一种免疫检测用纳米胶体金的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种新的合成免疫检测用纳米胶体金的方法，尤其涉及粒径可控的球形纳米胶体金的制备方法。
【背景技术】
[0002]胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂(如白磷、抗坏血酸、乙醇、过氧化氢、枸橼酸钠和鞣酸等)作用下被还原成金原子而聚集形成的纳米金颗粒，这些粒子由于静电排斥作用而在溶液中分散成为一种稳定的胶体状态，用还原法可方便地从氯金酸制备各种不同粒径、不同颜色的胶体金颗粒。这种颗粒对蛋白质有着很强的吸附作用，因此已广泛用于医学检验的快速诊断邻域。
[0003]胶体金的形貌和尺寸会影响纳米粒子的性质，颗粒的形貌不同、尺寸有差异以及电介质和表面吸附情况等不同均会导致粒子表面等离子共振(SPR)吸收峰位置发生改变，根据Mie理论，球形金属纳米粒子只有一个SPR峰，可通过分析紫外-可见光吸收谱(UV-vis)的峰值强度、半波峰宽和吸收峰的位置来判断胶体金的性质，最大吸收波长取决于粒子的大小，半波峰的宽窄取决于粒子尺寸分布，半波峰越窄，表明粒子尺寸分布越窄，粒径均一。吸光值较高、峰形尖窄是单分散性纳米胶体金的象征。
[0004]现行胶体金的制备普遍使用的方法为传统一步法即柠檬酸钠还原法，由于纳米金成核和连续生长均在一步完成，所得的胶体金颗粒尺寸大小不易控制，粒径分布不均匀，如图3所示。金纳米颗粒的形状不规则或粒径不均一，使得胶体金连接了待标记抗体或蛋白质后，很不稳定，标记结合物容易解离和沉淀而产生扩散不完全，反应区底色过深和假阳性现象。
【发明内容】
[0005]有鉴于【背景技术】所述，本发明的目的是提供一种制备免疫检测用纳米胶体金的方法，所获得的胶体金在球形度、粒径分布等方面和传统方法所制备的胶体金相比有着较大的改进。
[0006]本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
[0007]一种免疫检测用纳米胶体金的制备方法，其包括以下步骤:
[0008]S1、采用传统方法制备小粒径的纳米金颗粒作为晶种:加热氯金酸溶液至沸腾，快速加入还原剂，继续沸腾一段时间(如:10分钟)后，停止搅拌加热，冷却至室温；
[0009]S2、晶种的生长:将小粒径的晶种液稀释到一定浓度后置于三口烧瓶中，在室温下，通过两个加料管分别缓慢匀速滴加氯金酸溶液和另一种还原剂溶液，滴加完毕后加热沸腾反应产物并维持沸腾一段时间，然后撤去热源冷却至室温得到粒径增大的纳米金；
[0010]重复S2可依次得到从小到大各种粒径的大粒径的纳米金。
[0011]所述SI中的还原剂为柠檬酸和柠檬酸钠的混合液。
[0012]所述S2中的还原剂，为弱还原剂抗坏血酸、盐酸羟胺或对苯二酚其中的一种。
[0013]所述S2中，在金纳米粒子生长过程中，所述晶种液、氯金酸和还原剂的质量份数比为(8 ?10):(4 ?2):1，优选(8 ?9):2:1、8:2:1或9:2:1。
[0014]所述S2中，反应温度为常温。
[0015]所述S2中，还原剂和氯金酸溶液的滴加时间控制在30?60分钟，具体可为45分钟或50分钟。
[0016]所述S2中，所述氯金酸溶液和还原剂滴加完后，加热沸腾熟化时间至少为30分钟。
[0017]本发明采用了晶种增长法，是逐步增长纳米粒子，从而更加容易控制纳米粒子的尺寸和形状，此方法分为两步:一、制备小粒径的晶种；二、将氯金酸和还原剂的水溶液加入晶种溶液中使其生长。第二步反应中常选用还原性较弱的还原剂，氯金酸先被还原成一价金，此时晶种相当于催化剂，一价金会在晶种表面继续被还原成零价而聚集在晶种表面，从而实现粒径的可控增大。
[0018]与现有技术相比，本发明具备如下优点:
[0019]采用本发明的方法制备纳米胶体金，其粒径可控、形状规则球形，使得胶体金连接了待标记抗体或蛋白质后，稳定性提高，避免出现假阳性，准确度更高。
【附图说明】
[0020]图1是本发明的实施方式的晶种生长法和传统柠檬酸钠还原法得到的40nm胶体金紫外-可见光吸收谱。
[0021]图2是本发明的实施方式中，新的方法制备不同粒径的胶体金紫外-可见光吸收
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[0022]图3是本发明的【背景技术】采用的传统柠檬酸钠还原法制备得到的40nm胶体金透射电镜图。
[0023]图4是本发明的实施方式中，新的方法制备得到的40nm胶体金透射电镜图。
【具体实施方式】
[0024]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0025]氯金酸水溶液的配制:将氯金酸溶于去离子纯化水中溶解，配成2.5 X 10 2M的水溶液，置于4°C备用，有效期3个月。
[0026]柠檬酸和柠檬酸三钠溶液的配制:用去离子纯化水溶解一定量的柠檬酸和柠檬酸三钠，配成1% (W/V)的水溶液，置于4°C备用，有效期3个月。
[0027]抗坏血酸溶液的配制:用去离子纯化水溶解抗坏血酸，配成1% (W/V)的水溶液，置于4°C备用，有效期7天。
[0028]制备金纳米粒子前先将玻璃仪器用重铬酸洗液浸泡过夜后用去离子水清洗烘干。
[0029]传统方法制备胶体金颗粒:取2.15mL2.5X10 2M的氯金酸溶液于10mL去离子纯化水中，加热至沸腾2分钟后，快速加入3.2mLl% (W/V)柠檬酸三钠溶液，待溶液颜色由蓝经紫变为酒红色后，继续沸腾加热10分钟，冷却至室温。
[0030]例1:胶体金晶种颗粒的合成:首先，配制10mL氯金酸水溶液，使得水溶液中氯金酸浓度为2.5 X 10 4M,加热至沸腾2分钟后，一次性快速加入4mLl % (W/V)柠檬酸和柠檬酸三钠溶液，至5分钟左右溶液颜色稳定后，继续加热沸腾5分钟，冷却至室温，即可得到平均粒径为10?15nm的胶体金颗