测试试剂在制备评价临床肿瘤患者临床治疗监测的药品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于酶活性检测领域，涉及一种测试试剂在制备评价临床肿瘤患者临床治 疗监测的药品中的应化所述的肿瘤包括肺癌、宫颈癌、乳腺癌、鼻咽癌，所述临床治疗包括 对于各种临床化疗、放疗或者其它的临床治疗方案。
【背景技术】
[0002] 我国每年大约有200万人患癌，150万人死于癌症，而且还在不断的增加，并 逐渐呈年轻化趋势。癌症每年给我国造成的直接经济损失逾千亿元（摘自北京晨报 2007/03/31)。据卫生部2007年报告，至2006年我国因肿瘤死亡的人数已达180万，较2005 年高出30万。肿瘤发生的早期人体没有感觉和症状，所W只有早期体检才能早期发现。但 是目前在临床上，80%W上的肿瘤病人是出现症状后才就医治疗，一经确诊即非早期，大多 数病人都发生转移，已经失去手术机会；很多经过手术的肿瘤患者，也要采取反复的放、化 疗W防止复发和转移。因此，及早诊断和治疗是对抗癌症的有效手段之一，肿瘤的早期诊断 是决定其预后的一个重要因素。
[0003] 肿瘤标志物（Tumormarker,TM)作为一项重要指标，在肿瘤早期诊断当中发挥着 越来越重要的作用。TM是由肿瘤组织产生，存在于肿瘤组织本身、或分泌至血液或其他体 液、或因肿瘤组织刺激由宿主细胞产生的含量明显高于正常参考值的一类物质。TM在肿瘤 的治疗监测和预后方面具有一定的应用价值。目前发现的肿瘤标志物已有一百多种，但送 些肿瘤标志物主要是肿瘤形成后形成的抗体或蛋白，通过检测送些肿瘤标志物可W在一定 程度上检测肿瘤的发生及其相关的异常增生等相关病症，但是送些标志物不能用于在肿瘤 或增生发生前来预测机体内的抗肿瘤能力。因此，本领域迫切需要开发新的方法，用于评价 肿瘤发病之前机体内的抗疾病能力，W此来预报机体抵抗肿瘤或异常增殖能力的大小。
[0004] 硫氧还蛋白系统包括硫氧还蛋白还原酶（Thioredoxinreductase,TrxR，TR)、 硫氧还蛋白（thioredoxin,Trx)和烟醜胺腺嘿岭二核巧酸（nicotinamideadenine dinucleotide地os地ate,NADPH)，是一个广泛分布的NADPH依赖性二硫化物还原酶系统。 其中Trx作为一种生长因子，可W被许多细胞产生，也能被淋己细胞、肝细胞和成纤维细胞 W及许多癌细胞分泌。Trx的琉基氧化还原活性在维持细胞生理活性过程中有普遍而且重 要的作用。
[0005] 研究表明在氧胁迫的情况下，淋己细胞和肿瘤细胞W及一些正常细胞当中的Trx、 TrxR能够快速地调节和减缓氧胁迫的压力。在正常情况下，TrxR还原氧化态的Trx。在 NADPH存在时，还原态的Trx作为P畑X的电子供体将过氧化氨还原成水。紫外线等产生的 过氧化氨诱导TrxR的产生，然而，持久的过氧化氨高水平地诱导产生肿瘤抑制因子p53,反 过来负调节TrxR，所W，TrxR活力在过氧化氨较好的控制下。从另一角度来说，TrxR活性 越低，表明体内的肿瘤抑制因子p53的水平越高，p53的水平越高，机体就能越容易使肿瘤 细胞趋向调亡，所W对抗肿瘤的能力就越强，因此，TrxR活性的高低在一定程度上反映了体 内的抗肿瘤水平。
[0006] 目前，国际上采用硫代葡萄糖金（Aurothioglucose，下式a)抑制法测定TrxR活 性，
[0007]
[0008] 其工作原理是：用5, 5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（DTNB)测定样品中的总还原 能力；用硫代葡萄糖金抑制样品中化xR的活性后，再用DTNB测定还原能力；计算样品前后 两次还原能力的差值来测定样品中TrxR的活性。但是，硫代葡萄糖金缺乏特异性，对样品 中的其他琉基物质也可发生封闭作用，不适用于直接测定血液或组织样品中的TrxR活性。 例女口，HillKE等（Determinationofthioredoxinreductaseactivityinratliver supernatant.AnalBiochem. ,1997,Novi;253(1) :123-5)采用硫代葡萄糖金测定大鼠肝 匀浆中的TrxR活性时，要先对肝匀浆进行透析处理，W除去其中的小分子琉基物质（如谷 脫甘肤）后，再加入硫代葡萄糖金测定其化xR活性。可见，其他小分子琉基物质（如谷脫 甘肤）可干扰硫代葡萄糖金对TrxR的活性测定。另一研究结果表明，硫代葡萄糖金会增 加血液中琉基物质与DTNB的反应速率（HuML,DillardCJ，Ta卵elALInvivoeffects of曰urothioglucose曰ndsodiumthioglucoseonr曰ttissuesulfhydryllevels曰nd plasmasulfhydrylreactivity.AgentsActions. 1988,Aug;25 (1-2):132-8)。
[0009] 申请人的申请CN102695805A中公开了用于测定样品中硫氧还蛋白还原酶活性的 方法和试剂盒及应用，该文献尽管公开了该试剂评价体内抗肿瘤水平，并且公开了对于正 常人；通常TR活性小于4U/mU且0S/TR比值大于5 ;对于肿瘤患者：通常TR活性大于10U/ 血（一般此时0S/TR比值小于5);对于lOU/mL>TR活性> 4U/mL，0S/TR比值小于抓/血， 具有肿瘤患者的指标特点。但是没有具体涉及具体癌症是否适用或如何适用。
[0010] 目前产品检测试剂（PCT/CN2010/078369)可用于人血的体外检测，方便、无创，易 行。但在临床具体应用特别是针对临床各种肿瘤类型是否适合应用该类检测试剂尚无前期 任何报道。现有技术中癌症（如肺癌、宫颈癌、乳腺癌、鼻咽癌）的评价试剂也没有对于超 早期的肿瘤进行预警监测，更没有公开对于术后的肿瘤的治疗检测。因此，应用TR活性检 巧||试剂用于评价在各种如肿瘤，如肺癌、乳腺癌、鼻咽癌和宫颈癌的药物应用效果W及手术 治疗效果的跟踪评价，对于临床合理使用药物W及手术方法进行肿瘤治疗具有重要的作用 和意义。
【发明内容】
[0011] 如上所述，TrxR的过量表达与疾病，特别是肿瘤的发生密切相关，因此，准确、可靠 的检测组织中TrxR的含量或活性水平对于预报体内抵抗疾病如肿瘤等的能力极其重要， 本发明的检测试剂对于肺癌，乳腺癌、鼻咽癌和宫颈癌的不同的治疗阶段（如术前、术中和 术后）和临床效果（CR、PR、SD、PD)具有明显的活性差异，数据分析显示具有统计学意义， 因此，该检测试剂通过TR活性检测还能判断肿瘤的治疗效果，动态监测相关疾病进程。从 而对于患者的不同治疗阶段提供了重大的指导意义，可W在临床上使用。
[0012] 本发明通过如下技术方案实现：
[0013] (1) 一种测试试剂在制备评价临床肿瘤患者临床治疗监测的药品中的应用，所述 测试试剂包括分别独立存在的：
[0014] (a)测定样品中总琉基含量的试剂；和
[0015] 化）硫氧还蛋白还原酶特异性抑制化合物。
[0016] 根据本发明，所述肿瘤优选肺癌、宫颈癌、乳腺癌或鼻咽癌。
[0017] 根据本发明，所述临床治疗包括对于各种临床化疗、放疗或者其它的临床治疗方 案。
[0018] 根据本发明，所述临床治疗包括术前、术中和术后的监测。
[0019] 根据本发明，如果TR活性大于1011/1^，数值显示为肿瘤患者；如果lOU/mL>TR活 性> 4U/mL，数值显示具有肿瘤患者的指标特点。
[0020] 更进一步地，当TR活性大于lOU/mL时，0S/TR比值小于5 ;当lOU/mL>TR活性> 4U/mL时，0S/TR比值小于抓/mL。所述0S/TR的比值是根据正常人与肿瘤患者的测试统计 后获得的。
[002。 如果治疗后TR活性水平仍然大于lOU/i止，数值预示生长控制不理想。而且，临床 如果为PD，则为数据一致。
[0022] 如果治疗后TR活性水平小于4U/mU数值预示生长控制在正常人水平，临床可W 判断为SD、PR、CR等为一致；反之，为不一致。
[002引其中CR为完全好转，PR为部分好转，SD为疾病稳定，PD为疾病进展。
[0024] 本发明中，所述"硫氧还蛋白还原酶特异性抑制化合物"（下文有时称为；抑制剂） 是指对硫氧还蛋白还原酶具有高度选择性的化合物，送类化合物能够特异性地与硫氧还蛋 白还原酶结合，并抑制其中的琉基活性。
[00巧]根据本发明，所述硫氧还蛋白还原酶特异性抑制化合物选自下述通式1或通式2所示结构的化合物，
[0026]
[0027]通式1中：
[002引X。为C或N;
[0029]Xi为Se;
[0030] Ri为氨，C1-C6烷基、C3-C7环烷基、
[0031] 其中Ra、化、Re、Rf、Rg各自独立地为；C1-C6烷基；Rc，Rd各自独立地为：氨、因素、 腊基、Ci-Ce烷基、Ci-Ce烷氧基、居基、SO3R、C00R、聚己二醇、O-SO3R或O-PO3RR，其中R可W为氨、Ci-Ce烷基或芳基；
[003引Rz和R3分别独立的选自：氨、因素、腊