声混合均匀得a液，其中超声波功率100w，超声时间10～15min，混合温度为室温；
54.将叔丁醇50份、福尔马林50份充分混合均匀得b液；
55.将a液和b液超声混合均匀得到固定液，超声波功率200w，超声时间20～25min，混合温度为室温。
56.实验例1
57.将肺组织通过缘切取样获得肺膜样本，使用上述实施例1～4制备的固定液固定，具体操作如下：
58.步骤一：肺组织切缘取肺膜样本，使用墨汁染色，静置30s；
59.步骤二：向步骤一中染色的样本均匀喷洒固定液，静置30s；
60.步骤三：用水冲样本，冲洗固定后多余的试剂。
61.观察残余墨汁染料覆盖面积，拍照记录。
62.对比例1
63.采用bouin’s溶液固定，操作步骤与实验例1一致。
64.结果如下：
[0065] 染色质量实施例1染色均匀，残余染料较少，效果好实施例2染色均匀，残余染料较少，效果好实施例3染色均匀，残余染料较少，效果好
实施例4染色不均匀，残余染料较少，效果一般对比例1染色均匀，残余染料较多，效果一般
[0066]
由上述表格中的检测结果可知，本发明制备的墨汁染色固定液染色效果好，标本染色均匀。
[0067]
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。