同时验证在粪便中的生物标记物用于检测在胃肠道内,特别是肠内病理变化的检验试剂 ...的制作方法
【专利说明】同时验证在粪便中的生物标记物用于检测在胃肠道内，特 另IJ是肠内病理变化的检验试剂盒(组合快速检验） 发明领域
[0001] 本发明涉及商业上可应用的、成本降低的、新型检验试剂盒(组合的快速检验盒)、 体外医疗设备、侧流盒（lateral flow cassetee)、现场即时检验（point of care test)、 组合的快速检验、生物测定、快速侧流测试条、平台，用于实施用于在人和/或动物的粪 便中检测生物标记物的方法。所述检验试剂盒通过检测可以提供生理变化指示的生物 标记物、特别是在胃肠道中恶性事件(食管、胃、小肠、胆管、胰腺和结肠)、特别是肠的肿 瘤和肿瘤前体(息肉、腺瘤）的生物标记物，用于健康分析、早期检测和"结肠癌预防"。本 发明更特别地涉及用于同时执行免疫层析检测方法的组合的快速检验和组合的快速检 验盒和其组分以及需要的试剂。同时的（Synchronous)在语言学含义上是指"同步的" ("simultaneous")，但是同时的在技龙盒义上还指用于在快速检验盒中检测两种生物标记 物肿瘤M2-PK和血红蛋白的活性配对(层析条件、膜、试剂、分配速率等，见描述)的共同的最 优协调组合。
[0002] 本发明进一步涉及评估检验和结果展示(使用交通灯颜色的"风险影响方案"）的 更简单的方法。
[0003] 将组合的快速检验用于在结肠癌筛选程序中的"预过滤"先证者 ("pre-filtering" probands)。因为在先证者中实施非侵入性的组合的快速检验比执行侵 入性的结肠镜检查导致显著地有更少的焦虑，该检验导致增加的结肠镜检查的参与。
[0004] 发明背景 癌症，特别地结肠癌是在德国最常见的癌症（65, 000例新病例，27, 000例死亡)。在欧 洲，每年有200, 000人死于这种危险的疾病。由于结肠癌的起源方式，结肠癌疾病的结果可 以通过成功的筛选，即前体(息肉/腺瘤）的检测和其移除，显著地最小化。
[0005]在德国每20分钟有一人死于结肠癌。结肠癌几乎总是从肠壁（intestinal lining)(黏膜）最初的良性生长发展。癌症缓慢地生长并且罹患的人长时间不会注意到 它。通常地，症状只会在当肿瘤变大或已经转移时出现。如果未治疗，结肠癌随后通常在12 个月内导致死亡。
[0006] 因为它的起源方式，结肠癌的结果可以通过无症状的先证者的成功筛选几乎完全 地预防。前体(息肉/腺瘤)可以通过筛选措施在早期检测到。结肠镜检查被视为结肠癌早 期检测最好的方法(黄金标准)。结肠镜检查是只能由特别训练的医生(例如，胃肠病学家） 执行的侵入式方法。该过程涉及风险(例如，穿孔、麻醉的风险)。预防性的结肠镜检查由医 疗保险对年龄55岁和以上的人群覆盖。然而参与率只有2-3%，并且尽管进行了相当大的 教育努力和市场推广，"美丽世界行动"（"glamour world actions")，参与率如今甚至在下 降！除了其它之外，这一问题存在的理由是很多人发现检查的过程令人不愉快(心理抑制 阈值)。
[0007] 本发明的目的： 1.降低心理抑制阈值。 2. 增加筛选结肠镜检查的参与率。 3. 校准(去除质量差异)。 4. 标准化。 5. 增加诊断准确性。
[0008] 方案： 提供简单的、强劲的、廉价的、适合日常的侧流检验，其同样适合通过同时检测两种特 异性生物标记物（M2-PK和血红蛋白），用于检测不正常的胃肠疾病，特别是结肠癌和它的前 体。组合的快速检验是简单的并且可以容易地执行，适合用于减少鉴于筛选结肠镜检查的 心理抑制阈值。只有一种生物标记物M2-PK和/或血红蛋白的阳性诊断会导致医生实施结 肠镜检查用于进一步的诊断。会导致通过结肠镜检查的结肠癌和它的前体的更高的检测 率，因为使用先前的组合的快速检验获得了先证者的预选。因为所述组合的快速检验同时 测定结肠癌的两种重要生物标记物，该检验作为结肠镜检查前的双过滤器。
[0009] 具有其前体的结肠癌（息肉-癌症序列）在肠(黏膜）内开始并且随后扩散至组织 的其它区域(黏膜下层、肌层、浆膜)。越过黏膜边界的肿瘤生长称为早期或晚期的结肠癌。 因为粪便与肠黏膜直接接触，生物标记物可以在胃肠道中作为病理变化的指示物比在血液 中更早并且更特异地分析检测。因此，粪便样本比血液样本优选。只有当肿瘤到达黏膜下 层时，早期生物标记物在血液中是可检测的。当这些标记物在血液中可检测时，它们是结肠 癌和它的前体的"晚期"形式(" late" forms)。通常地，粪便中生物标记物的测定相比在血 液中生物标记物的测定是有利地。越早检测到癌症和它的前体，越能更好的预后。初始的 治疗(例如，治疗性结肠镜检查、"小的内脏"手术）导致早期结肠癌几乎100%的治愈。
[0010] 结肠镜检查被视为在肠中检测恶性的、特别是肿瘤过程的"黄金标准"。
[0011] 只允许特定有资格的医生实施结肠镜检查。结肠镜检查进一步的缺点是它不是标 准化的。进一步地，"错误的"先证者进行了结肠镜检查。在肠检查(结肠镜检查）期间（所 述检查是早期检测的关键组分)，约70%的诊断在正常范围内。在只有约四分之一的病例中， 诊断出前体，并且在1%的病例中，诊断出癌。因此筛选结肠镜检查是非常低效并且还是昂 贵的筛选方法，因为过多的健康先证者进行了结肠镜检查(要减少医疗成本！）。
[0012] 因此，期望在结肠镜检查前执行非侵入性的、廉价的并且敏感的、可靠的检验，其 同时测量多个生物标记物，以便使具有阳性检验结果的先证者以针对性的方式进行结肠镜 检查(减少死亡数)。通过根据本发明的非侵入性的组合的快速检验方法，在用于检测结肠 癌和它的前体的筛选程序中的参与率可以极大地增加，并且因此可以获得在患有结肠癌和 它的前体的患者（与先证者不同！）生存率的显著增加。如果及时检测到结肠癌和它的前 体，这导致患者几乎100%的康复机会。诊断：增加的M2-PK水平和/或血红蛋白水平(在既 往病例等的帮助下）导致测量"包"（a "package"of measures)的开始，并且进一步的步 骤导致结肠癌的诊断。所述诊断转而导致医生指示，例如手术治疗措施，并且这转而导致结 肠癌的治愈，例如，通过手术的治疗可以减少死亡率。
[0013]同样，在体外检验中，与全部诊断方法一样，所谓的敏感性和所谓的特异性是决定 性的质量特点。敏感性是识别像这样的患病个体的可能性。该质量测量在医学领域非常重 要，因为在早期检测测量中，当然要尽可以少的忽视患者。特异性是识别像这样的健康个人 的可能性。该测量同样在早期检测中是重要的，因为应当避免将健康的人误诊为患病，使之 得到不需要的治疗。
[0014] 现有技术水平 愈创木脂检验（Guaiac test) (gFOBT)(样本材料：奠便） 该化学的粪便检验是基于愈创树脂。通过化学氧化还原反应，将患者粪便样品中隐藏 的(潜隐的）血量检测到。因为该化学检验是基于氧化还原电位，并且氧化剂和还原剂对该 氧化还原电位干扰，这将是该检验的干扰，并且会导致低敏感性和特异性。在食物中含有氧 化剂和还原剂。因此，该检验具有