使用纤蛋白-3和/或肌聚糖γ作为指标评价脂肪团的方法和评价脂肪团有效药物的方法
【专利说明】使用纤蛋白-3和/或肌聚糖γ作为指标评价脂肪团的方 法和评价脂肪团有效药物的方法
[技术领域]
[0001] 本发明涉及评价脂肪团的方法和使用纤蛋白-3和/或肌聚糖γ (sarcoglycan gamma)作为指标评价脂肪团有效药物的方法。
[【背景技术】]
[0002] "脂肪团"（也称为女性脂肪代谢障碍）是主要在女人的腹部、大腿和臀部观察到 的展示皮肤的波纹外观的组织，并且尤其是美容问题，因为其显著地损害了皮肤外观。脂肪 团的发病机理在学术上或医学上还没有被完全阐明，并且其被简单地认为是皮下脂肪的堆 积。根据使用Mirrashed, F.和Querleux, B等进行的MRT的非侵入性分析，在脂肪团皮肤 中没有观察到脂肪细胞和脂肪组织的形态学变化，但是在脂肪团皮肤中，揭示一部分皮下 脂肪组织深深地突出到表皮层内（非专利文献1和2)。
[0003] 因为40%的成年女人具有脂肪团，并且脂肪团明显地损害了外形美观，所以高度 需要减轻、预防和治疗脂肪团，并且国内外市场上早已存在针对脂肪团的产品和美容治疗。 然而，因为还没有阐明定义脂肪团的组织学特征及其形成机理，所以此类产品一般针对缺 少有效数据的产品或是简单地旨在减少脂肪量的减肥药。因此，目前存在非常少的对减少、 预防和治疗脂肪团真正有效的产品，并且仍然不能通过商业途径获得特异地靶向脂肪团的 产品。
[0004] 尽管存在很少参考文献公开用于改善脂肪团外观的药物和/或治疗及其实验数 据，但是烟酰胺、共轭亚油酸和sulfocarbiose被公开为通过应用于受影响的脂肪团位点 上来减轻脂肪团的药物，并公开了实验数据（专利文献1和2,和非专利文献8)，此外， 1-4MHZ超声刺激被公开为减轻脂肪团的治疗（专利文献3)。尽管这些文献公开了表明减 轻脂肪团的效果的数据，但它们并没有明确地证明其作用机制，并因此脂肪团的减少是通 过脂肪量的减少引起的还是通过除脂肪减少外的机制引起的仍然未知。
[0005] 主要通过非侵入性方法研宄皮肤组织来进行脂肪团的研宄。然而，除了由于非侵 入性方法的性质导致的与少量测试样品相关的问题外，仅已经获得零散的信息。因此，很难 说已经系统研宄了脂肪团。[引用列表]
[0006] [专利文献]
[0007] [PLT 1]W099/47112
[0008] [PLT 2]W001/17498
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[0010] [非专利文献]
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[0021] [发明概述]
[0022] [技术问题]
[0023] 在以上环境中，需要开发评价脂肪团的方法、旨在改善脂肪团的药物，和评价此类 药物的方法。
[0024] [问题解决方案]
[0025] 为了阐明脂肪团的组织学特征和形成机制的目的，更特别地，为了使用多种脂肪 团组织和皮肤组织在组织水平上理解脂肪团特有的现象的目的，此外为了使用分子生物学 方法阐明脂肪团特有现象的出现机制的目的，本发明人已经进行了研宄。
[0026] 更特别地，通过使用苏木精伊红（hematoxyline eosin)染色、天狼星红（Sirius Red)染色和Elastica van Gieson染色使来自展示脂肪团的女性臀部和大腿的25份皮肤 活检组织样品（下文中称为脂肪团皮肤）和来自不展示脂肪团的女性臀部和大腿的19份 皮肤活检组织样品（下文中称为女性对照皮肤）进行组织分析。
[0027] 该组织分析揭示，乳突状结构在脂肪团皮肤中明显减少，脂肪团皮肤中真皮层上 面部分中的乳突状真皮层相比于女性对照皮肤是薄的，尽管在脂肪团中含有胶原的胶原纤 维的量没有注意到显著变化，但是弹性蛋白纤维趋向于减少并被扰乱，并且尽管在脂肪团 皮肤本身的脂肪细胞和脂肪组织中没有发现形态学变化，但是观察到了脂肪突出形式的局 部变化。
[0028] 从上文提及的新的组织学发现推论，脂肪团的起因是双重的：由增加的脂肪量引 起的皮肤内脂肪物突出的形成，和变化，如减少的弹性和真皮的变薄，其否则应该针对上述 突出起垫子的作用，导致皮肤内波纹的向外表现。因此，发现脂肪团形成可能不仅与局部变 化，如突出的脂肪有关，还与迄今为止没有引起注意的真皮层中的变化有关。因而，获得了 新的发现，其表明旨在减轻体重或燃烧脂肪的减肥药不足以用于改善脂肪团，而对付真皮 变化的有效药物或治疗可能为脂肪团改善所需。
[0029] 为了澄清脂肪团皮肤和女性对照皮肤之间真皮纤维的变化原因，本发明人分析了 真皮成纤维细胞的基因的表达水平，所述真皮成纤维细胞构成了真皮的最重要细胞并决定 了其性质。更特别地，因为使用来自全层人组织的RNA的分析由于除构成大多数全层皮肤 的成纤维细胞以外的细胞和/或器官的一种噪音而不能精确地鉴定成纤维细胞的性质，本 发明人已经使用了激光捕获显微解剖方法（非专利文献4和5)来从皮肤组织切片中提取 真皮成纤维细胞的mRNA，然后已经进行了基因微阵列。结果，本发明人已经成功鉴定了大量 基因，其表达水平在脂肪团皮肤和女性对照皮肤之间不同。
[0030] 由于通过使用定量PCR特异地检查脂肪团皮肤的成纤维细胞中该大量基因的表 达，证实了脂肪团皮肤中纤蛋白-3和肌聚糖γ的显著减少的表达（图4和6)，此外通过免 疫组织染色观察到了类似的趋势（图3和5)。
[0031] 纤蛋白-3是参与弹性纤维形成的细胞外蛋白质之一，并且作为常见的功能，已知 其涉及弹性蛋白纤维形成。（非专利文献6和7)。另一方面，尽管皮肤中肌聚糖γ (其为 蛋白聚糖）的功能还未被证明，但是作为常见的功能，已知肌聚糖γ保护肌膜免于功能缺 陷个体的表型。
[0032] 因此，认为纤蛋白-3的减少表达通过弹性纤维，特别是弹性蛋白纤维的异常形成 参与脂肪团形成，并且还认为肌聚糖γ的减少表达通过在成纤维细胞中保护细胞膜的功 能减弱而参与脂肪团形成。然而，本发明不应受限于这些机制。
[0033] 此外，当向培养细胞中加入已知改善脂肪团外观的烟酰胺和共轭亚油酸时，本发 明人已经发现这些试剂以剂量依赖性方式增强了纤蛋白-3和肌聚糖的表达。因而，本发明 人总结，这些