一种用于白花泡桐叶芝麻油制剂的HPLC质量控制方法

一种用于白花泡桐叶芝麻油制剂的hplc质量控制方法
技术领域
1.本发明属于生物医药领域，具体涉及一种用于白花泡桐叶芝麻油制剂的hplc质量控制方法。


背景技术：

2.白花泡桐叶的芝麻油制剂是湘西土家族秘方药，现已公开在中国药典中(如国药准字z20063825复方桐叶烧伤油的处方药)，后来又出现了改进产品如“油似金”和“油似宝”等，与复方桐叶烧伤油的区别主要是白花泡桐叶增加了炮制工艺，使产品效果更优。白花泡桐叶的芝麻油制剂是一种组织及创面修复、祛腐生肌药物，具有良好的临床效果，目前主要通过hplc检测齐墩果酸和熊果酸进行一定的质量控制，还存在不全面、不完善的缺陷。
3.高效液相色谱法在中药以及化学等领域应用较广，由于其具有多选择性流动相和各种分离柱系统，使得其对中药及其制剂中各种组分均能达到一定的分离效果，是中药化学领域应用最为重要的分析分离技术。高效液相色谱法方法稳定，可靠并且简便，同时能充分体现其综合化，宏观化和可量化等优于其他鉴别手段的优势，但要求药物中被检测成分峰形美观、分离度高，操作性强。
4.油剂由于常温下为液态的憎水性物质，一般选用气相色谱技术进行检测，但是在气相色谱法中，某些化合物可能会因高温而发生裂解或者发生反应而生成不是样品中的物质，对鉴别产生干扰。在液相色谱法中油剂物质一般难溶于甲醇、乙腈等高效液相色谱常用试剂，而不能直接进行进样。有关文献中使用异丙醇或者丙酮和乙腈的流动组合对油剂产品进行检测，但是异丙醇和丙酮等试剂对仪器本身和色谱柱会产生较大伤害，经济性不高。


技术实现要素：

5.为克服现有技术的不足，本发明使用溶剂萃取法将白花泡桐叶芝麻油制剂中能与液相色谱常用溶剂溶解的物质萃取出来，注入液相色谱柱中进行检测，既不会损害仪器和色谱柱，也能快速稳定的对油剂产品中的物质进行检测；同时通过大量研究，首次在复方桐叶烧伤油的hplc谱图中发现两个非常适合做定量分析的成分，经制备分离后鉴定为芝麻素和芝麻林素，以芝麻素和芝麻林素为对照品（标准品），采用hplc对白花泡桐叶芝麻油制剂中芝麻素和芝麻林素同时进行定量分析，用于白花泡桐叶芝麻油制剂的质量控制（一般来说，芝麻素和芝麻林素含量越高，质量越好）。
6.本发明的一种用于白花泡桐叶芝麻油制剂质量控制的hplc检测方法采取以下步骤：（1）对照品溶液的制备：精密称取芝麻素、芝麻林素各适量，配制成含芝麻素和芝麻林素的混标溶液。
7.（2）供试品溶液的制备：称取一定量的白花泡桐叶芝麻油制剂产品，用一定量的溶剂萃取后，0.45 μm滤膜过滤即得。
8.（3）进行hplc检测：先将对照品溶液进样检测，再将供试品溶液进样检测，通过比
natural products research, 2005, 7(1):1-5.]报道基本一致，故鉴定为芝麻素。
18.化合物b：白色结晶，1h-nmr (600mhz, cdcl3) δ:6.88 (1h, s, h-2'), 6.81 (1h, dd, j = 22.8, 8.4 hz, h-6'), 6.71 (1h, d, j = 8.4 hz, h-5'), 6.62 (1h, d, j = 2.4 hz, h-2''), 6.50 (1h, dd, j = 8.4, 2.4 hz, h-6''), 5.96 (1h, s, h-7''), 5.93 (1h, s, h-7'), 5.50 (1h, s, h-2), 4.45 (1h, t, j = 9.0 hz, h-8a), 4.39 (1h, d, j = 7.8 hz, h-6), 4.13 (1h, dd, j = 9.0, 6.0 hz, h-4a), 3.96 (1h,d, j = 9.0 hz, h-4b), 3.64 (1h, m, h-8b), 3.31 (d1h, d, j = 16.8, 9.0 hz, h-1), 2.95 (1h, dd, j = 8.4, 6.6 hz, h-5).
13
c-nmr(100mhz, cdcl3) δ:151.8(c-1''), 148.1(c-3''), 148.0(c-3'), 147.4(c-4'), 142.7(c-4''), 134.4(c-1'), 119.7(c-6'), 108.9(c-6''), 108.2(c-5'), 108.0(c-5''), 106.9(c-2), 106.60(c-2'), 101.3(c-7'), 101.1(c-7''), 100.2(c-2''), 87.0(c-6), 71.3(c-8), 69.8(c-4), 53.3(c-1), 52.8 (c-5)。
19.以上数据与文献[kang ss, ju sk, jung jh, et al. nmr assignments of two furofuran lignans from sesame seeds[j]. archives of pharmacal research, 1995, 18(5):361-363.]报道基本一致，故鉴定为芝麻林素。
[0020]
白花泡桐叶芝麻油制剂产品中芝麻素和芝麻林素的含量测定如下：精密称取芝麻素、芝麻林素各适量，配制成含0.14 mg/ml芝麻素和0.2mg/ml芝麻林素的混标母液。取对照品母液，分别稀释2倍、4倍、8倍、16倍，配制成浓度为0.07 mg/ml、0.035 mg/ml、0.0175 mg/ml、0.00875 mg/ml的芝麻素和0.1 mg/ml、0.05 mg/ml、0.025 mg/ml、0.0125 mg/ml的芝麻林素混标溶液。
[0021]
称取白花泡桐叶芝麻油制剂产品2g，精密加入10 ml甲醇，摇晃萃取10min，0.45 μm滤膜过滤即得。
[0022]
色谱条件：色谱柱waters xbridge c18 (4.6 mm
×
150 mm，3.5
µ
m)；在梯度洗脱过程中，流动相a为5%甲醇，流动相b为甲醇，流动相b的比例变化为：液相条件： 0-12 min：50-100％甲醇，12-25 min：100-100％甲醇，25-26min：100-50％甲醇，26-36 min：50-50％甲醇；柱温：30 ℃；流速：1.0 ml/min；进样量20 μl；检测波长为300 nm。
[0023]
精密度考察：取白花泡桐叶芝麻油制剂产品适量，精密称定并制备供试品溶液，连续进样6次，记录色谱图，计算rsd值，结果芝麻素rsd为0.67%、芝麻林素rsd为0.72%，表明仪器精密度良好。
[0024]
重复性考察：取白花泡桐叶芝麻油制剂产品适量，精密称定并制备供试品溶液6份，各进一针测定，记录峰面积，计算rsd值，结果芝麻素rsd为1.27%、芝麻林素rsd为1.05%，表明仪器重复性良好。
[0025]
稳定性考察：取白花泡桐叶芝麻油制剂产品适量，精密称定并制备供试品溶液，在0、2、4、8、12、24 h分别进样，记录色谱图，计算rsd值，结果芝麻素rsd为1.87%、芝麻林素rsd为1.68%，表明样品在24 h稳定性良好。
[0026]
线性关系考察：吸取不同浓度的混标溶液，依次进样20μl，以峰面积作为纵坐标，进样浓度（μg/ml）作为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。得到芝麻素线性回归方程y=13338x-12918，相关系数r2=0.9998，表明其在8.75-140 μg/ml之间线性关系良好。得到芝麻林素线性回归方程y=100656x+2768.5，相关系数r2=0.9994，表明其在12.5-200 μg/ml之
间线性关系良好。
[0027]
含量测定：取白花泡桐叶芝麻油制剂产品八批样品（s1、s2、s3、s4、s5、s6、s7、s8），分别制备供试品溶液，分别测定峰面积，计算芝麻素和芝麻林素的含量，结果分别为0.106%、0.138%；0.127%、0.176%；0.083%、0.107%；0.096、0.133%；0.078%、0.294%；0.091%、0.269%；0.082%、0.108%；0.074%、0.273%。在这8批样品中芝麻素含量范围在0.074%~0.127%之间，芝麻林素含量范围在0.107%~0.273%之间。
[0028]
回收率实验：取s3样品6份，每份约1 g，精密称定。精密加入含等量芝麻素和芝麻林素对照品混合溶液5 ml，加入甲醇5 ml，制备供试品溶液，计算各待测成分的平均回收率及rsd。结果显示芝麻素的加样回收率为98.79%～101.72%，rsd为0.95%；芝麻林素的加样回收率为98.59%～100.20%，rsd为0.61%。
[0029]
与现有技术相比，本发明的有益效果是:首次通过试验发现使用甲醇或乙醇萃取法能对白花泡桐叶芝麻油制剂进行快速、简便的检测，并通过液相色谱法和核磁波谱法对成分进行定性和定量。该方法首次发现芝麻素和芝麻林素可以作为白花泡桐叶芝麻油制剂产品的关键质量控制成分并且该方法既不会损害仪器和色谱柱，也能快速稳定的对白花泡桐叶芝麻油制剂产品中的物质进行检测，提高了检测的精确性和稳定性。经本发明方法处理后，成分简单，只需要简单的色谱条件就能对白花泡桐叶芝麻油制剂产品中的关键指标成分芝麻素和芝麻林素进行同时检测，实现白花泡桐叶芝麻油制剂产品的质量控制。
附图说明
[0030]
图1是白花泡桐叶芝麻油制剂产品中芝麻素和芝麻林素的hplc检测图谱。
[0031]
图2是白花泡桐叶芝麻油制剂产品中芝麻素和芝麻林素的hplc制备图谱。
[0032]
图3是化合物a（芝麻素）的核磁共振h谱。
[0033]
图4是化合物a（芝麻素）的核磁共振c谱。
[0034]
图5是化合物b（芝麻林素）的核磁共振h谱。
[0035]
图6是化合物b（芝麻林素）的核磁共振c谱。
具体实施方式
[0036]
现结合具体实施例，对本发明进一步具体说明。
[0037]
实施例1：（1）对照品溶液的制备：精密称取芝麻素、芝麻林素各适量，配制成含芝麻素和芝麻林素的混标溶液。
[0038]
（2）供试品溶液的制备：称取一定量的复方桐叶烧伤油，用一定量的甲醇萃取后，0.45 μm滤膜过滤即得。
[0039]
（3）进行hplc检测：先将对照品溶液进样检测，再将供试品溶液进样检测，通过比对得出供试品溶液中芝麻素和芝麻林素的含量，结果分别为0.116%、0.129%。
[0040]
步骤（3）中，色谱条件优选为：色谱柱waters xbridge c18 (4.6 mm
×
150 mm，3.5
µ
m)；进行梯度洗脱，在梯度洗脱过程中，流动相a为5%甲醇，流动相b为甲醇，流动相b的比例变化为：液相条件： 0-12 min：50-100％甲醇，12-25 min：100-100％甲醇，25-26min：100-50％甲醇，26-36 min：50-50％甲醇；柱温：30 ℃；流速：1.0 ml/min；进样量20 μl；检测波
长为300 nm。
[0041]
实施例2：（1）对照品溶液的制备：精密称取芝麻素、芝麻林素各适量，配制成含芝麻素和芝麻林素的混标溶液。
[0042]
（2）供试品溶液的制备：称取一定量的复方桐叶烧伤油改进产品（油似金），用一定量的乙醇萃取后，0.45 μm滤膜过滤即得。
[0043]
（3）进行hplc检测：先将对照品溶液进样检测，再将供试品溶液进样检测，通过比对得出供试品溶液中芝麻素和芝麻林素的含量，结果分别为0.113%、0.135%。
[0044]
上述只是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上的限制。任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围的情况下，都可利用上述揭示的技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均应落在本发明技术方案保护的范围内。