浓度为0.000003 ~ 18 ng/mL的一系列不同浓度的三个肿瘤标志物抗原用于和对应的的捕获抗体的特异性识别,室温下孵化I h,清洗干净;
(6)将6μ L浓度为I mg/mL分别为金杂化ZSM-5分子筛负载中性红、金杂化ZSM-5分子筛负载甲苯胺蓝和金杂化ZSM-5分子筛负载二茂铁甲酸标记的三个肿瘤标记物的检测抗体溶液滴在电极上,与对应的三个肿瘤标记物抗原进行特异性识别,室温下孵化I h,清洗干净,于4°C冰箱中储存备用。
[0016]实施例2 —种基于金杂化ZSM-5分子筛负载电子媒介体构建的三通道生物传感器的制备方法
(1)依次用1.0,0.3,0.05 Mffl的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光,分别在超纯水和乙醇中超声清洗,氮气吹干;
(2)在电极表面滴加6μ L浓度为1.5 mg/mL的金杂化ZSM-5分子筛的水溶液,干燥;
(3)继续将6PL浓度为10 Pg/mL的三个肿瘤标志物抗原的捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面,于4°C冰箱中孵化I h,清洗干净;
(4)用3μ L浓度为10 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点,于4°C冰箱中孵化I h,清洗干净;
(5)将6μ L浓度为0.000003 ~ 18 ng/mL的一系列不同浓度的三个肿瘤标志物抗原用于和对应的的捕获抗体的特异性识别,室温下孵化I h,清洗干净;
(6)将6μ L浓度为1.5 mg/mL分别为金杂化ZSM-5分子筛负载中性红、金杂化ZSM-5分子筛负载甲苯胺蓝和金杂化ZSM-5分子筛负载二茂铁甲酸标记的三个肿瘤标记物的检测抗体溶液滴在电极上,与对应的三个肿瘤标记物抗原进行特异性识别,室温下孵化I h,清洗干净,于4°C冰箱中储存备用。
[0017]实施例3 —种基于金杂化ZSM-5分子筛负载电子媒介体构建的三通道生物传感器的制备方法
(1)依次用1.0,0.3,0.05 Mffl的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光,分别在超纯水和乙醇中超声清洗,氮气吹干;
(2)在电极表面滴加6μ L浓度为2 mg/mL的金杂化ZSM-5分子筛的水溶液,干燥;
(3)继续将6PL浓度为12 Pg/mL的三个肿瘤标志物抗原的捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面,于4°C冰箱中孵化I h,清洗干净;
(4)用3μ L浓度为15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点,于4°C冰箱中孵化I h,清洗干净;
(5)将6μ L浓度为0.000003 ~ 18 ng/mL的一系列不同浓度的三个肿瘤标志物抗原用于和对应的的捕获抗体的特异性识别,室温下孵化I h,清洗干净;
(6)将6μ L浓度为2 mg/mL分别为金杂化ZSM-5分子筛负载中性红、金杂化ZSM-5分子筛负载甲苯胺蓝和金杂化ZSM-5分子筛负载二茂铁甲酸标记的三个肿瘤标记物的检测抗体溶液滴在电极上,与对应的三个肿瘤标记物抗原进行特异性识别,室温下孵化I h,清洗干净,于4°C冰箱中储存备用。
[0018]实施例4金杂化ZSM-5分子筛负载中性红、金杂化ZSM-5分子筛负载甲苯胺蓝和金杂化ZSM-5分子筛负载二茂铁甲酸标记的三个肿瘤标记物的检测抗体溶液的制备
(1)金杂化ZSM-5分子筛的制备
取0.5 gZSM-5分子筛溶于10 mL无水甲苯中,加入0.5 mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷,在701:下回流1.5 h。离心后于110°C下干燥I h,得到粉末为氨基功能化的ZSM-5分子筛,将50 mg氨基化ZSM-5分子筛溶于10 mL超纯水中,在搅拌下缓缓加入到100 mL金纳米粒子溶液中,溶液立即变为不透明的深紫色,离心,除去上清液,在35°C下真空干燥,得到的紫色固体粉末为金杂化ZSM-5分子筛;
(2)金杂化ZSM-5分子筛负载中性红标记的肿瘤标记物的检测抗体的制备
取I mL浓度为I mg/mL的金杂化ZSM-5分子筛水溶液与I mL浓度为10 μ g/mL的第一种肿瘤标志物的检测抗体混合,震荡12 h,离心洗涤后,继续加入I mL浓度为I mg/mL的中性红溶液,继续震荡12 h,离心洗涤后,将沉淀物重新分散在I mL超纯水中,制得金杂化ZSM-5分子筛负载中性红标记的肿瘤标记物的检测抗体溶液,于4°C冰箱中储存备用;
(3)金杂化ZSM-5分子筛负载甲苯胺蓝标记的肿瘤标记物的检测抗体的制备
取I mL浓度为I mg/mL的金杂化ZSM-5分子筛水溶液与I mL浓度为10 μ g/mL的第二种肿瘤标志物的检测抗体混合,震荡12 h,离心洗涤后,继续加入I mL浓度为I mg/mL的甲苯胺蓝溶液,继续震荡12 h,离心洗涤后,将沉淀物重新分散在I mL超纯水中,制得金杂化ZSM-5分子筛负载甲苯胺蓝标记的肿瘤标记物的检测抗体溶液,于4°C冰箱中储存备用;
(4)金杂化ZSM-5分子筛负载二茂铁甲酸标记的肿瘤标记物的检测抗体的制备
取I mL浓度为I mg/mL的金杂化ZSM-5分子筛水溶液与I mL浓度为10 μ g/mL的第三个肿瘤标志物的检测抗体混合,震荡12 h,离心洗涤后,继续加入I mL浓度为I mg/mL的二茂铁甲酸溶液,继续震荡12 h,离心洗涤后,将沉淀物重新分散在I mL超纯水中,制得金杂化ZSM-5分子筛负载二茂铁甲酸标记的肿瘤标记物的检测抗体溶液,于4°C冰箱中储存备用。
[0019] 实施例5金杂化ZSM-5分子筛负载中性红、金杂化ZSM-5分子筛负载甲苯胺蓝和金杂化ZSM-5分子筛负载二茂铁甲酸标记的三个肿瘤标记物的检测抗体溶液的制备
(1)金杂化ZSM-5分子筛的制备
取0.75 gZSM-5分子筛溶于15 mL无水甲苯中,加入0.75 mL 3-氨丙基三乙氧基娃烷,在70°C下回流1.5 h。离心后于110°C下干燥I h,得到粉末为氨基功能化的ZSM-5分子筛,将75 mg氨基化ZSM-5分子筛溶于10 mL超纯水中,在搅拌下缓缓加入到150 mL金纳米粒子溶液中,溶液立即变为不透明的深紫色,离心,除去上清液,在35°C下真空干燥,得到的紫色固体粉末为金杂化ZSM-5分子筛;
(2)金杂化ZSM-5分子筛负载中性红标记的肿瘤标记物的检测抗体的制备
取I mL浓度为1.5 mg/mL的金杂化ZSM-5分子筛水溶液与I mL浓度为15 μ g/mL的第一种肿瘤标志物的检测抗体混合,震荡12 h,离心洗涤后,继续加入I 11^浓度为1.5 mg/mL的中性红溶液,继续震荡12 h,离心洗涤后,将沉淀物重新分散在I mL超纯水中,制得金杂化ZSM-5分子筛负载中性红标记的肿瘤标记物的检测抗体溶液,于4°C冰箱中储存备用;
(3)金杂化ZSM-5分子筛负载甲苯胺蓝标记的肿瘤标记物的检测抗体的制备
取I mL浓度为1.5 mg/mL的金杂化ZSM-5分子筛水溶液与I mL浓度为15 μ g/mL的第二种肿瘤标志物的检测抗体混合,震荡12 h,离心洗涤后,继续加入I 11^浓度为1.5 mg/mL的甲苯胺蓝溶液,继续震荡12 h,离心洗涤后,将沉淀物重新分散在I mL超纯水中,制得金杂化ZSM-5分子筛负载甲苯胺蓝标记的肿瘤标记物的检测抗体溶液,于4°C冰箱中储存备用;
(4)金杂化ZSM-5分子筛负载二茂铁甲酸标记的肿瘤标记物的检测抗体的制备
取I mL浓度为1.5 mg/mL的金杂化ZSM-5分子筛水溶液与I mL浓度为15 μ g/mL的第三个肿瘤标志物的检测抗体混合,震荡12 h,离心洗涤后,继续加入I 11^浓度为1.5 mg/mL的二茂铁甲酸溶液,继续震荡12 h,离心洗涤后,将沉淀物重新分散在I mL超纯水中,制得金杂化ZSM-5分子筛负载二茂铁甲酸标记的肿瘤标记物的检测抗体溶液,于4°C冰箱中储存备用。
[0020]实施例6金杂化ZSM-5分子筛负载中性红、金杂化ZSM-5分子筛负载甲苯胺蓝和金杂化ZSM-5分子筛负载二茂铁甲酸标记的三个肿瘤标记物的检测抗体溶液的制备
(1)金杂化ZSM-5分子筛的制备
取0.5 ~ I gZSM-5分子筛溶于20 mL无水甲苯中,加入I mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷,在70°C下回流1.5 h。离心后于110°C下干燥I h,得到粉末为氨基功能化的ZSM-5分子筛,将100 mg氨基化ZSM-5分子筛溶于10 mL超纯水中,在搅拌下缓缓加入到200 mL金纳米粒子溶液中,溶液立即变为不透明的深紫色,离心,除去上清液,在35°C下真空干燥,得到的紫色固体粉末为金杂化ZSM-5分子筛;
(2)金杂化ZSM-