门冬氨酸鸟氨酸原料及制剂特定杂质检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药品杂质的检测方法，特别是门冬氨酸鸟氨酸原料及制剂特定杂质的检测方法。
[0002]【背景技术】:
药品从合成原料药到制备有关的制剂，再经贮藏、运输、使用，要经历一段较为复杂和漫长的过程，在此期间每一过程都可能产生杂质，如生产中可能带入起始原料、试剂、中间体、副产物和异构体等；贮藏和运输过程中可能产生降解产物、聚合物或晶型转变等特殊杂质；药品中的杂质泛指在药品的生产与储运过程中产生的工艺杂质或降解产物等。药品在临床使用中产生的不良反应除了与主成分的药理活性有关外，与药品中存在的杂质也有很大关系，药品中杂质的控制是药品研发的一个重要方面，也是临床使用安全性的保障。因此，为了保证药物的安全有效，同时也要考虑到生产实际情况，国内外在药物的研究过程中均将杂质检测作为控制药品质量的重要指标。
[0003]门冬氨酸鸟氨酸，化学名:(S)-2，5-二氨基戊酸-(S)-2-氨基丁二酸盐，是一种在体内能够分解为门冬氨酸和鸟氨酸两种组分的化合物，临床上可用于治疗因急、慢性肝病，如各型肝炎，肝硬化，脂肪肝，肝炎后综合症等引发的血氨升高及肝性脑病。中国专利CN201010204754号公开了一种采用高效液相色谱分析门冬氨酸鸟氨酸杂质的方法，该发明的方法可用于分析检测鸟氨酰胺或含杂质鸟氨酰胺的药物及其制剂的杂质鸟氨酰胺，由于药品的杂质具有个性化的特征，不同的药品具有不同的杂质谱，同一药品由于生产工艺的不同也可能具有不同的杂质谱。门冬氨酸鸟氨酸的合成路线较多，所涉及的起始原料及中间体均不尽相同，因此专利CN20101020475所提供的方法不可能适用所有工艺路线制备的门冬氨酸鸟氨酸的杂质的检测。也就是说采用不同工艺路线制备的门冬氨酸鸟氨酸均需有适合其杂质检测的方法。解决这一问题已成为急需。
[0004]
【发明内容】
:
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种准确地分析检测本发明确定的合成工艺制备的门冬氨酸鸟氨酸可能含有的杂质:含富马酸、精氨酸、尿素、丁二酸、苹果酸、内酰胺的药物或其制剂中的杂质高效液相分析检测方法。门冬氨酸鸟氨酸中杂质的检测方法是:
(1)取门冬氨酸鸟氨酸样品，加流动相稀释为样品溶液；
(2)取样品溶液，注入高效液相色谱仪中进行检测，即可；其中，色谱条件如下:
色谱柱:以氨基键合硅胶(250 X 4.6mm，5 μ m)为填充剂的色谱柱；流动相:以0.05mol/
L磷酸二氢钾-乙腈(53:47);紫外检测波长:205土 2nm。柱温为30°C ；
其中，流动相以0.05mol/L磷酸二氢钾-乙腈(53:47)时，杂质分离度最佳，各杂质间不重叠，可有效检测各个杂质的限量；
进一步地，步骤(2)中，所述流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾-乙腈；
更进一步地，所述流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾-乙腈、0.05mol/L磷酸二氢钠-乙腈、0.05mol/L磷酸氢二钾或0.05mol/L磷酸氢二钠-乙腈，优选0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液； 进一步地，步骤(2)中,所述色谱柱的型号为250X4.6mm, 5 μ m ；
进一步地所述色谱柱为Kromasil 100_5NH2 ；
进一步地，步骤(2)中，流动相的流速为0.8?1.2ml/min ;色谱柱的柱温为20?30°C;优选地，步骤(2)中，流动相的流速为l.0ml/min。该流速条件下，各杂质之间、杂质与门冬氨酸鸟氨酸主峰之间的分离度最佳，更便于对峰面积的积分计算；进一步地，步骤(I)中，所述门冬氨酸鸟氨酸为门冬氨酸鸟氨酸注射液。本发明提供的检测方法，能够将门冬氨酸鸟氨酸中的各杂质有效地分离，且分离度良好，从而能够更准确的计算出不同杂质的含量，为门冬氨酸鸟氨酸杂质的进一步监测、研究提供了可能。
[0005]【附图说明】:
图1为实施例1杂质谱HPLC色谱图；
图2为实施例1门冬氨酸鸟氨酸色谱图；
图3为实施例2杂质谱HPLC色谱图；
图4为实施例3杂质谱HPLC色谱图；
图5为实施例4杂质谱HPLC色谱图；
图6为实施例5杂质谱HPLC汇总色谱图。
[0006]【具体实施方式】:
本发明的实施例1，
试验器材及试剂:试验仪器:色谱柱:Kromasil 100-5NH2, 250X4.6mm, 5 μ m,紫外检测器；检测波长:205nm (误差范围为2nm，即检测波长在203?207nm，均落入本发明保护范围；柱温:20?30°C ;进样体积:20μ I。
[0007]门冬氨酸鸟氨酸中杂质的检测方法是:
流动相:0.05mol/L磷酸二氢钾-乙腈(53:47)；
流速:1.0ml/min。测定步骤:
取门冬氨酸鸟氨酸，加流动相制成每Iml中含5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取0.5ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；另取富马酸、精氨酸、尿素、丁二酸、苹果酸、内酰胺各适量，精密称定，分别加流动相溶解并稀释制成5 μ g/ml、
5μ g/ml>20 μ g/ml、100 μ g/ml、100 μ g/ml>5 μ g/ml 的溶液,作为杂质对照品溶液。
[0008]结论:门冬氨酸鸟氨酸分离出富马酸、精氨酸、尿素、丁二酸、苹果酸、内酰胺六个杂质，杂质分离度均符合要求。结果如图2。
[0009]本发明所述门冬氨酸鸟氨酸合成反应式:
操作工艺是:A，粗品的制备
(1)IL反应釜中，将200gL-鸟氨酸醋酸盐溶于400ml去离子水中。分三批加入117gL-天门冬氨酸,搅拌约30min ；
(2)反应混合物在搅拌下滴加氨水(约80ml)，调节pH=8.0±0.2 (pH计)；
(3)将反应混合物升温到60°C，搅拌下小心加入20g活性炭，脱色约20min。热过滤，除去活性炭，滤饼用少量的热水洗；
(4)滤液抽入3L反应釜中，升温到70—80度。在此温度下搅拌滴加1.8L甲醇(有白色固体，随之溶解)；
(5)滴加完后在此温度搅拌反应约15min。撤去热浴，搅拌下开循环水降温析晶3h(室温)，有大量白色固体析出。离心，固体用体积比为5:1的甲醇和水300m