抗氧化剂在用于血液样品中靶分子检测的方法和装置中的用图
【专利说明】抗氧化剂在用于血液样品中靶分子检测的方法和装置中的用途发明领域
[0001]本发明涉及用于在血液样品中检测至少一种靶分子的方法。本发明同样涉及抗氧化剂在血液样品中至少一种靶分子的检测的方法中的用途以及用于插入测定装置用于血液样品中至少一种革E分子的检测的药筒(cartridge)。
[0002]发明背景
体外诊断由于对更有效果和更有效率的医疗保健的增加的需求而显得日益重要。在一方面，这样的诊断检验在中央化实验室执行，集中了由专业技术人员操作的很多种仪器，而在另一方面，这样的诊断检验在实验室环境之外的即时检验场景(point-of-caresetting)执行，例如在手术室中、在医生办公室、在医院病床边、在救护车中或在患者家中。即时检验，除了快速以外，还需要是敏感的，因为对某一疾病的生物标记物检验需要在皮摩尔浓度的范围内完成检测。已经证明在夹心免疫测定(sandwich immunoassay)中使用磁性颗粒作为标签适合此目的。
[0003]为了在实验室环境外检验，检验的简洁和强劲与高易用性搭配是进一步必要的。因此，对提供具有尽可能少的用户辅助步骤(user-aided step)的即时检验场景存在强烈的需求。
[0004]发明目标和概述
本发明解决了这些需求并且提供了用于在血液样品中至少一种靶分子的快速和易用的检测的方式和方法。
[0005]上述目标具体通过包括至少以下步骤的用于在血液样品中检测至少一种靶分子的检测的方法实现:Ca)提供血液样品；(bl)将所述样品与抗氧化剂接触并且将所述样品施加到过滤器以从所述样品分离血细胞；和/或(b2)将所述样品施加到过滤器以从所述样品分离血细胞，其中所述过滤器包含抗氧化剂；(C)检测靶分子。在一个实施方案中，靶分子的检测包括步骤(Cl)在药筒腔内将所述样品与第一结合分子接触，其中所述第一结合分子连接于磁性颗粒，并且其中所述第一结合分子能够特异地结合于所述至少一种靶分子；(c2)将所述样品与第二结合分子接触，其中所述第二结合分子连接于传感器表面，并且其中所述第二结合分子能够特异地结合于所述至少一种靶分子；并且(c3)在传感器表面上检测磁性颗粒。
[0006]一个优势是在血液样品中靶分子的所述检测可以不进行离心步骤执行。样品通过过滤方式将血细胞从血液样品移除。可插入手持测定装置的一次性药筒，从而可以装备有专用过滤器，使得使用者只需要将血液样品添加至药筒中，所述药筒中已经存在全部所述检验所需的预处理和试剂。
[0007]然而，已经观察到对靶分子诸如甲状旁腺激素(PTH)，血液样品的过滤可以导致相比于通过离心获得的血浆减少的测定应答。已经发现向样品添加抗氧化剂增加了对过滤的血液样品的测定应答。特别地，本申请的实例证明了抗氧化剂的添加导致从血液和血浆中获得的检验结果约为I的相关性。这意味着通过过滤移除血细胞得到的血液与通过离心得到的血浆的测定应答是相同的。
[0008]不希望受到理论的限制，对于观察到的过滤的血液样品的测定性能降低的一种可能的解释是靶分子与过滤器和/或在过滤期间浓缩的血细胞接触后，靶分子变得被氧化并且导致更难检测，例如，不再被结合分子识别。这样，靶分子不被在样品容器中发生的测定所识别。将氧化剂添加至血液样品针对氧化作用保护了靶分子。
[0009]在本发明优选的实施方案中同时执行如上文描述的方法中的步骤(Cl)和(c2)。
[0010]在进一步的方面中本发明涉及抗氧化剂在血液样品中的至少一种靶分子的检验方法中的用途，其涉及连接于磁性颗粒的第一结合分子和连接于传感器表面的第二结合分子，其中所述第一结合分子和所述第二结合分子能够特异地结合于所述至少一种靶分子。
[0011]在还另一个方面中，本发明涉及用于插入测定装置用于在血液样品中至少一种靶分子的检测的药筒，其包括:(i)抗氧化剂和(ii)用于移除血细胞的过滤器。在一个实施方案中，所述药筒可以进一步包括(iii)连接于磁性颗粒的第一结合分子4P(iv)连接于传感器表面的第二结合分子，其中所述第一结合分子和所述第二结合分子能够特异地结合于所述至少一种靶分子。
[0012]在本发明另一个优选的实施方案中，将所述抗氧化剂并入如上文所述药筒的过滤器中。
[0013]在本发明的进一步优选的实施方案中，如上文所述药筒进一步包括还原剂。
[0014]在本发明的还另一个优选的实施方案中，如上文所述药筒用于手持测定装置中。
[0015]在本发明上文提及的方法、用途或药筒的优选的实施方案中，所述一种靶分子是甲状旁腺激素。
[0016]在本发明上文提及的方法、用途或药筒的另一个优选的实施方案中，所述抗氧化剂是酚类抗氧化剂。
[0017]在本发明上文提及的方法、用途或药筒的还另一个优选的实施方案中，所述抗氧化剂选自抗坏血酸、焦亚硫酸钠、柠檬酸钠、Trolox?,5-溴基-5-硝基-1，3- 二噁烷、乙氧基苯酚、苯基水杨酸、维生素A、维生素E、BSA、褪黑素、α -胡萝卜素、β-胡罗卜素、Aspirin?、Topanol? OC、Irganox? 1076、1nox? 220、Ethanox? 330、Cyanox? 2246 和 Irganox?1lOo
[0018]在本发明上文提及的方法、用途或药筒的进一步优选的实施方案中，所述第一结合分子是抗体或其片段。
[0019]在本发明上文提及的方法、用途或药筒的还另一个优选的实施方案中，所述第二结合分子是抗体或其片段。
[0020]在本发明上文提及的方法、用途或药筒的进一步优选的实施方案中，所述磁性颗粒具有10至1000 nm的大小。
[0021]在本发明在上文提及的方法、用途或药筒的另一个优选的实施方案中，所述磁性颗粒是超顺磁性颗粒。
[0022]在本发明在上文提及的方法、用途或药筒的还另一个优选的实施方案中，所述检测使用受抑全内反射(frustrated total internal reflect1n)实施。
[0023]附图简述图1显示了合适用于在血液样品中检测至少一种靶分子的示例性光磁装置的示意图(侧视图)。这样的装置典型地包括发射输入光束的光源(LED)、用于检测和测量输出光束的光检测器(光电探测器)和连接其上的评价单元。发射输入光束进入包括由玻璃或透明塑料制成的传感器表面的样品容器中(其典型地位于药筒中)。进一步地，所述样品容器包括用于检验的流体样品和磁性颗粒，例如，超顺磁珠，其使用结合分子功能化，用于靶分子的检测并且其可以通过上部(洗涤磁体(washing magnet))或下部磁体(结合磁体(bindingmagnet))进行磁驱动。在传感器表面存在的磁珠“阻止了”光束的全内反射，导致反射光对位于样品容器传感器表面上或邻近的磁性颗粒数量成比例的减少。
[0024]图2显示了由如在实施例1中描述的实验导致的信号变化(％)。抗氧化剂焦亚硫酸钠的添加导致了对过滤的血液样品测定应答的显著增加，导致了约为I的血液-血浆相关性。参照样品显示在没有抗氧化剂的情况下血液-血浆相关性只有约0.5。
[0025]图3显示了由如在实施例2中描述的实验导致的信号变化(％)。抗氧化剂抗坏血酸的添加导致了对过滤的血液样品测定应答的显著增加，导致了约为I的血液-血浆相关性。参照样品显示在没有抗氧化剂的情况下血液-血浆相关性只有约0.5。
[0026]实施方案详述
本发明涉及直接使用血液样品用于至少一种靶分子的检测的方法和方式。
[0027]虽然本发明将关于特定的实施方案描述，但是该描述不应解释为限制性意义。
[0028]在详述本发明示例性实施方案前，给出了对理解本发明重要的定义。
[0029]如该说明书和附加的权利要求中使用的，单数形式“一”和“一个”同样包括相应的复数，除非在上下文中有另外的明确规定。
[0030]在本发明的背景下，术语“约(about)”和“大约(approximately)”表示本领域技术人员会理解的仍保证所考虑特征的技术效果的准确性的区间。所述术语典型地指±20%、优选地±15 %、更优选地±10 %和甚至更优选地±5 %指示数值的偏差。
[0031]应当理解术语“包括(comprising)”是非限制性的。对于本发明的目的，将术语“由…组成(consisting of)”认为是术语“包含(comprising of )”的优选的实施方案。如果下文中将组定义为包括至少某一数量的实施方案，这意味着还涵盖优选地只由这些实施方案组成的组。
[0032]