、抗体)吸附到膜上，然后晾干、风干或烘干；(3)将吸水层、支撑层(如果需要的话)、以及包被有错误折叠蛋白聚集物标记试剂的微孔膜(渗滤层)(或者不含有错误折叠蛋白聚集物标记试剂的渗滤层)按一定的顺序叠放在扁平壳体里；(4)然后将上盖和底槽相互卡固形成一封闭壳体，并且使得上盖在点样孔处与渗滤层紧密接触以至于液体在渗滤层上基本不从侧面横向流出点样孔以外的区域。
[0017]本发明的另一方面提供了上述渗滤检测装置在制备用于检测和预测子痫前期的试剂盒中的应用。
[0018]另一方面，还提供了用于检测和预测子痫前期的试剂盒，其中包括上述渗滤检测装置、洗脱液或比色卡或者三者同时。
[0019]另外，本发明还涉及上述渗滤检测装置、试剂盒的制备方法，以及使用上述渗滤检测装置、试剂盒用于检测和预测子痫前期的方法。
[0020]使用方法
本发明的渗滤检测装置和试剂盒可以很方便地用于检测孕妇尿样以预测或检测子痫前期。具体地说，一种方法是取上述渗滤检测装置其中渗滤层的微孔膜包含有特异性结合错误折叠蛋白聚集物的标记试剂如刚果红，从点样孔加入孕妇尿样(可以是1-500微升体积)，待尿液全部渗透过渗滤层后，加入洗脱液(可以是1-500微升体积)，待洗脱液完全渗透过渗滤层后观察点样孔内微孔膜颜色，以刚果红为例，洗脱液可以是60%乙醇，洗脱后，如果颜色是红色则为检测阳性，即受检孕妇患有子痫前期或者有子痫前期风险，若颜色仍是微孔膜原色，则检测为阴性，受检孕妇没有子痫前期。
[0021]特别地，在上述检测过程中，从点样孔加入孕妇尿样、待尿液全部渗透过渗滤层后，患有子痫前期或者有子痫前期风险的孕妇尿液中有错误折叠蛋白聚集物，而这些错误折叠蛋白聚集物会吸附在渗滤层之上而不能透过渗滤层，尤其在经洗脱液洗脱后，这些错误折叠蛋白聚集物仍会吸附在渗滤层，此时便形成了本发明提供的一种渗滤检测装置，其中所述上盖开有点样孔用于添加待测样本以及其它试剂，所述壳体中自上而下设有渗滤层和吸水层，所述渗滤层包含有特异性结合错误折叠蛋白聚集物的标记试剂以及与所述标记试剂结合的错误折叠蛋白聚集物。
[0022]实施例一
将硝酸纤维素膜浸染在刚果红工作液0.1 mg/ml过夜，将浸染好的硝酸纤维素膜干燥，将其裁剪成5_ X 5mm方块。将滤纸、吸水纸等其它材料裁剪成5 mm x 5mm方块。在渗滤塑料壳中从下至上按下列顺序组装:吸水纸〉Whatman滤纸〉硝酸纤维素膜，密封塑料壳。在塑料壳加样孔加样250ul孕妇尿液，干燥20 min。在点样孔加入50%乙醇250ul，待乙醇吸收干后再次加入50%乙醇250ul，待吸收干后观察加样空内颜色，红色为阳性，白色为阴性。结果见附图1。
[0023]共计试验了 12个确诊为子痫前期的孕妇的尿样，6个临产或产后但没有子痫前期症状的孕妇的尿样，灵敏度75%，特异性100%，PPV= 100%, NPV=67%。
[0024]实施例二
将硝酸纤维素膜浸染在硫磺素S工作液0.1 mg/ml过夜，将浸染好的硝酸纤维素膜干燥，将其裁剪成5_ X 5mm方块。将滤纸、吸水纸等其它材料裁剪成5 mm x 5mm方块。在渗滤塑料壳中从下至上按下列顺序组装:吸水纸〉Whatman滤纸〉硝酸纤维素膜，密封塑料壳。在塑料壳加样孔加样250ul孕妇尿液，干燥20 min。在点样孔加入50%乙醇250ul，待乙醇吸收干后再次加入50%乙醇250ul，待吸收干后观察加样空内颜色，黄色为阳性，白色为阴性。
[0025]实施例三
将硝酸纤维素膜浸染在针对A β寡聚物的小鼠IgG抗体SWl I工作液中4°C过夜，将浸染好的硝酸纤维素膜干燥，将其裁剪成5_ X 5_方块。将滤纸、吸水纸等其它材料裁剪成5 mm X 5mm方块。在渗滤塑料壳中从下至上按下列顺序组装:吸水纸〉Whatman滤纸〉硝酸纤维素膜，密封塑料壳。在塑料壳加样孔加样250ul孕妇尿液，待尿液完全渗入，在点样孔加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG抗体，待渗入后，加250 ul洗涤液，然后加入5 -氨基水杨酸底物显色，棕色为阳性。
【主权项】
1.一种渗滤检测装置，包括 上盖和底槽相互卡固形成一封闭壳体，其中 所述上盖开有点样孔用于添加待测样本以及其它试剂； 所述壳体中自上而下设有渗滤层和吸水层，所述渗滤层包含有特异性结合错误折叠蛋白聚集物的标记试剂。2.根据权利要求1所述的一种渗滤检测装置，其中所述渗滤层还包括与所述标记试剂结合的错误折叠蛋白聚集物。3.根据权利要求1或2中所述的一种渗滤检测装置，在制备用于检测和预测子痫前期的试剂盒中的应用。4.用于检测和预测子痫前期的试剂盒，包括权利要求1或2中所述渗滤检测装置，以及洗脱液和比色卡。
【专利摘要】本发明提供了一种用于预测或检测子痫前期的渗滤检测装置，包括一个由上盖和底槽相互卡固形成的一封闭壳体。在封闭壳体中，上盖开有点样孔用于添加待测样本以及其它试剂诸如染色剂、洗脱液等等。所述壳体中自上而下叠有至少渗滤层和吸水层。所述渗滤层包括一种微孔膜，它能让正常蛋白和其它小分子化合物通过，但却不能让错误折叠蛋白聚集物通过。这种微孔膜可以是纤维素膜，例如硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。优选地，渗滤层的微孔膜包含有特异性结合错误折叠蛋白聚集物的标记试剂、或者错误折叠蛋白聚集物本身、或者二者兼具。
【IPC分类】G01N33/532, G01N33/68
【公开号】CN105092854
【申请号】CN201410190153
【发明人】徐丽华
【申请人】湖州数问生物技术有限公司
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2014年5月7日