一种麻附甘药物双酯型生物碱的含量测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药品，具体涉及一种麻附甘药物附子生物碱的含量测定方法，属药品
技术领域。 技术背景
[0002] 麻附甘制剂是麻黄附子甘草汤方制成制剂的简称，由附子、麻黄、甘草组成，其处 方出于《伤寒论》，具有解表散寒，固本通阳的功效，主治少阴病，恶寒身疼，无汗，微发热，脉 沉微者。
[0003] 附子所含生物碱主要有双酯类生物碱，单酯类生物碱和胺基醇类生物碱。现代研 宄表明双酯型生物碱（新乌头碱、次乌头碱、乌头碱）是毒性成分，现公开的测定双酯型生 物碱的含量测定方法很多，但都不适合于本麻附甘药物的测定，无法在生产和使用中有效 的保证产品的安全性。
[0004] 《中国药典》2010年版一部中采用的高效液相色谱法测定附子药材中双酯型生物 碱，经过反复试验发现，该法测定"麻附甘药物"中双酯型生物碱含量，杂质分离效果较差， 新乌头碱、次乌头碱、乌头碱拖尾较高，阴性存在明显干扰。
[0005] 现有技术双酯型生物碱含量测定方法还有： 薄层色谱法：在一定的波长下用紫外或是可见光照射薄层板，在薄层板上对紫外或可 见光有吸收的物质就会产生相应的斑点，对其进行扫描，扫描得到的图谱和积分值可用做 药材的质量检查。该法可同时分析多个样品，展开剂用量少、选择多，样品处理简单；缺点是 精密度低，限度控制灵敏度低，重复性差。
[0006] 高效毛细管电泳法：该法具有分离时间短、杂质干扰少、使用有机溶剂少、操作简 便等优点；分离能力较弱，对PH值要求较高，重现性差。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是为了提供一种麻附甘药物双酯型生物碱的含量测定方法，本发明 杂质与附子中双酯型生物碱分离效果好，阴性无干扰，新乌头碱、次乌头碱、乌头碱分离度 均大于1. 5,线性、检测限、耐用性均良好。
[0008] 本发明的目的通过以下技术方案实现： 本发明所述的一种麻附甘药物双酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：用高效液 相色谱法测定附子中双酯型生物碱含量，流动相按时间进行梯度洗脱，采用加样法进行测 定。
[0009] 本发明所述的一种麻附甘药物双酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：以乙 腈：四氢呋喃（20 :20至30 :10)为流动相A，以含0. 02%-0. 3%磷酸的0. 01-0. 05mol/L磷酸 二氢钾溶液为流动相B，按时间进行梯度洗脱，0分钟至80分钟流动相B由90%至70%，检测 波长为222-242nm，理论板数按乌头碱峰计算应不低于8000。
[0010] 对照品溶液制备：取新乌头碱对照品、次乌头碱对照品、乌头碱对照品适量，精密 称定，分别加乙腈制成每1ml含0. 05-0. 5mg的溶液，作为对照品贮备液，精密量取上述三种 对照品贮备液各5ml，置50ml量瓶中，加0. 1%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
[0011] 固相萃取柱系统适用性试验：精密量取对照品贮备液各3ml，混匀，室温减压回收 至干，残渣精密加入〇. lmol/L盐酸溶液50ml使溶解，精密量取5ml，置于处理好的固相萃 取柱上，以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂，150-200mg，容量为4-10ml，预先依次用 乙腈、水各6ml洗脱，依次以0. lmol/L盐酸溶液、甲醇、乙腈各5ml洗脱，弃去洗脱液，放置 5分钟，继用乙腈：浓氨试液（90 :10)的混合溶液IOml洗脱，收集洗脱液，于40°C以下减压 回收溶剂至干，残渣精密加入乙腈：〇. 1%磷酸溶液（30 :70)的混合溶液3ml使溶解，滤过， 取续滤液作为固相萃取柱系统适用性试验溶液。
[0012] 分别精密吸取上述固相萃取柱系统适用性试验溶液和对照品溶液各5-30 μ 1，注 入液相色谱仪，测定，计算系统适用性试验溶液和对照品溶液各相应成分峰面积比值，不得 小于0. 95。
[0013] 供试品溶液的制备：取检品，称取0. 5-5g，置具塞锥形瓶中，加乙腈：浓氨试液 (90 :10)的混合溶液25ml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液于40°C以下减压回收溶剂至干， 残渣加0. lmol/L盐酸溶液IOml使溶解，滤过，照固相萃取柱系统适用性试验项下的方法， 自"置于处理好的固相萃取柱上"起，依法操作，得供试品溶液，量取对照品溶液与供试品溶 液配制成分别含新乌头碱、次乌头碱、乌头碱2-18 μ g/ml的混合溶液。
[0014] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与混合溶液各5-30 μ 1，注入液相色谱仪，测 定，即得。
[0015] 本发明所述的一种麻附甘药物双酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：以乙 腈：四氢呋喃（20 :20至30 :10)为流动相Α，以含0. 02%-0. 3%磷酸的0. 01-0. 05mol/L磷酸 二氢钾溶液为流动相B，按时间进行梯度洗脱，0分钟至80分钟流动相B由90%至70%。
[0016] 本发明所述的一种麻附甘药物双酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：所用 固相萃取柱填料为混合型阳离子交换反相吸附剂，规格为100-200mg，容积为4-8ml，并预 先依次用乙腈、水各6ml洗脱处理。
[0017] 本发明所述的一种麻附甘药物双酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：检品 溶液加在固相萃取柱上后，依次以0. lmol/L盐酸溶液、甲醇、乙腈各5ml洗脱，弃去洗脱液， 放置5分钟，继用乙腈：浓氨试液（90 :10)的混合溶液IOml洗脱，收集洗脱液。
[0018] 本发明所述的一种麻附甘药物双酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：固相 萃取柱系统适用性试验中试验溶液与对照品溶液中三种双酯型生物碱峰面积的比值不得 小于0. 95。
[0019] 本发明所述的一种麻附甘药物双酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：混合 溶液中对照品溶液：供试品溶液的比例为10% :90%至90% :10%。
[0020] 本发明提供了根据特定的处方制备的麻附甘药物中双酯型生物碱的含量测定方 法；本发明与现有技术的区别在于采用了不同的梯度洗脱程序，排除了阴性对双酯型生物 碱测定的干扰，其目标成分分离度、峰形、拖尾因子均有了显著改