一种鉴定判别白肋烟品种特异性、一致性和稳定性的方法
【专利说明】-种鉴定判别白肋烟品种特异性、一致性和稳定性的方法
[0001]
技术领域
[0002] 本发明涉及烟草品种鉴定判别方法，具体涉及一种鉴定判别白肋烟品种特异性、 一致性和稳定性的方法。
[0003]
【背景技术】
[0004] 白肋烟是生产混合型卷烟不可缺少的原料，而品种又是决定烟叶品质的内在因 素，我国已培育出一些适宜不同区域种植的优良品种，并在生产上逐步推广。白肋烟属于自 花授粉的经济作物，目前存在品种被引种并繁殖的现象，既侵犯了品种所有者的利益，也导 致了白肋烟品种出现混杂，对白肋烟育种工作产生了较大破坏，直接影响白肋烟的持续发 展。
[0005] 新品种的特异性、一致性和稳定性测试是新品种保护的技术基础和授权的科学依 据。经检索，涉及烟草品种鉴定判别的中国专利申请件仅201110408448. 3号《一种鉴别 烟草品种的SCAR标记引物及其方法》，是针对烤烟的生物分子技术方法。至今未见对白肋 烟品种鉴别的系统技术方案。
[0006] 关于作物新品种的特异性、一致性和稳定性的判别方法，一般都包括确定测试性 状、制定性状分级标准、确定标准品种、筛选近似品种、设计田间试验、观测和分析测试性 状、判别一致性、稳定性和特异性这些步骤，但不同的作物，其确定的测试性状、制定的性状 分级标准、确定的标准品种、田间试验方法等是不同的，因而新品种一致性、稳定性和特异 性的判别方法也有所差异。在烟草上，目前已经有关于烤烟新品种的特异性、一致性和稳定 性的测试指南，但至今还没有白肋烟新品种的特异性、一致性和稳定性的测试方法。
[0007]
【发明内容】
[0008] 技术问题：本发明提供一种能够准确鉴定白肋烟品种，为白肋烟品种授权提供准 确依据，减少了田间工作量，增加试验准确性的鉴定判别白肋烟品种特异性、一致性和稳定 性的方法。 技术方案：本发明的鉴定判别白肋烟品种特异性、一致性和稳定性的方法，具体步骤如 下： (1)确定测试性状：对现有白肋烟品种资源的植物学性状、农艺性状、抗病性状、经济性 状、品质性状进行重复鉴定，每份品种资源至少进行3个生长周期的鉴定，筛选出45个性状 作为测试性状，包括27个必测性状和18个补充性状； 所述必测性状即为每个需要鉴定判别的测试品种必须进行观测、描述的基本性状，包 括15个质量性状和12个数量性状，所述质量性状具体包括：株型、叶形、叶色、叶柄、叶耳、 叶面、叶缘、叶尖、叶肉组织、叶片厚度、主脉粗细、茸毛、成熟特征、花色、花序特征，所述数 量性状具体包括：自然株高、打顶株高、着生总叶数、有效叶数、节距、茎围、腰叶长、腰叶宽、 顶叶长、顶叶宽、茎叶角度、大田生育期； 所述补充性状即在上述必测性状不能区别测试品种和近似品种时，仍需进一步测试而 选用的性状，包括10个质量性状和8个数量性状，所述质量性状具体包括：苗色、苗期生 长势、大田生长势、腋芽生长势、原烟颜色、原烟身份、原烟叶片结构、原烟叶面状态、原烟光 泽、原烟颜色强度，所述数量性状具体包括：中心花开放期、黑胫病抗性、青枯病抗性、赤星 病抗性、TMV抗性、PVY抗性、亩产量、中部叶烟碱含量； (2) 制定性状分级标准：将步骤（1)中确定的测试性状的每个性状根据其在步骤（1)的 重复鉴定中的表达范围划分为2-6种状态，每一种状态对应一个相应的数字代码，称为一 个级别； (3) 确定标准品种：从所述步骤（1)重复鉴定的品种资源中，依据各品种资源在重复 鉴定中的性状表现的典型性，筛选出36个具备广泛代表性的已知品种作为标准品种，以 用于性状分级的参照标准、辅助判断试验的可靠性，具体包括：BanketA-l、Burley21、 Burley27、Burley29、Burley34、BurleyWloski、Gold.no.Burley、Greeneville17A、 K14(BY14)、K21(BY21)、Kentucky12、Kentucky14、Kentucky24、Kentucky56、Kentucky 8959、KBM20、KY17 (少叶）、L-8、S?K、Tennessee90、Virginia509、Virginia1013、 Virginia1048、Virginia1053、WhiteBurley5、白肋 162、鄂白 99-2-4、鄂烟 101、鄂烟 1 号、鄂烟211、鄂烟4号、鄂烟5号、鹤峰黄烟、牡晒82-38-5、日本白肋、省白肋窄叶；选择与 所述步骤（2)中划分的级别相对应的标准品种，得到各性状、级别代码和标准品种的对应关 系； (4) 筛选近似品种：根据选育单位提供的待鉴定判别测试品种的性状描述资料，从现有 白肋烟品种资源中选取1~5个品种，作为与测试品种进行比较的品种即近似品种；所述近 似品种的选取标准为：待鉴定判别测试品种的所用亲本，或用其亲本之一培育出的其他品 种； (5) 设计田间试验：进行连续2~3个相同季节的生长周期测试，每个生长周期测试都 将待鉴定判别的测试品种、所述步骤（4)中筛选的近似品种和所述步骤（3)中确定的标准 品种一起等行距种植，采用随机区组设计，设置3次重复或4次重复，每个小区的种植株数 不少于60株；测试地点的条件需要满足测试品种、近似品种和标准品种植株的正常生长及 其性状的正常表达； (6) 观测和分析测试性状：按照植物的生长进程，对所述步骤（1)中确定的测试性状进 行观测，用步骤（2)中确定的性状级别对应的标准品种的性状状态分别对待鉴定判别的测 试品种和步骤（4)中筛选的近似品种的各性状的表现状态进行描述； (7) 判别测试品种的一致性：首先采用2%的群体标准和95%的可接受概率对测试品种 的一致性进行初步判别：若步骤（5)中每个小区种植株数为60株，而测试品种每个小区非 典型株超过3株，则直接判定测试品种不具备一致性；否则进一步通过必测性状的以所述 步骤（2)和（3)中代码为分析单元计算的变异度来判别：每个小区观察测定15株，若测试 品种某性状的变异度不超过5%，或者测试品种某性状的变异度不超过标准品种在该性状上 的变异度，则判定测试品种在该性状上表现一致，否则判定为不一致； (8) 判别测试品种的稳定性：在连续2~3个生长周期的测试结果中，如果测试品种同 一性状的表现处于步骤（2)和（3)中所述代码的同一代码内，或者第二次或第三次测试的 变异度与第一次测试的变异度无显著差异，则表示该测试品种在此性状上是稳定的，否则 为不稳定，以连续2~3个生长周期的测试结果评价测试品种的稳定性采用95%的接受概 率； (9) 若所述步骤（7)和（8)的测试结果显示测试品种没有一致性和稳定性，则直接地判 定该测试品种不具有特异性，否则按照如下方法判别测试品种的特异性：通过比较测试品 种与步骤（4)中筛选的近似品种的所有必测性状上的差异进行评价，具体判定方法是：当 测试品种至少在1个质量性状或者数量性状上与近似品种具有明显且一致的差异时，或者 至少有两个数量性状的性状表达与近似品种处于不同的步骤（2)和（3)中所述的代码时， 即判定测试品种具有特异性；对于质量性状，如果测试品种和近似品种的性状表达处于不 同的代码，则认为两个品种在该性状上具有明显差异；对于数量性状，如果测试品种和近似 品种的性状表达相差2个及2个以上代码，即判定两个品种在该性状上具有明显差异；如果 测试品种和近似品种的某个数量性状表达处于同一个代码或者处于相邻的不同代码，而两 个品种的该数量性状的算术平均值在95 %水平上存在显著差异，也判定两个品种在该性状 上具有明显差异；若采用必测性状不能区别测试品种和近似品种时，则进一步采用补充性 状按上述方法判别测试品种的特异性；所述一致的差异是指在2~3个独立的生长周期中， 观测到的性状差异具有重现性。
[0009] 本发明方法的优选方案中，步骤（1)中的质量性状是指以不连续状态表达的性状， 或者性状表达范围至少部分是连续的，但其变异范围是多维的性状；所述数量性状是指性 状表达包括了从一个极端到另一个极端之间的整个变异范围的性状。
[0010] 本发明方法的优选方案中，步骤（3)中得到的各性状、级别代码和标准品种的对应 关系为：
[0011] 本发明方法的优选方案中，步骤（5)中参试种子未做影响植株正常生长和性状表 达的处理，需为同一批次。
[0012] 本发明方法的优选方案中，步骤（6)中的性状观测包括群体测量、个体测量、群体 目测和个体目测，在必测性状中，除大田生育期外，均为个体目测或测量的性状，在补充性 状中，每个性状均为群体目测或测量的性状；每个需要个体目测或测量的性状在每个小区 的观察分析株数为15个单株；根据每个测试性状的特点不同而采用不同的描述方法，对于 质量性状描述