同时高效提取桃果肉中可溶性糖和有机酸的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及到一种同时提取桃果肉中可溶性糖和有机酸的方法，属于化学工业中 的化学分析及仪器分析技术领域。
【背景技术】
[0002] 在实践中，对果实的可溶性糖和有机酸进行分离测定时，可溶性糖和有机酸基本 都是分别提取的，且基本都是通过纯水或一定浓度的乙醇或甲醇水溶液来提取，同时大多 数提取条件都是附加了加热的条件，即水浴75-KKTC不等。也有少数文献报道了利用纯水 或一定浓度的乙醇水溶液（多为80%乙醇）同时提取可溶性糖和有机酸（如文献《1-MCP 对凯特杏果实采后糖酸组分与含量的影响》；《不同品种苹果果实中糖酸组成与含量分析》 等），选择了直接提取或者冰浴或热浴的方式提取，操作繁杂，条件苛刻，而且都是在中性条 件下进行的，还未有文献对同时提取时的提取剂添加酸性物质进行pH的调整。
[0003] 考虑到在实践中，对大量的试验样品进行分离测定时，分别提取可溶性糖和有机 酸不仅浪费材料，而且耗时耗力；进行冰浴或者热浴提取条件也比较苛刻，所以如果能实现 在常温下能同时高效提取是最佳策略；但是目前为止，还未有文献提出可以实现同时高效 提取果实中的可溶性糖和有机酸的方法。
[0004] 另外，在实践中，用常规的纯水或者乙醇水溶液作提取剂时，特别是纯水作为提取 剂时，加入提取剂后，在常温下不到一周就会发生蔗糖的降解或者发酵等，样品破坏，严重 影响后续试验的进行，拖慢研究进度。目前该问题只能利用-20°c冷冻储藏或者加快测定的 方式来避免，可是当样品量太多时，这些处理方式已经无法满足现实需求。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种同时高效提取桃果肉中可溶性糖和有机酸的方法。
[0006] 为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种同时高效提取桃果肉中可溶性 糖和有机酸的方法，其步骤包括：
[0007] a、配制提取剂，提取剂为：乙醇：0. 4%偏磷酸水溶液=80:20V/V;
[0008] b、称取桃果肉，按料液比1:16加入提取剂，超声波辅助提取lh后，离心，取上清液 用浓缩仪浓缩至干燥，加超纯水溶解制得可溶性糖和有机酸溶液。
[0009] 作为本发明优选的技术方案，步骤a中配制提取剂的步骤为：准确称取4g偏磷酸， 用1L超纯水溶解定容，制得浓度为0. 4%偏磷酸水溶液；分别移取800ml无水乙醇和200ml 0. 4%偏磷酸水溶液，混合得到提取剂乙醇：0. 4%偏磷酸水溶液=80:20V/V。
[0010] 作为本发明优选的技术方案，其步骤b中离心条件为：4°C下lOOOOrpm离心 lOmin;制得的可溶性糖和有机酸溶液经0. 22_水系滤头过滤。
[0011] 作为本发明优选的技术方案，测定的可溶性糖包括蔗糖、葡萄糖、果糖和山梨醇； 测定的有机酸包括奎尼酸、苹果酸和柠檬酸。
[0012] 作为本发明优选的技术方案，还包括步骤c、在色谱条件下分别对样品溶液进行可 溶性糖和有机酸的高效液相色谱分析；
[0013] 测定可溶性糖的色谱条件为：
[0014] 色谱柱：CH0620糖柱；
[0015] 流动相：超纯水；
[0016] 流速：0? 5mL/min；
[0017] 柱温：8(TC;
[0018] 进样量：5yL;
[0019] 时间：20min;
[0020] 检测器：RID;
[0021] 测定有机酸的色谱条件为：
[0022] 色谱柱：C18柱；
[0023] 流动相：0? 4 %偏磷酸水溶液；
[0024] 流速：0? 5mL/min；
[0025] 柱温：25°C;
[0026] 进样量：5yL;
[0027] 时间：20min;
[0028] 检测器：VWD。
[0029] 本发明首次公开了一种同时高效提取桃果肉中可溶性糖和有机酸的方法，利用乙 醇：0. 4%偏磷酸水溶液=80:20V/V作为提取剂，提取剂的pH值为4. 1，无需冰浴或者热浴 等外加条件，即可实现常温下的同时高效和全面地提取桃果肉中的可溶性糖和有机酸，对 可溶性糖的提取效率高达98 %，对有机酸的提取效率高达96 %，而且该提取剂可减缓提取 液中蔗糖的降解，可放置4周也不明显降解转化，不影响后续实验结果的可靠性，大大节约 了材料，时间和成本。确定的提取思路可用于同时提取其它水果和蔬菜中的可溶性糖和有 机酸。
【附图说明】
[0030] 图1为实施例1中'霞晖8号'品种果肉样品中可溶性糖的HPLC图，其中1.蔗糖； 2.葡萄糖；3.果糖；4.山梨醇。
[0031] 图2为实施例1中'霞晖8号'品种果肉样品中有机酸的HPLC图，其中1.奎尼酸 2.苹果酸；3.柠檬酸。
[0032] 图3为实施例2中'霞晖8号'品种果肉加入提取剂乙醇：0. 4%偏磷酸水溶液= 80:20V/V后放置4周后的样品中可溶性糖的HPLC图，其中1.蔗糖；2.葡萄糖；3.果糖； 4.山梨醇。
[0033] 图4为对比例1中'霞晖8号'品种果肉样品中可溶性糖的HPLC图，其中1.蔗糖； 2.葡萄糖；3.果糖；4.山梨醇。
[0034] 图5为对比例1中'霞晖8号'品种果肉样品中有机酸的HPLC图，其中1.奎尼酸； 2.苹果酸；3.柠檬酸。
[0035] 图6为对比例2中'霞晖8号'品种果肉加入提取剂乙醇：水=80:20V/V后放置 1周后的样品中可溶性糖的HPLC图，其中1.蔗糖；2.葡萄糖；3.果糖；4.山梨醇。
[0036] 图7为对比例3中'霞晖8号'品种果肉样品中有机酸的HPLC图，其中1.奎尼酸； 2.苹果酸；3.柠檬酸。
【具体实施方式】
[0037] 试剂与设备：
[0038] 乙醇、偏磷酸均为分析纯。
[0039] 超声波清洗器，离心机，Agilent高效液相色谱系统：1100系列，RID和VWD检测 器，C18和CH0650色谱分析柱。
[0040] 实施例1
[0041] a、准确称取4g偏磷酸，用1L超纯水溶解定容，制得浓度为0. 4%偏磷酸水溶液； 分别移取800ml无水乙醇和200ml0. 4%偏磷酸水溶液，混合得到提取剂乙醇：0. 4%偏磷 酸水溶液=80:20V/V;
[0042] b、准确称取0. 5g'霞晖8号'品种成熟果实果肉，加入8mL提取剂，超声波提取lh， 4°C下lOOOOrpm离心lOmin，取上清液经0. 22mm水系滤头过滤后得到样品溶液；
[0043] c、在色谱条件下分别对样品溶液进行可溶性糖和有机酸的高效液相色谱分析，得 到如图1所示的可溶性糖的HPLC图，和如图2所示的有机酸的HPLC图。并计算出各种有 机酸的含量见表1，可溶性糖的含量见表2。3次重复取均值。
[0044] 测定可溶性糖的色谱条件为：
[0045] 色谱柱：CH0620糖柱；
[0046] 流动相：超纯水。
[0047] 流速：0? 5mL/min；
[0048] 柱温：8(TC;
[0049] 进样量：5liL;
[0050] 时间：20min;
[0051]检测器：RID;
[0052] 测定有机酸的色谱条件为：
[0053] 色谱柱：C18柱；
[0054] 流动相：0. 4 %偏磷酸水溶液；
[0055] 流速：0? 5mL/min；
[0056] 柱温：25°C;
[0057] 进样量：5yL;
[0058] 时间：20min;
[0059] 检测器：VWD。
[0060] 实施例2
[0061] a、准确称取4g偏磷酸，用1L超纯水溶解定容，制得质量浓度为0. 4%偏磷酸水溶 液；分别移取800ml无水乙醇和200ml0. 4%偏磷酸水溶液，混合得到提取剂乙醇：0. 4%偏 磷酸水溶液=80:20。
[0062] b、准确称取0. 5g'霞晖8号'品种成熟果实果肉4份，分别加入8mL提取剂乙醇： 0.4%偏磷酸水溶液=80:20V/V，在常温下静置。分别放置1周、2周、3周和4周后，4°C下 lOOOOrpm离心lOmin，取上清液经0. 22mm水系滤头过滤后得到