一种基于大型溞毒性的非甾体抗炎药类新型污染物的毒性预测与评估方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于环境毒理学技术领域，具体涉及一种基于大型潘毒性的非留体抗炎药 类新型污染物的毒性预测与评估方法。
【背景技术】
[0002] 广泛使用的非留体抗炎药在为人类减轻病痛的同时，也带来诸多环境污染和危 害，较低浓度暴露即会对水生生物造成不良影响，潜在风险不容忽视。然而，目前有关非甾 体抗炎药的毒理研究仍主要集中在实验室内模拟的短期高剂量暴露下的急性毒性方面，对 其实际环境水平暴露时所可能引起的慢性则研究较少，但非留体抗炎药的急性毒性数据往 往远高于其实际检出浓度（100-1000倍），因此，为了避免高估甚至低估非留体抗炎药的毒 害风险，提高准确度和有效性，应重点加强对这类污染物的低剂量慢性毒性研究。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是针对现有技术中常规理化指标不能反映实际环境中低剂量非甾 体抗炎药类新型污染物慢性毒性的问题，提供一种基于大型潘毒性的非留体抗炎药类新型 污染物的毒性预测与评估方法，从而实现对非留体抗炎药类新型污染物的毒性特征和毒性 水平进行分析测试和定量描述。
[0004] 本发明的基于大型潘毒性的非留体抗炎药类新型污染物的毒性预测与评估方法， 包括以下步骤：
[0005] a.将待测的非留体抗炎药类新型污染物配制成呈等对数间距浓度的试验溶液，将 大型潘暴露于试验溶液中；
[0006] b.急性毒性测定：记录暴露24h、48h、72h的大型潘的存活率；
[0007] 慢性毒性测定：定期喂食并定期更换试验溶液，记录暴露21d的大型潘的存活率、 体长、脱壳总次数、怀卵总次数和产潘总数；
[0008] c.根据急性毒性测定得到的数据计算得到24h LC5(]、48h LC5(]、72h LC5。，根据慢性 毒性测定数据计算得到21d LC5。、EC50 (体长）、EC50 (脱壳）、EC50 (怀卵）、EC50 (产潘）。
[0009] 所述的非留体抗炎药类新型污染物为双氯芬酸、醋氨酚和/或布洛芬。
[0010] 所述的步骤a的大型潘为龄期6~24小时的大型潘。
[0011] 所述的步骤b的急性毒性测定，暴露期间不换水不喂食。
[0012] 所述的步骤b的记录大型潘的存活率，是以心脏停止跳动计为死亡。
[0013] 所述的步骤b的定期喂食并定期更换试验溶液，是每天每只大型潘喂0. 15mg斜格 栅藻液一次，并且每隔三天更换一次试验溶液。
[0014] 本发明方法采用大型潘体内试验方法，分别利用短期即24、48、72小时和长期即 21天的暴露方式描述非留体抗炎药类新型污染物对大型潘的急性毒性、慢性毒性，判断非 甾体抗炎药类新型污染物对大型潘是否具有毒性的判据为：
[0015] 1、利用短期暴露方式，测定得到非留体抗炎药类新型污染物对大型潘的急性毒 性，急性毒性测定得到24h、48h、72h LC50,以24h、48h、72h LC50描述急性毒性；
[0016] 2、利用长期暴露方式，慢性毒性以大型潘21天暴露后的致死性和半致死性效应 参数来表征，具体包括半数致死浓度（21d LC50, mg/L)、半数生长情况受抑制浓度（体长、 脱壳）和半数繁殖情况受抑制浓度（怀卵、产潘）；
[0017] 3、参照欧盟委员会所划分的污染物对于水生生物的风险等级（EU Directive 93/67/EEC，1996) :EC50〈lmg/L 表示非常有毒；lmg/L〈EC50〈10mg/L 表示有毒；llmg/ L〈EC50〈100mg/L表示有害）进一步对比评估非留体抗炎药类新型污染物对大型潘的致毒 级别。
[0018] 本发明具有的优点：
[0019] 本发明以大型潘为毒性测试的模式生物，将其暴露于典型非留体抗炎药污水中， 通过分析非留体抗炎药类新型污染物在单独暴露时对大型潘的急性毒性、慢性毒性，定量 地测定这类污染物对大型潘的短期或长期毒性效应，急性毒性以24、48和72小时的半数致 死浓度（24h、48h、72h LC50, mg/L)描述，慢性毒性以大型潘21天暴露后的致死性和半致 死性效应参数来表征，具体包括半数致死浓度（21d LC50，mg/L)、半数生长情况受抑制浓度 (体长、脱壳）和半数繁殖情况受抑制浓度（怀卵、产潘）。采用该方法可以对非留体抗炎 药类新型污染物的毒性特征和毒性水平进行分析测试和定量描述，解决常规理化指标不能 反映的典型非留体抗炎药污水生物毒性，同时可作为非留体抗炎药污水生物毒性监测和评 价的指标，可为水体中这类污染物的潜在生态毒性风险预测与评估提供参考。
【具体实施方式】
[0020] 以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0021] 下列实例中未具体注明的实验方法，均可按照常规方法进行，或按照所用产品生 产厂商的使用说明。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可通过商业途径 得到。
[0022] 实施例1 :三种典型非留体抗炎药类新型污染物（双氯芬酸、醋氨酚和布洛芬）对 大型潘的急慢性毒性效应评估
[0023] (1)预试验确定暴露浓度和效应参数
[0024] 在150mL的玻璃烧杯中，盛放50mL试验溶液，分为6个暴露组（空白对照与5个 浓度加标样品组），暴露组浓度以试验溶液中含非留体抗炎药类新型污染物的体积质量浓 度（mg/L)表示。三种非留体抗炎药类新型污染物加标样品组分别设置如下：双氯芬酸暴 露浓度为 〇. 50、I. 50、4. 50、13. 5 和 40. 5mg/L ;醋氨酚暴露浓度为 0. 08、0. 24、0. 72、2. 16 和 6. 48mg/L ;布洛芬暴露浓度组0. 40、I. 20、3. 60、10. 8和32. 4mg/L ;空白对照的试验溶液为 不含任何非留体抗炎药类新型污染物的蒸馏水；不设平行组。每个暴露组放10只大型潘， 其中慢性毒性试验中使用的大型潘全部为雌性，急性毒性试验连续暴露24、48、72小时，慢 性毒性试验连续暴露21天，每天喂一次斜格栅藻液（0. 15mg/d ·潘），并且每隔三天更换一 次实验溶液，以尽量确保目标物浓度一致。每天观察记录大型潘的致死性和半致死性效应 终点参数（表1)。当母潘开始繁殖后，及时将新生幼潘移出。试验结束时将大型潘取出，在 显微镜下测量其体长（从头盔至壳刺部的长度，不含尾刺）。毒理试验开展前后及各个时间 点均保存部分水样用于目标化合物的实际浓度测定。
[0025] 表1预实验所选用的致死性和半致死性效应参数
[0026]
[0027] 对获得的各效应终点参数结果进行统计分析，如果加标样品组与空白对照组差异 显著，即0. 01〈P〈0. 05或者P〈0. 01时，则认