一种肺炎支原体及肺炎衣原体抗体检测的加样方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物学技术领域，具体涉及一种肺炎支原体及肺炎衣原体抗体检测的 加样方法。
【背景技术】
[0002] 目前肺炎衣原体IgG(Cpn-IgG)抗体、肺炎支原体IgG(MP-IgG)抗体的检测多采 用常规加样方法，即在加样端(样品垫处）先后加入待测样本和样本稀释液，该方法的样本 用量大，多达30ML，尤其不适合老年人、儿童等取血困难人群。
[0003] 目前市面上取得注册证的同类产品较多，大部分检测介质只能是血清或血浆或全 血或其中两种，而不同条件下检测所需的样本类型不尽相同，或者现有患者检测样本不能 满足检测试剂对样本的要求时须重新采集样本，这样会造成患者再次取血伤害，特别是针 对老年人、儿童等取血困难人群。
[0004] 综上，寻找一种新的所需样本用量尽可能少的加样方法，研宄血清、血浆、全血样 本均可检测的检测试剂，对于满足不同人群及检测环境的要求非常重要。
【发明内容】
[0005] 为解决上述问题，本发明提供了一种肺炎支原体及肺炎衣原体抗体检测的加样方 法，其中，肺炎衣原体IgG(Cpn-IgG)抗体、肺炎支原体IgG(MP-IgG)抗体的检测采用膜加 样法，加样步骤如下： (1) 用移液器取1. 5 y 1血清/血浆或2 y 1全血样本； (2) 移动移液器枪头，使其垂直加于样本加样处； (3) 操控移液器枪头轻轻碰到样本加样处膜表面，以便顺利加样； 在上述步骤中，同等条件下，可使用一次性塑料加样环代替移液器枪头进行加样。
[0006] 使用一次性塑料加样环加样的步骤如下： (1) 用加样环取1. 5 y 1血清/血浆或2 y 1全血样本； (2) 将一次性塑料加样环垂直加于样本加样处； (3) 将一次性塑料加样环的环形体完全浸入样本中，环形体垂直轻触样本加样处膜表 面，使其渗吸样本； (4) 观察样本加样膜，加样膜表面有润湿的痕迹，提示加样成功。
[0007] 优选的，所述样本加样膜为硝酸纤维素膜。
[0008] 进一步的，在步骤2中，所述的样本加样处为硝酸纤维素膜上的固定点。
[0009] 本发明中，肺炎支原体IgG(MP-IgG)抗体、肺炎衣原体IgG(Cpn-IgG)抗体的检 测采用膜加样法，加样量仅为1. 5-2 y 1。本发明采用的样品垫经特殊处理，血清、血浆、全血 样本均可检测，满足了不同人群的需要，尤其是老年人、儿童等取血困难人群。
[0010] 该发明的有益之处是：本发明大大减少了样本用量，实现了末梢血检测，方便患者 取血。血清、血浆、全血样本均能检测，满足了不同人群及检测环境的需求。
【具体实施方式】
[0011] 下面，结合【具体实施方式】，对本发明做进一步描述： 本发明方法的技术方案是：本发明提供了一种肺炎支原体及肺炎衣原体抗体检测的加 样方法，其中，肺炎衣原体IgG (Cpn-IgG)抗体、肺炎支原体IgG (MP-IgG)抗体检测的加样 步骤如下： (1) 用移液器取1. 5 y 1血清/血浆或2 y 1全血样本垂直加于样本加样处； (2) 加样时，移液器枪头须轻轻碰到膜，以便顺利加样； (3) 同等条件下，当使用一次性塑料加样环加样时，其环形体须完全浸入样本，然后将 环形体垂直轻触试剂加样处的膜表面以渗吸样本，加样处的膜表面有润湿的痕迹，方提示 加样成功。
[0012] 本发明采用膜加样法，即用移液器取1. 5 y 1血清/血浆或2 y 1全血样本垂直 加于样本加样处(硝酸纤维素膜上固定位置)，加样时移液器枪头须轻轻碰到膜以便顺利加 样。这种加样方法大大减少了样本用量，由原来的10-30 y 1降至1. 5-2 y 1，实现了末梢血 检测，方便患者取血。血清、血浆、全血样本均能检测，满足了不同人群及检测环境的需求。
[0013] 本发明采用的样品垫经特殊处理，血清、血浆、全血样本均可检测。其具体表现为， 本发明采用的样品垫为经过特殊处理的玻璃纤维，其过程中所用到的主要成分为：三羟甲 基氨基甲烧1. 21g、氯化钠8g、牛血清白蛋白8g、曲拉通X-1001mL、叠氮钠1. 5g、鹿糖40g、 超纯水定容至1L。经该试剂处理过的样品垫，能有效保持较佳底色（即全血血细胞过滤情 况)、快速的毛细迀移速度（即玻璃纤维的爬升时间)，且降低了假阳率。
[0014] 下面提供本发明中几种抗体检测的临床实验数据，以直观了解本发明相对于现有 方法的优势。
[0015] 临床： 试验方法：待验证的产品为同类产品中已有批准上市，试验方法选择方法学对比试验。 抽取1000例临床血清样本，采用参比试剂和考核试剂盲法同步检测，对二者检测结果不一 致的样本用第三方试剂确证，对检测结果进行统计分析，计算阴性符合率、阳性符合率及总 符合率。
[0016] 抽取100例同一病人的血清/血浆/全血样本，全血/血浆检测结果以同一病人 的血清检测结果为对照，对检测结果进行统计分析，计算阴性符合率、阳性符合率及总符合 率，通过卡方检验比较二者的差异性，研宄血清和血浆、全血检测结果的一致性，验证本试 剂可用于血浆、全血样本检测。
[0017] 抽取100例干扰因素及交叉反应血清/血浆/全血样本，以第三方检测结果作为 对照，验证试剂特异性。
[0018] 结论：1000例血清样本中，考核试剂与参比试剂的阳性符合率为97. 94%，阴性符 合率为98. 94%，总符合率为98. 60%，并对检测结果不一致的标本用第三方试剂进行了检 测。经卡方检验，考核试剂与参比试剂不存在显著性差异，表明考核试剂与参比试剂具有较 高的一致性。100例血清/血浆/全血一致性比对试验中，全血/血浆样本与血清样本的阳 性符合率为100%，阴性符合率为100%，总符合率为100%，表明血清和血浆、全血检测结果一 致，本试剂可用于血浆、全血样本检测。100例干扰因素及交叉反应样本中，考核试剂与第三 方检测结果一致，不与副流感病毒(混合)、肺炎支原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒 A型、流感病毒B型发生交叉反应，不受高脂血、溶血、高胆红素、类风湿因子影响。
[0019] 1、考核试剂与参比试剂结果分析 表1考核试剂和参比试剂结果
考核试剂与参比试剂阳性符合率=332八332+7) X 100%=97. 94% 考核试剂与参比试剂阴性符合率=65V(7+654) X 100%=98. 94% 考核试剂与参比试剂总符合率=(332+654)/ (332+7+7+654) X100%=98. 60% 14例考核试剂与参比试剂结果不符合样本经第三方试剂确认，7例与考核试剂相符，7 例与参比试剂相符。
[0020] 考核试剂最终阳性符合率99. 11% ; 考核试剂最终阴性符合率99. 40% ; 考核试剂最终总符合率99. 30%。
[0021] 2、全血/血浆样本检测与血清样本检测结果统计分析 表2全血/血浆样本检测与血清样本检测结果
全血/血浆样本与血清样本的阳性符合率=50/ (50+0) X 100% =100% 全血/血浆样本与血清样本的阴性符合率=50/ (0+50) X100%=100% 全血/血浆样本与血清样本的总符合率=(50+50)/ (50+0+0+50) X100%=100% 通过对100例同一病人的血清和血浆、全血样本一致性比对研宄，表明血清、血浆和全 血检测结果一致，本试剂可用于血浆、全血样本检测。
[0022] 3、干扰因素及交叉反应样本结果统计分析 通过对高脂血样本、溶血样本、高胆红素样本、副流感病毒(混合）阳性样本、类风湿因 子阳