γ-球蛋白的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物体内蛋白质的检测方法，具体地，设及一种丫-球蛋白的检测方 法。
【背景技术】
[0002] 血清球蛋白由人体单核-吞隧细胞系统合成，它经过蛋白电泳可分为a1-、a2-、 0 1-、6 2-和丫-球蛋白。而丫-球蛋白也称为丙类球蛋白，是具有抗体活性并能与相应 抗原特异地结合的一类球蛋白，也是肝功能检查中一项重要指标，丫-球蛋白的偏高几乎见 于所有肝胆疾病。当患者是病毒性肝炎时，丫-球蛋白会中度增高；当患者是重型肝炎时， 丫-球蛋白可明显升高；当患者是肝硬化时，丫-球蛋白普遍增高，尤其在晚期或进行性失 代偿肝硬化，T-球蛋白可极度增高。目前常见的由免疫球蛋白异常引发的疾病有原发性 免疫缺陷病和变异性免疫缺陷症。因此根据体内T-球蛋白的含量变化可W快速的得出肝 功能有没障碍，尽可能的减少肝胆疾病所带来的风险。
[0003] 目前针对丫-球蛋白的测定方法已经被提出来，运其中包括考马斯亮蓝法和漠酪 蓝法。在运些方法中，由于敏感度、重复度等不够高，因此在实际应用时具有一定的局限性 和不稳定性。一般的巧光分光光度法在实际测试中由于各类蛋白质结构特性的相似性等会 不可避免的出现很多干扰，而且短波发射也会导致很多不必要的信号干扰。
[0004] 因此，提供一种灵敏度高、稳定性好且具有较好的可重复性，并且操作简单，能快 速测得丫-球蛋白的浓度的丫-球蛋白的检测方法是本发明亟需解决的问题。
【发明内容】
阳〇化]针对上述现有技术，本发明的目的在于克服现有技术中丫-球蛋白在测定过程 中，往往会由于各类蛋白质结构特性的相似性从而不可避免的出现很多干扰，同时短波发 射也会导致很多不必要的信号干扰等问题，从而提供一种灵敏度高、稳定性好且具有较好 的可重复性，并且操作简单，能快速测得丫-球蛋白的浓度的丫-球蛋白的检测方法。
[0006] 为了实现上述目的，本发明提供了一种丫 -球蛋白的检测方法，其中，所述检测方 法包括：
[0007] (1)将如式（I)所示结构的聚合物ppeas〇3溶于水中制得溶剂；
[0008] (2)将不同浓度的丫-球蛋白标准溶液置于步骤（1)制得的溶剂中，并加水和缓冲 溶液定容制成不同浓度的待测溶液，测定各待测溶液的最大巧光强度；
[0009] (3)W溶剂的巧光发射峰的巧光强度和待测溶液的巧光发射峰的巧光强度的比值 为纵坐标，丫-球蛋白溶液的浓度为横坐标建立巧光吸收光谱曲线的方程；
[0010] (4)检测待测浓度的丫-球蛋白溶液的最大巧光强度，然后根据巧光吸收光谱曲 线的方程计算待测浓度的丫-球蛋白溶液中丫-球蛋白的浓度；
[0011] (JN 105115945 A WL 2：/b贝
阳01引其中，n为正整数。
[0013] 通过上述技术方案，本发明将聚合物ppeas〇3溶于水中制得溶剂，而后通过该溶剂 及缓冲溶液与不同浓度的T-球蛋白标准溶液混合，再定容制得待测溶液，并测定上述待 测溶液的最大巧光强度，并W溶剂的巧光发射峰的巧光强度和待测溶液的巧光发射峰的巧 光强度的比值为纵坐标，丫-球蛋白溶液的浓度为横坐标建立巧光吸收光谱曲线方程，最后 测定需要检测的T-球蛋白溶液的最大巧光强度，并根据上述巧光吸收光谱曲线方程计算 得到丫 -球蛋白的浓度，从而通过运种方式，将巧光吸收光谱曲线方程建立出来后，则仅需 要测定一次最大巧光强度，即可得到需要检测的丫-球蛋白溶液的浓度，实现了灵敏度高、 稳定性好且具有较好的可重复性，并且操作简单，能快速测定T-球蛋白溶液的浓度的效 果。
[0014] 本发明的其他特征和优点将在随后的【具体实施方式】部分予W详细说明。
【附图说明】
[0015] 附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具 体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：
[0016]图1是实施例中所提供的各浓度的丫-球蛋白溶液的巧光强度图谱；
[0017] 图2是实施例中所提供的一种巧光吸收光谱曲线的方程；
[001引图3是实施例在不同溫度下制得的巧光吸收光谱曲线的方程；
[0019] 图4是实施例中PPEAS03溶液在不同浓度下的丫-球蛋白存在时的巧光衰减情况。
【具体实施方式】
[0020] W下对本发明的【具体实施方式】进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体 实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
[0021] 本发明提供了一种丫-球蛋白的检测方法，其中，所述检测方法包括：
[00巧 （1)将如式（I)所示结构的聚合物ppeas03溶于水中制得溶剂；
[0023] (2)将不同浓度的丫-球蛋白标准溶液置于步骤（1)制得的溶剂中，并加水和缓冲 溶液定容制成不同浓度的待测溶液，测定各待测溶液的最大巧光强度；
[0024] (3)W溶剂的巧光发射峰的巧光强度和待测溶液的巧光发射峰的巧光强度的比值 为纵坐标，丫-球蛋白溶液的浓度为横坐标建立巧光吸收光谱曲线的方程；
[0025] (4)检测待测浓度的丫-球蛋白溶液的最大巧光强度，然后根据巧光吸收光谱曲 线的方程计算待测浓度的丫-球蛋白溶液中丫-球蛋白的浓度；
[0027] 其中，n为正整数。
[0028] 上述设计通过将聚合物PPEAS03溶于水中制得溶剂，而后通过该溶剂及缓冲溶液 与不同浓度的T-球蛋白标准溶液混合，再定容制得待测溶液，并测定上述待测溶液的最 大巧光强度，并W溶剂的巧光发射峰的巧光强度和待测溶液的巧光发射峰的巧光强度的比 值为纵坐标，T-球蛋白溶液的浓度为横坐标建立巧光吸收光谱曲线方程，最后测定需要检 测的T-球蛋白溶液的最大巧光强度，并根据上述巧光吸收光谱曲线方程计算得到T-球 蛋白的浓度，从而通过运种方式，将巧光吸收光谱曲线方程建立出来后，则仅需要测定一次 最大巧光强度，即可得到需要检测的丫-球蛋白溶液的浓度，实现了灵敏度高、稳定性好且 具有较好的可重复性，并且操作简单，能快速测定丫-球蛋白溶液的浓度的效果。
[0029] 所述聚合物PPEAS03和所述缓冲溶液之间的比例可W不作进一步限定，但是， 为了使得到的检测数据更为准确，进而提高检测的精确性，同时尽可能节省成本，在本发 明的一种优选的实施方式中，相对于Img的所述聚合物PPEAS化，所述缓冲溶液的用量为 0. 01-0. 2jimol〇
[0030] 所述缓冲溶液可W为本领域常规使用的缓冲溶液类型，例如，在本发明的一种优 选的实施方式中，为了使缓冲溶液的缓冲效果更好，所述缓冲溶液可W限定为憐酸氨二 钢-憐酸二氨钟或S(径甲基）氨基甲烧一盐酸缓冲溶液。当然，运里选择何种缓冲溶液 主要是根据实验中具体的抑值进行选择的，本领域技术人员可W据此进行直接选择，在此 不一一寶述。
[0031] 当然，为了整个体系中抑值更为适宜，从而最大程度地使得测得的结果准确，在 本发明的一种更为优选的实施方式中，所述憐酸氨二钢-憐酸二氨钟和=(径甲基）氨基 甲烧一盐酸缓冲溶液的抑值可W进一步限定为5-9。 阳03引所述聚合物PPEAS03可W为常规使用的类型，例如，可W为纯净物，当然，为了尽可 能在操作中便于保存和使用，在本发明的一种优选的实施方式中，步骤（1)中所述聚合物 PPEAS03可W由聚合物PPEAS0 3溶液提供，溶液中的溶剂可W为本领域常规使用的溶剂类 型，例如，在本发明的一种更为优选的实施方式中，所述聚合物PPEAS化溶液的溶剂可W为 水。 阳03引聚合物PPEAS03溶液中聚合物PPEAS0 3的浓度可W不作进一步限定，当然，为了使 得其在使用时便于保存且能满足本发明的使用，在本发明的一种优选的实施方式中，所述 聚合物PPEAS03溶液中聚合物PPEASO3的浓度可W为7. 5-22. 5yg/mL。
[0034] 为了使得检测待测溶液时得到的巧光强度数据更为准确，在整个体系中，可W对 待测溶液的抑作进一步限定，例如，在本发明的一种优选的实施方式中，为了让整个体系 的条件能够使检测的巧光强度更为准确和清晰，所述待测溶液的抑值可W进一步限定为 5-9。
[0035] 为了让体系内各物质得到充分反应，进一步保证检测的巧光强度的准确，在本发 明的一种优选的实施方式中，所述检测方法还可W包括将待测溶液放置l-80min后测定其 巧光强度。
[0036] 巧光强度的检测可W按照本领域常规检测方法进行操作，同时，在本发明的一种 优选的实施方式中，为了得到最大巧光强度，在步骤（2)中，检测各待测溶液的最大巧光强 度波长范围为590-820nm。