一种快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的方法，具体涉及一种利用 高效液相色谱-电喷雾串联质谱法（LC - MS/MS - MRM)快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍 苷的方法，属于白酒分析检测技术领域。
【背景技术】
[0002] 中国白酒作为世界八大蒸馏酒（白兰地Brandy、威士忌Whisky、伏特加 Vodka、金 酒Gin、朗姆酒Rum、龙舌兰酒Tequila、日本清酒Sake、中国白酒Spirit)之一，乙醇含量 比伏特加，威士忌，白兰地高(通常乙醇体积40%-55%)。中国白酒用谷物生产，如高粱，或小 麦，大麦，玉米，大米与高粱的混合物，通过混合微生物固态发酵，发酵后用中国传统甑桶蒸 馏而成，是一个复杂开放的体系，这增加了研究白酒中结合态氰化物(蜀黍苷)的难度。针对 白酒当中蜀黍苷的研究，目前多集中在检测方法上，而对其合成与调控机制的研究仍不足。 白酒有多种香型，目前主要有浓香、酱香、清香、米香、凤香、药香、豉香、芝麻香、兼香、特型 和老白干11种香型。
[0003] 随着人们对食品安全的重视度增加，各酒企业越来越关注白酒中的安全指标，所 以对蜀黍苷定量显得尤为重要。
[0004] 目前，国内关于白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的研究很少，对蜀黍苷成分的检测方 法，主要有： 1、液相色谱法（HPLC - DAD)和高效液相色谱法（UPLC - PDAD):高效和超高液相色谱适 合分析难气化、不易挥发的物质，如酒中的有机酸、氨基酸、生物胺等物质，所以液相色谱多 用于检测白酒中一些安全指标物质。
[0005] 2、气相色谱-质谱联用法（GC-MS):目前白酒分析多使用气相色谱结合质谱，气 相色谱分析的物质大多是挥发性组分。气相色谱主要用于物质的分离，通过气相色谱-质 谱联用技术，对白酒中的挥发成分进行定性定量分析，从而对白酒物质成分有较全面的了 解。
[0006] 3、高温酸解法或酶法间接检测：高温酸解法是在酸性环境下加热使待测样品水解 之后对水解产物进行检测进而对目标物间接检测的方法。酶法是在最适条件下对目标物进 行水解反应之后对水解产物进行检测的方法，也是间接检测目标物的方法。
[0007] 本发明所用高效液相色谱-电喷雾串联质谱法（LC-MS/MS-MRM)只需对白酒酿 酒原料高粱中的蜀黍苷进行简单的提取预处理就可快速准确的进行定量，由于蜀黍苷很可 能是形成蒸馏酒中不利物质的重要前体，且本身具有毒性，为了广大消费者的健康考虑，建 立一套快速定量酿酒原料高粱中蜀黍苷的检测方法势在必行。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是提供一种快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的方法，具体是利 用高效液相色谱-电喷雾串联质谱法（LC-MS/MS-MRM)快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍 苷的方法。本发明使用0.1%甲酸-水及乙腈作为流动相对样品中的蜀黍苷进行梯度洗脱 分离后串联质谱检测，再通过标准曲线进行定量。
[0009] 本发明的技术方案，一种快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的方法，其步骤 为： (1) 通过Xevo TQ串联四极杆液相质谱仪（Waters Xevo TQ MS，沃特世科技上海有限 公司）检测蜀黍苷标准品来确定其特征离子并建立LC - MS/MS - MRM : a、 用甲醇配制200mg/L的蜀黍苷标准品储备液作为最高浓度，用甲醇将其稀释至 20mg/L作为蜀黍苷标准使用液；取ImL蜀黍苷标准使用液用微孔滤膜过滤处理后放入2mL 样品瓶待进样检测； b、 使用Xevo TQ串联四极杆液相质谱仪来检测蜀黍苷标准溶液，液相条件：流动相A : 0. 1%甲酸-水；流动相B :乙腈；流速0. 3mL/min ;洗脱梯度：流动相B 4min由5%线性增加 至40%，再Imin由40%线性增加至100%，持续lmin，再Imin由100%线性减少至5% ;色谱 柱：Waters Acquity C18 column，50mmX2. ImmX 1.7 μπι;进样量2 μ L ;ESI 离子源；正离子 模式；毛细管电压2. 7kV，锥孔电压20V，碰撞能量12V ;源温度120°C，去溶剂温度300°C;去 溶剂气体流速700L/h，锥孔气体流速50L /h，碰撞气体流速0. 15mL/min ; c、 根据检测结果，蜀黍苷母离子为餘々 329,特征子离子为餘々180及餘々132,建立 LC - MS/MS - MRM方法，选择餘々329-180及餘々329-132作为定性离子对，餘々329-132作 为定量尚子对； (2) LC - MS/MS - MRM方法对白酒酿酒原料高粱中的蜀黍苷定性检测：取5g磨碎之后的 高粱放置于烧杯中，加入20mL甲醇，超声波萃取30min后过夜保存，次日取萃取液置于50mL 离心管12000rpm离心30min取上清过滤，加入体积比1:1的超纯水，使用旋蒸仪蒸发去除 20mL甲醇后取ImL待进样检测； (3) 制作蜀黍苷定量标准曲线对白酒酿酒原料高粱中的蜀黍苷进行准确定量： d、 标准曲线制作：将20mg/L蜀黍苷标准使用液梯度稀释成一系列蜀黍苷标准使用液， 以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标绘制标准曲线； e、 白酒酿酒原料高粱预处理：取5g磨碎后的高粱于烧杯中，加入20mL甲醇，超声波萃 取30min后过夜，次日将萃取液置于50mL离心管12000rpm离心30min，取上清过滤后加入 体积比1:1的超纯水，使用旋蒸仪蒸发去除20mL甲醇后取ImL待进样； f、 白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的定量分析：使用LC - MS/MS - MRM方法检测样品，使用 标准曲线进行定量。
[0010] 本发明的有益效果：本发明使用0. 1%甲酸-水及乙腈作为流动相对样品中蜀黍苷 进行梯度洗脱分离后串联质谱检测，通过标准曲线，最终对白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷进 行准确定量。本发明建立了 一种全新的快速检测蜀黍苷的方法，操作简单，检测灵敏且自动 化程度高，特异性高。
【附图说明】
[0011] 图1蜀黍苷标准品LC - MS/MS液相图。
[0012] 图2蜀黍苷标准品LC - MS/MS色谱图。
[0013] 图3 LC - MS/MS - MRM法定性检测酿酒原料高粱中的蜀黍苷。
[0014] 图4 LC - MS/MS - MRM法定量检测蜀黍苷的标准曲线。
【具体实施方式】
[0015] 实施例1 :不同酒厂酿酒原料高粱中蜀黍苷的定性和定量 (1)通过Xevo TQ串联四极杆液相质谱仪（Waters Xevo TQ MS)(沃特世科技上海有限 公司）检测蜀黍苷标准品来确定其特征离子并建立LC - MS/MS - MRM方法： a、用甲醇配制200mg/L蜀黍苷标准品储备液作为最高浓度，用甲醇将其稀释至20mg/ L作为标准使用液。取ImL蜀黍苷标准使用液用微孔滤膜过滤处理后放入2mL样品瓶待进 样。
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