双浊点萃取-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定食品中的硒的方法
【专利说明】双浊点萃取-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定食品中 的砸的方法
[0001]
技术领域
[0002] 本发明属于食品检测技术领域，更具体地，特别涉及一种双浊点萃取-氢化物发 生-原子荧光光谱联用测定食品中的硒的方法。
【背景技术】
[0003] 硒（Selenium)是生命必需的微量元素之一，是第21位氨基酸硒代半胱氨酸、硒代 甲硫氨酸和含硒酶的必需组分。硒在人体免疫系统、抗癌、抗氧化等方面发挥重要作用。但 硒在体内的安全阈值很窄，每天硒摄取量低于50yg就会缺硒；大于200yg就可能出现中 毒，需建立准确、灵敏的食品中硒含量分析方法。由于样品基质复杂，且硒含量较少时，还应 结合一定预富集和分离技术。
[0004] 双池点萃取（dualcloudpointextraction,dCPE)是以一次池点萃取（CPE)技 术为基础，通过加入反萃取剂，再次经过恒温和离心，将浊点萃取物中的待测成分由表面活 性剂富集相转移到水相，并进行检测的方法。dCPE最早由尹学博提出，与毛细管电泳（CE) 联用，成功用于形态萊的分离富集和检测。Zhao、Arainz等分别将dCPE与电感親合等离子 体发射光谱（ICP-0ES)、火焰原子吸收法（FAAS)联用，测定Cd、Co、Ni、Pb、Zn、Cu、As等金属 离子。在硒的检测方面，CPE与分光光度法、荧光分光光度法、ICP-MS和AAS建立联用，尚 未有CPE、dCPE和氢化物发生-原子荧光法（HG-AFS)联用并应用于食品中硒的检测中的报 道。
[0005] CPE与HG-AFS联用遇到的难题在于一次浊点萃取后引入HG-AFS的表面活性剂， 在HG过程会产生大量泡沫，使溶液进入原子化器，以致无法检测。加入消泡剂可消除表面 活性剂的影响，但是萃取后硒络合物稳定性较高，与硼氢化钾不能完全反应生成H2Se，测定 结果偏低。双浊点萃取中的反萃取剂可以破坏金属离子络合物，将金属离子反萃入亲水相 中，可去除大部分表面活性剂，克服传统CPE缺点，实现与HG-AFS的联用。
[0006] 对于目前食品中硒的检测来说，由于基质复杂，选择何种反萃取剂对于检测结果 的影响非常大，因此，本发明尝试解决的技术问题在于确定合适的反浊点萃取条件，并与 HG-AFS进行联用，优化反萃取率的同时，提高检测结果的准确性。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于根据现有的食品中硒的检测方法的不足，提供了一种双浊点萃 取-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定食品中的硒的方法。
[0008] 本发明的上述目的通过以下技术方案实现： 本发明提供了双浊点萃取-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定食品中的硒的方法， 包括如下步骤： 51. 湿法消解样品； 52. 将S1步骤中所得消解物先进行一次浊点萃取后，再采用HC1和H202的混合溶液 作为反萃取剂，进行二次萃取富集硒； 53. 采用氢化物发生-原子荧光光谱法测定样品中硒的含量。
[0009] 本发明通过研究发现，将HC1+H202采用一定浓度进行混合，该混合液作为反萃取 剂，并应用于萃取富集硒，显著提高萃取率，在最优的条件下，萃取率达到100%，显著提高现 有的食品中痕量硒的富集及相应的检测灵敏度。
[0010] 优选地，所述S2中为加入（8~24%)HC1和（5~25%)H202的混合溶液，混合体积比 为 1:1〇
[0011] 更优选地，所述S2中为加入16%HC1和20%H202的混合溶液。
[0012] 二次浊点萃取过程加入反萃取剂是为了破坏金属鳌合物，将金属离子释放出来， 从而萃取到水相。在实验中，选择盐酸作为反萃取剂，因其是氢化物发生过程的酸性介质。 在第一次浊点萃取反转离心管弃去水相后，向富胶相加入8%~24%HC1溶液3mL，进行反萃 取操作，研究发现16% (v/v)HCl反萃取效果最佳，但其萃取效率仅有50%。为了提高萃取 率，在16% (v/v)HCl中加入5%~25%(v/v)的氧化剂H202，实验结果显示，加入20%H202萃 取率可达100%，对于食品中痕量硒的富集和检测有着非常大的影响。
[0013] 优选地，所述S2包括如下步骤： 521. 取S1步骤中所得消解样品溶液于离心管中，依次加入pH为1.0~5.0的 HCl-NaAc缓冲溶液l~3ml、浓度为5g/L的吡咯啶二硫代氨基甲酸铵0. 6~1. 4ml和质量体积 浓度为5%的TritonX-114溶液0. 8~1. 2ml，用水定容，摇匀，加热并趁热离心，再于冰水浴 中冷却，弃去水相，得萃取物； 522. 将S21中所得萃取物加入HC1+H202混合溶液，摇匀，加热，趁热离心后，再于冰水 浴中冷却后取上层溶液，得反萃取物； 所述S21中定容体积与样品质量比为100:1。
[0014] 本实验采用双浊点萃取技术分离富集样品，与HG-AFS联用测定食品中痕量的Se， 用吡咯啶二硫代氨基甲酸铵（APDC)作鳌合剂，TritonX-114作萃取剂，HCL+H202混合液作 反萃取剂，建立了食品中痕量硒含量的测定方法。
[0015] 优选地，所述S21中HCl-NaAc缓冲溶液的pH为4. 0，浓度为lg/LAPDC1. 2ml 和质量体积浓度为5%TritonX-114溶液1. 1ml。
[0016] 本发明通过研究发现，缓冲溶液pH对疏水性螯合物形成和稳定性的有很大的影 响。当所述缓冲溶液的pH为1. 0~5. 0,用量为l~3ml时，其荧光响应值处于较高数值范围 中，当pH值为4. 0时，荧光值最大且稳定。
[0017] 螯合剂APDC的作用是与Se(IV)形成螯合物，使Se(IV)可萃取到胶束相。lg/L 的APDC用量在0.6~1.4ml范围，对应的荧光值处于较大数值范围内。APDC用量过多时，表 面活性剂的量一定时，富胶相中的APDC增加，螯合物溶解量减小，导致荧光值减小。
[0018] 表面活性剂TritonX-114的浊点温度稍高于室温，且密度较大，适宜于相分离。 随着5%TritonX-114用量的增加，荧光值提高，但当萃取体系中TritonX-114的用量增 加到lml，继续增大由于体系粘度有较大的增加，影响分相过程从而导致荧光值下降，在 0. 8ml~l. 2ml用量范围内荧光值处于较高范围。
[0019] 冰水浴可使表面活性剂相变成得粘滞而易于相分离。结果表明冰浴lOmin后，两 相便很容易分离。
[0020] 优选地，所述S21和S22中加热温度为30~70°C。
[0021] 更优选地，所述S21和S22中加热温度为51°C。
[0022] 为了在尽可能低的平衡温度和最短时间内达到完全萃取的目的，实验考察了不同 温度和时间对Se萃取率的影响。结果表明，温度在30°C~55°C之间荧光值呈上升趋势，当 温度超过55°C时，因螯合物分解致使荧光值减小。平衡时间对于样品充分反应也起到一定 作用，时间长短影响表面活性剂从水溶液中析出程度。实验表明平衡时间15min可达到最 佳的萃取率。
[0023] 优选地，所述S21和S22中加热时间为15min，离心时间为lOmin，转速为3500r/ min〇
[0024] 当溶液加热到浊点的温度时，表面活性剂从水溶液中析出，形成富胶束相，通过静 置或离心操作可加速分开富胶束相与水相，但如果离心时间过长，因体系温度的降低将导 致表面活性剂相的重新溶解，导致相分离逆转，萃取率下降。而离心时间过短，相分离又不 完全。而当转速为3500r/min，离心时间为lOmin时相分离最好，萃取率最高。
[0025] 优选地，所述S1包括如下步骤： 511. 称取样品，加入混酸进行消解，当溶液变为清亮无色并伴有白烟时，再继续加热 至烧干； 512. 将S11中所得消解物冷却后，加入浓盐酸继续消解，赶酸至lml时，停止消解； 513. 待S12中消解物冷却后，转移到离心管中，并加水进行稀释； 所述S11中样品与混酸的固液比g/ml为1:30~40 ; 所述S12中浓盐酸浓度为6mol/L，样品与浓盐酸的质量体积比为1:10~15。
[0026] 优选地，所述S3中仪器参数如下： 灯电流30mA，光电倍增管负高压260V，原子化器高度9mm，载气流量400mL/min，屏蔽气 流量800mL/min，读数方式为峰面积，进样体积：1.OmL。
[0027] 与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果： 本发明首次实现d-CPE与HG-AFS的联用应用于食品中硒的检测，根据本发明提供的方 法，检出限为0. 16yg/L，RSD为4. 04%。所述方法检测限低，检测精密度和富集倍数高，准 确性好，尤其适用于食品中螺旋藻、海带和茶叶中硒含量的测定。
【具体实施方式】
[0028] 以下结合具体实施例来进一步说明本技术，但实