细胞染色组合物及其用图
【专利说明】细胞染色组合物及其用途 发明领域
[0001] 本文公开的主题一般地涉及组合物和制备细胞样品的方法，其保持细胞形态以检 测异常的细胞。
【背景技术】
[0002] 细胞学是关于细胞的形成、结构和功能的研究的生物学分支。如在实验室装置中 所应用的，细胞学家、细胞学技术人员和其他的医学专家基于患者的细胞标本的视觉检查 进行患者状态的医学诊断。典型的细胞技术是"巴氏涂片（Pap smear)"测试，其中从女性 的宫颈刮下细胞并且分析以检测异常细胞的存在，异常细胞是宫颈癌发病的前体。细胞技 术也用于检测人体其他部分中的异常的细胞和疾病。
[0003] 细胞技术被广泛采用，因为用于分析的细胞样品的收集比传统的手术病理操作例 如活组织检查的创伤性更小，由此使用具有弹簧装载可转移探针、固定套管等的专门活组 织检查针从患者切除组织标本。可以通过多种技术包括，例如，通过刮下或擦拭一个区域， 或者通过使用针以从胸腔、膀胱、脊椎管或其他适当的区域抽吸体液，从患者获得细胞样 品。细胞样品被放置在溶液中并且随后收集并转移至载玻片以便在放大镜下观察。固定和 染色溶液典型地被施加至在载玻片细胞上，通常称为细胞涂片，以便于检查以及以便为了 存档的目的保存标本。
[0004] 传统的染色溶液可以是基于醇的或者含有显著水平的危险材料，例如甲醛。对于 某些细胞分析物，传统的多彩染色剂期望地用于染色细胞涂片。有利地，用不同的颜色染色 标本的细胞核和细胞质，以便视觉上或者通过自动成像设备容易区分细胞核材料和细胞质 材料。在一种染色实施中，细胞质是透明的，而细胞核是透明至不透明的。这种染色模式允 许细胞学家区分指示形态上异常的细胞，例如，通过非常大和/或颜色上暗的细胞核材料。 此外，细胞学家发现传统染色剂 尤其是巴氏染色剂 的各种颜色有助于减小眼睛疲 劳并且帮助诊断。
[0005] 然而，传统的染色剂，包括巴氏染色剂，对于自动化系统难以分析。人眼直接区分 的来自传统染色剂的细胞质中的各种颜色，不容易用自动化的成像系统分析，因为它们与 细胞核的传统蓝苏木精染色剂不同程度地对照。不同的对比度使得自动化分析不可靠。许 多诊断化验依赖于细胞和组织组分的评价。这些评价的一个要求是将这些组分附着至固体 基底，例如玻璃或塑料显微镜载玻片上。一旦通过附着固定，可以进一步地处理这些组分以 获得诊断ig息。
[0006] 已经发展了几种细胞/组织附着试剂。虽然有效，但是一旦在固体基底上涂布、施 加并且干燥，附着的试剂在一定程度上失去了它们的附着特性并且不保持稳定。这导致为 了最佳的日常使用而需要制备新鲜涂布的载玻片。
[0007] 因此需要的是一种细胞染色组合物，其在细胞的细胞核和细胞质之间提供高的对 比度，但为了最佳性能不需要新鲜涂布载玻片。显而易见的是，对于将被认为是无危险材 料、是水溶性的并且可以用在一步细胞制备方案中的细胞染色组合物存在未满足的需要。
【发明内容】
[0008] 在一个方面，本主题涉及用于染色细胞材料的组合物，包括：i.基本上由一种或 多种水溶性的、pH中性的、阳离子染料组成的染料组分，ii.以小于总组合物的大约10% v/ V的量存在的吸湿性多元醇以及任选地iii.水溶性的溶剂、水或可与水混溶的溶剂。
[0009] 在一个方面，本主题涉及用于染色细胞材料的组合物，其包括：i.基本上由一种 或多种水溶性的、pH中性的、阴离子染料组成的染料组分，ii.以小于总组合物的大约10% v/v的量存在的吸湿性多元醇，以及任选地iii.水溶性的溶剂、水或可与水混溶的溶剂。
[0010] 在另一个方面，本主题涉及制备细胞制品的方法，其包括将细胞样品与包括以下 的组合物接触：i.基本上由一种或多种水溶性的、pH中性的、阳离子染料组成的染料组分， ii.以小于总组合物的大约10% v/v的量存在的吸湿性多元醇，以及任选地iii.水溶性的 溶剂、水或可与水混溶的溶剂。
[0011] 在另一个方面，本主题涉及分析细胞样品的方法，其包括，a)将细胞样品与包括以 下的组合物接触：i.基本上由一种或多种水溶性的、pH中性的、阳离子染料组成的染料组 分；ii.以小于总组合物的大约10% v/v的量存在的吸湿性多元醇，和任选地iii.水溶性 的溶剂、水或可与水混溶的溶剂；并且b)对样品进行分析或评价。
[0012] 附图简述
[0013] 当考虑其以下详细描述时，将更好地理解本发明并且除了以上阐明的那些以外的 特征、方面和优势将变得明显。这些详细的描述参考以下附图，其中：
[0014] 图1是使用本文公开的细胞染色组合物和具有聚阳离子电荷涂层的基底染色细 胞样品的一步法的流程图。
[0015] 图2是使用本文公开的细胞染色组合物和具有聚阳离子电荷涂层的基底染色细 胞样品的方法的流程图。
[0016] 图3描绘了异常的宫颈细胞，用本文所述的染色溶液对其染色并且随后将其固定 在具有聚阳离子电荷涂层的显微镜载玻片上。虽然细胞整体和细胞群是容易显色的，但是 细胞核的细节在清晰度方面是极其明显的并且对于尺寸、形状和纹理可以容易地区分。
[0017] 图4描绘了在图3中的相同的载玻片上的相同细胞，初始用染色溶液对其染色。随 后可以用标准巴氏染色剂对样品再染色。注意到，细胞核的细节不太明显并且较难确定。
[0018] 图5描绘了异常的宫颈细胞，用本文所述的染色溶液对其染色并且随后将其固定 在具有聚阳离子电荷涂层的显微镜载玻片上。虽然细胞整体和细胞群是容易显色的，但是 细胞核的细节在清晰度方面极其明显并且对于尺寸、形状、纹理可以容易地区分。
[0019] 图6描绘了在图3中相同的载玻片上的相同的细胞，初始用染色溶液对其染色并 且随后用标准巴氏染色剂对其再染色。注意到，细胞核细节不太明显并且较难确定。
[0020] 图7描绘异常的宫颈细胞，用本文所述的染色溶液对其染色并且随后将其固定在 具有聚阳离子电荷涂层的显微镜载玻片上。虽然细胞整体和细胞群是容易显色的，但是细 胞核的细节在清晰度方面是极其明显的并且对于尺寸、形状、纹理可以容易地区分。
[0021] 图8描绘了在图3中的相同的载玻片上的相同的细胞，初始用染色溶液对其染色 并且随后用标准巴氏染色剂对其再染色。注意到，细胞核细节不太明显并且较难确定。
[0022] 详细描述
[0023] 本文公开的主题涉及用于染色细胞材料的组合物和它们的使用方法。该组合物提 供包括细胞核和相关结构的细胞组分相对于细胞质及其相关结构的出色对比度。本发明的 另外的有利方面是，组合物是PH中性的，即不是腐蚀性的，是基于水的，即不易燃的，并且 可以用于表征细胞材料的一步系统中。因为组合物可以提供优良的对比度，它们适合用于 表征细胞材料的方便的一步系统中。在此方面，组合物不需要复杂、昂贵并且通常不能方便 使用（inaccessible)的设备。太经常地，对于这种设备的需要导致在前的细胞筛查。从而， 不进行筛查并且错过了早期诊断的机会。因此，本文所述的组合物不仅能够提供优良的对 比度而且有利地对于细胞筛查提供几乎无限制的方便使用。
[0024] 有利地，本组合物不需要使用如在已知的染色固定剂中需要的标准的盖玻片。组 合物能够在一段时间内保持细胞形态，使得不需要标准的盖玻片。进一步地，组合物不含有 危险水平的有机溶剂或不生物相容的其他组分。优选地，组合物基本上由天青C (Azure C)、 丙三醇和任选地水组成。在另一个方面，本主题涉及表征细胞样品的方法，其包括将细胞样 品与本文所述的组合物接触并且使样品经受分析以确定异常的细胞的存在或缺乏。
[0025] 如本文所使用，术语"水溶性的、pH中性的、阳离子染料"意欲表示一种化合物或生 物制品，其是对于染色细胞或细胞组分有用的染料或染色剂，由此染料或染色剂具有以下 特性：在20°C并且在组合物的最终pH下染料或染色剂优选地容易以有用的浓度溶解在水 中；染料或染色剂是pH中性的，其表示当溶解在水溶液中时，染料或染色剂不以显著程度 改变溶液的pH。换句话说，溶液的最终pH是大约6-8 ;并且染料或染色剂是阳离子的，其表 示在水溶液中染料或染色剂能够电离为阳离子。优选地，在此方法中使用的染色剂是来自 一类"碱性电离的（basic ionized)"染色剂并且含有带正电荷的官能团。这些电荷不竞争 带正电的载玻片表面上的负的结合位点。因此，用这些类型的染色剂染色的细胞容易结合 并且牢固地黏附至带正电荷的载玻片。因为这些染色剂是基于水的并且在6. 0-8. 0的相对 中性的