测定方法、测定装置及洗脱液的制作方法

测定方法、测定装置及洗脱液的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及测定各种血红蛋白类的测定方法、测定装置及测定各种血红蛋白类时 使用的洗脱液。
【背景技术】
[0002] 血红蛋白类、其中作为血红蛋白与葡萄糖结合而得到的糖化蛋白的糖化血红蛋白 (HbAlc)反映过去1~2个月间的平均血糖水平，因此，广泛用于包括糖尿病、代谢综合征在 内的生活习惯病的检查和血糖管理等。因此，要求容易且高精度地测定HbAlc等血红蛋白 类的方法。
[0003] 作为HbAlc的测定方法，可以列举高效液相色谱（HPLC)法、免疫法、酶法、电泳法 等。其中，作为HbAlc的标准测定法，在临床检查领域中多采用HPLC法。
[0004] 作为使用HPLC法来对血红蛋白类进行分离、测定的方法，可以列举各种方法。例 如，在专利文献1中公开了一种血红蛋白类的分析方法，向具备羧基或羧烷基作为离子交 换基团的分离用柱供给磷酸系缓冲液作为洗脱液来对试样中的血红蛋白类进行分析，该方 法中，将含有S-(羧烷基）-L-半胱氨酸且含有磷酸系缓冲物质的液体供给至上述分离用 柱。专利文献1的技术中，据说能够对HbAlc、HbF、HbA0这样的血红蛋白类进行分离。
[0005] 另外，专利文献2中公开了使用含有多糖类的缓冲液作为缓冲液的血红蛋白类的 测定方法。专利文献2的技术中，据说能够对HbAlc、HbF、HbA2和异常血红蛋白（HbS、HbC) 进行测定、分离。此外，专利文献2中，以高效液相色谱为原理且以上述异常血红蛋白的 测定为目的的测定装置具有两个向柱输送洗脱液的送液栗，一个送液栗上连接一种洗脱液 罐，使用改变两种洗脱液的混合比而向柱输送洗脱液的梯度方式。
[0006] 专利文献1 :日本特开平5-281222号公报
[0007] 专利文献2 :日本特开2009-236768号公报

【发明内容】

[0008] 发明所要解决的问题
[0009] 专利文献1的技术中，无法实现HbAlc、HbF、HbAO以外的血红蛋白类的分离，专利 文献2的技术中，HbAlc、HbF、HbA2以外的血红蛋白类的分离局限于HbS和HbC。因此，在 上述现有技术以外，要求以高精度测定各种血红蛋白类的测定方法、测定装置及以高精度 测定各种血红蛋白类时使用的洗脱液。
[0010] 本发明的目的在于提供能够对选自突变血红蛋白和作为地中海贫血的标志物的 血红蛋白中的至少一种血红蛋白进行测定的测定方法、测定装置及洗脱液。
[0011] 用于解决问题的方法
[0012] 用于实现上述目的的具体方法如下所述。
[0013] < 1 >本发明的一个方式为一种测定方法，其中，在高效液相色谱中，使用以磷酸 一氢二碱金属盐（成分1)和磷酸二氢一碱金属盐（成分2)作为成分、成分1的含有率为 0. 08质量％以上且0. 50质量％以下、成分2的含有率为0. 04质量％以上且I. 2质量％以 下、成分2/成分1汾0. 4以上且10以下的洗脱液（洗脱液L)，由此对选自突变血红蛋白和 作为地中海贫血的标志物的血红蛋白中的至少一种血红蛋白进行测定。
[0014] < 2 >本发明的一个方式为一种测定方法，其中，在高效液相色谱中，使用以磷酸 一氢二碱金属盐（成分1)和磷酸二氢一碱金属盐（成分2)作为成分、成分1的含有率低 于0. 07质量％、成分2的含有率超过1. 4质量％且在2. 0质量％以下、成分2/成分1超过 20的洗脱液（洗脱液0)，由此对选自突变血红蛋白和作为地中海贫血的标志物的血红蛋白 中的至少一种血红蛋白进行测定。
[0015] < 3 >本发明的一个方式为一种测定方法，其中，在高效液相色谱中，使用以磷酸 一氢二碱金属盐（成分1)和磷酸二氢一碱金属盐（成分2)作为成分、成分1的含有率为 0. 40质量％以上且低于1. 04质量％、成分2的含有率超过0. 26质量％且在0. 88质量％以 下、成分2/成分1超过0. 25且在2. 2以下的洗脱液（洗脱液M)，由此对选自突变血红蛋白 和作为地中海贫血的标志物的血红蛋白中的至少一种血红蛋白进行测定。
[0016] < 4 >本发明的一个方式为一种对选自突变血红蛋白和作为地中海贫血的标志 物的血红蛋白中的至少一种血红蛋白进行测定的测定方法，其中，在高效液相色谱中，组合 输送选自由以磷酸一氢二碱金属盐（成分1)和磷酸二氢一碱金属盐（成分2)作为成分、 成分1的含有率为〇. 08质量％以上且0. 50质量％以下、成分2的含有率为0. 04质量％以 上且1. 2质量％以下、成分2/成分1为0. 4以上且10以下的洗脱液（洗脱液L)、以磷酸一 氢二碱金属盐（成分1)和磷酸二氢一碱金属盐（成分2)作为成分、成分1的含有率低于 0. 07质量％、成分2的含有率超过1. 4质量％且在2. 0质量％以下、成分2/成分1超过20 的洗脱液（洗脱液〇)、和以磷酸一氢二碱金属盐（成分1)和磷酸二氢一碱金属盐（成分 2)作为成分、成分1的含有率为0. 4质量％以上且低于1. 04质量％、成分2的含有率超过 0. 26质量％且在0. 88质量％以下、成分2/成分1超过0. 25且在2. 2以下的洗脱液（洗脱 液M)组成的组中的至少两种洗脱液。
[0017] < 5 >本发明的一个方式为上述< 4 >所述的测定方法，其中，基于下述⑴~ (III)中的任意一个输送洗脱液：
[0018] (I)输送选自由上述洗脱液L、上述洗脱液0和上述洗脱液M组成的组中的至少一 种洗脱液，或者将选自由上述洗脱液L、上述洗脱液0和上述洗脱液M组成的组中的至少两 种洗脱液不混合而依次进行输送；
[0019] (II)输送将选自由上述洗脱液L、上述洗脱液0和上述洗脱液M组成的组中的两 种以上的洗脱液混合而形成的至少一种混合液；
[0020] (III)依次输送选自由上述洗脱液L、上述洗脱液0和上述洗脱液M组成的组中的 至少一种洗脱液以及将选自由上述洗脱液L、上述洗脱液0和上述洗脱液M组成的组中的两 种以上的洗脱液混合而形成的至少一种混合液。
[0021] < 6 >本发明的一个方式为上述< 4 >或上述< 5 >所述的测定方法，其中，至少 输送将上述洗脱液〇和上述洗脱液M中的至少一种洗脱液与上述洗脱液L混合而形成的至 少一种混合液。
[0022] < 7 >本发明的一个方式为上述< 4 >~上述< 6 >中任一项所述的测定方法， 其中，输送将上述洗脱液L、上述洗脱液L和上述洗脱液0混合而形成的混合液、以及将上述 洗脱液M和上述洗脱液L混合而形成的混合液。
[0023] < 8 >本发明的一个方式为上述< 7 >所述的测定方法，其中，所测定的血红蛋白 类为HbBart's、HbH、HbF、HbAlc、HbAO、HbA2、HbE、HbD、HbS、HbC和HbConstantSpring中 的至少一种。
[0024] < 9 >本发明的一个方式为上述< 1 >、上述< 4 >~上述< 8 >中任一项所述 的测定方法，其中，使用上述洗脱液L，上述洗脱液L的渗透压为35m0sm以上且200m0sm以 下。
[0025] < 10 >本发明的一个方式为上述< 2 >、上述< 4 >~上述< 8 >中任一项所述 的测定方法，其中，使用上述洗脱液〇,上述洗脱液〇的渗透压为170m0sm以上且290m0sm以 下。
[0026] < 11 >本发明的一个方式为上述< 3 >~上述< 8 >中任一项所述的测定方法， 其中，使用上述洗脱液M，上述洗脱液M的渗透压为160m0sm以上且210m0sm以下。
[0027] < 12 >本发明的一个方式为上述< 5 >~上述< 8 >中任一项所述的测定方法， 其中，使用将上述洗脱液L和上述洗脱液0混合而形成的混合液，上述混合液的混合比为洗 脱液L:洗脱液0 = 1:2~1:4。
[0028] < 13 >本发明的一个方式为上述< 5 >~上述< 8 >中任一项所述的测定方法， 其中，使用将上述洗脱液M和上述洗脱液L混合而形成的混合液，上述混合液的混合比为洗 脱液M:洗脱液L= 1:2~1:4。
[0029] < 14 >本发明的一个方式为上述< 1 >~上述< 13 >中任一项所述的测定方 法，其中，进一步使用pH为5. 30以上且5. 40以下、渗透压为204m0sm以上且210m0sm以下 的洗脱液（洗脱液A)。
[0030] < 15 >本发明的一个方式为上述< 1 >~上述< 14 >中任一项所述的测定方 法，其中，进一步使用pH为7. 85以上且8. 25以下、渗透压为350m0sm以上且600m0sm以下 的洗脱液（洗脱液B)。
[0031] < 16 >本发明的一个方式为上述< 1 >~上述< 13 >中任一项所述的测定方 法，其中，进一步使用将pH为7. 85以上且8. 25以下、渗透压为350m0sm以上且600m0sm以 下的洗脱液（洗脱液B)和pH为5. 30以上且5. 40以下、渗透压为204m0sm以上且210m0sm 以下的洗脱液（洗脱液A)以混合比为洗脱液B:洗脱液A= 1:2~1:4的方式混合而形成 的混合液。
[0032] < 17 >本发明的一个方式为上述< 16 >所述的测定方法，其中，所测定的血红蛋 白类为 HbBart' s、HbH、HbF、HbAlc、HbAO、HbA2、HbE、HbD、HbS、HbC 和 HbConstantSpring 中 的至少一种。
[0033] < 18 >本发明的一个方式为一种测定装置，用于对血红蛋白类进行测定，其具 备：
[0034] 送液栗，在高效液相色谱中，将选自由以磷酸一氢二碱金属盐（成分1)和磷酸二 氢一碱金属盐（成分2)作为成分、成分1的含有率为0. 08质量％以上且0. 50质量％以下、 成分2的含有率为0. 04质量％以上且1. 2质量％以下、成分2/成分1为0. 4以上且10以 下的洗脱液（洗脱液U、以磷酸一氢二碱金属盐（成分1)和磷酸二氢一碱金属盐（成分 2)作为成分、成分1的含有率低于0. 07质量％、成分2的含有率超过1. 4质量％且在2. 0 质量％以下、成分2/成分1超过20的洗脱液（洗脱液0)、和以磷酸一氢二碱金属盐（成分 1)和磷酸二氢一碱金属盐（成分2)作为成分、成分1的含有率为0. 40质量％以上且低于 1. 04质量％、成分2的含有率超过0. 26质量％且在0. 88质量％以下、成分2/成分1超过 0.25且在2.2以下的洗脱液（洗脱液M)组成的组中的洗脱液单独输送或组合输送；以及
[0035] 分离用柱，与上述送液栗连接而被输送上述洗脱液。
[0036] < 19 >本发明的一个方式为上述< 18 >所述的测定装置，其中，上述送液栗基于 下述（I)~（III)中的任意一个输送洗脱液：
[0037] (I)输送选自由上述洗脱液L、上述洗脱液0和上述洗脱液M组成的组中的至少一 种洗脱液，或者将选自由上述洗脱液L、上述洗脱液0和上述洗脱液M组成的组中的至少两 种洗脱液不混合而依次进行输送；
[0038] (II)输送将选自由上述洗脱液L、上述洗脱液0和上述洗脱液M组成的组中的两 种以上的洗脱液混合而形成的至少一种混合液；
[0039] (III)依次输送选自由上述洗脱液L、上述洗脱液0和上述洗脱液M组成的组中的 至少一种洗脱液以及将选自由上述洗脱液L、上述洗脱液0和上述洗脱液M组成的组中的两 种以上的洗脱液混合而形成的至少一种混合液。
[0040] < 20 >本发明的一个方式为上述< 18 >或上述< 19 >所述的测定装置，其中， 进一步输送作为上述洗脱液的pH为5. 30以上且5. 40以下、渗透压为204m0sm以上且 210m0sm以下的洗脱液（洗脱液A)、和pH为7. 85以上且8. 25以下、渗透压为350m0sm以 上且eOOmOsm以下的洗脱液（洗脱液B)中的至少一种，或者，进一步输送将上述洗脱液A 和上述洗脱液B混合而形成的混合液。
[0041] < 21 >本发明的一个方式为上述< 18 >~上述< 20 >中任一项所述的测定装 置，其中，上述送液栗为一个。
[0042] < 22 >本发明的一个方式为一种在高效液相色谱中用于测定选自突变血红蛋白 和作为地中海贫血的标志物的血红蛋白中的至少一种血红蛋白的、以磷酸一氢二碱金属盐 (成分1)和磷酸二氢一碱金属盐（成分2)作为成分、成分1的含有率为0. 08质量％以上 且0. 50质量％以下、成分2的含有率为0. 04质量％以上且1. 2质量％以下、成分2/成分 1为0. 4以上且10以下的洗脱液（洗脱液L)。
[0043] < 23 >本发明的一个方式为一种在高效液相色谱中用于测定选自突变血红蛋白 和作为地中海贫血的标志物的血红蛋白中的至少一种血红蛋白的、以磷酸一氢二碱金属盐 (成分1)和磷酸二氢一碱金属盐（成分2)作为成分、成分1的含有率低于0. 07质量％、成 分2的含有率超过1. 4质量％且在2. 0质量％以下、成分2/成分1超过20的洗脱液（洗 脱液0)。
[0044] < 24 >本发明的一个方式为一种在高效液相色谱中用于测定选自突变血红蛋白 和作为地中海贫血的标志物的血红蛋白中的至少一种血红蛋白的、以磷酸一氢二碱金属盐 (成分1)和磷酸二氢一碱金属盐（成分2)作为成分、成分1的含有率为0. 40质量％以上 且低于1. 04质量％、成分2的含有率超过0. 26质量％且在0. 88质量％以下、成分2/成分 1超过0. 25且在2. 2以下的洗脱液（洗脱液M)。
[0045] < 25 >本发明的一个方式为上述< 22 >~上述< 24 >中任一项所述的洗脱液， 其中，所测定的血红蛋白类为 HbBart ' s、HbH、HbF、HbAI c、HbAO、HbA2、HbE、HbD、HbS、HbC 和 HbConstantSpring中的至少一种。
[0046] < 26 >本发明的一个方式为上述< 22 >所述的洗脱液，其中，上述洗脱液L的渗 透压为35m0sm以上且200m0sm以下。
[0047] < 27 >本发明的一个方式为上述< 23 >所述的洗脱液，其中，上述洗脱液0的渗 透压为170m0sm以上且290m0sm以下。
[0048] < 28 >本发明的一个方式为上述< 24 >所述的洗脱液，其中，上述洗脱液M的渗 透压为160m0sm以上且210m0sm以下。
[0049] < 29 >本发明的一个方式为上述< 22 >~上述< 28 >中任一项所述的洗脱液， 其中，所测定的血红蛋白类为HbBart's、HbH、HbF、HbAI