一种高效液相色谱法测定猕猴桃油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种高效液相色谱法测定猕猴桃油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，所属技术领域:二、生物与新医药技术(七)现代农业技术4、农产品精深加工与现代储运:农产品质量安全评价、快速检测、全程质量控制等技术。
【背景技术】
[0002]HPLC是一项高压、高效、高灵敏度的分离技术，可用于分离分析高沸点、相对分子量大、热稳定性差的有机化合物，广泛应用于化学、化工、高分子、生物、食品、医药等领域。
[0003]齐墩果酸、熊果酸主要存在于猕猴桃油及其油脚中，为五环三萜类化合物；性质相近，难以分离；是一种活性成分；有保肝、消炎、抗肿瘤、降血脂、增强免疫和抑制免疫(免疫双向调解作用)等作用。
[0004]目前这2种物质还只能从植物中提取，无法化学合成；检测方法有分光光度法、薄层扫描法和高效液相色谱法，前者通常采用显色剂显色后测定，由于他们性质相近，分光光度法通常测得其三萜类总量，方法缺乏专属性；而普通的薄层色谱很难使0A和UA分离；相比较而言，HPLC较容易实施两者的分离，且紫外检测相对于蒸发光散射检测有较好的重现性。在现有可查范围内，利用HPLC同时测定猕猴桃油中齐墩果酸、熊果酸未见报道，采用反相高效液相色谱法二极管阵列检测器测定了猕猴桃油中的齐墩果酸和熊果酸含量，旨在为评价猕猴桃油的质量提供科学依据。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题在于提供一种高效液相色谱法测定猕猴桃油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，从而准确测定其含量，方法操作简单、灵敏度高、重现性好。
[0006]为了实现上述目的本发明采用如下技术方案:
[0007]—种高效液相色谱法测定猕猴桃油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于包括以下步骤:
[0008](1)对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10.20mg、熊果酸对照品8.54mg，分别置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸、熊果酸对照品贮备液。
[0009](2)样品溶液的处理:取猕猴桃油样品约1.0-2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25ml，密塞，称定重量，60-90°C索式提取l_4h，超声5_10min，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0010](3)将滤液过0.40-0.50 μ m微孔滤膜后，在实验色谱条件下进行高效液相色谱法测定，得测定数值；所述的实验色谱条件为:色谱柱:C1S柱，250X4.6mm，5 μπι;流动相:265 %甲醇-35 %水-0.1 %冰乙酸-0.05 %三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸0.05mL和三乙胺0.05mL配置；紫外检测器的检测波长:210nm ;流动相流速为0.6mL/min，柱温20 °C，进样体积为20 μ L ;
[0011](4)按照外标法计算猕猴桃油中齐墩果酸、熊果酸的含量。
[0012]所述的高效液相色谱法测定猕猴桃油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于:所述的实验色谱条件为:色谱柱:C1S柱，250X4.6mm，5 μπι;流动相:265%甲醇-35%水-0.1 %冰乙酸-0.05%三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸0.05mL和三乙胺0.05mL配置；紫外检测器的检测波长:210nm ;流动相流速为0.6mL/min，柱温20°C，进样体积为20 μ L。
[0013]本发明的有益效果:本发明可准确测定猕猴桃油中齐墩果酸、熊果酸的含量，方法操作简单、灵敏度高、重现性好:1、利用超声波辅助提取技术，大大节约了提取时间；
2、流动相中使用三乙胺，改善了目标峰峰型，使峰拖尾情况大大改善；3、三萜分离检测灵敏度高，稳定性和重现性好，在一定范围内，2种三萜类物质的标准曲线线性关系良好(r2彡0.999)，三种物质保留时间相对标准偏差(RSD)均小于0.06%，2种三萜含量测定相对标准偏差(RSD)均小于0.4%，因此本发明的检测结果准确。
【附图说明】
[0014]图1本发明实施例2对照品中齐墩果酸、熊果酸的色谱图，a齐墩果酸、b熊果酸。图2本发明实施例2猕猴桃油中齐墩果酸、熊果酸的色谱图，a齐墩果酸、b熊果酸。
[0015]
【具体实施方式】
[0016]实施例1:高效液相色谱法测定猕猴桃油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，包括以下步骤:
[0017](1)对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10.20mg、熊果酸对照品8.54mg，分别置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸、熊果酸对照品贮备液。
[0018](2)样品溶液的处理:取猕猴桃油样品约0.5-1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25ml，密塞，称定重量，60-90°C索式提取l_4h，超声5_10min，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0019](3)将滤液过0.40-0.50 μπι微孔滤膜后，在实验色谱条件下进行高效液相色谱法测定，得测定数值；所述的实验色谱条件为:色谱柱:C1S柱，250X4.6mm，5 μπι ;流动相:265 %甲醇-35 %水-0.1 %冰乙酸-0.05 %三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸0.05mL和三乙胺0.05mL配置；紫外检测器的检测波长:210nm ;流动相流速为0.6mL/min,柱温20°C，进样体积为20 μ L ;
[0020](4)按照外标法计算猕猴桃油中齐墩果酸、熊果酸的含量。
[0021]所述的实验色谱条件为:色谱柱:C1S柱，250X4.6mm，5ym;流动相:265 %甲醇-35 %水-0.1 %冰乙酸-0.05 %三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸
0.05mL和三乙胺0.05mL配置；紫外检测器的检测波长:210nm ;流动相流速为0.6mL/min，柱温20°C，进样体积为20 μ L。
[0022]实施例2:本发明的具体实验数据:
[0023]1仪器与试剂
[0024]仪器:1100高效液相色谱仪(包括G1311A栗、G1322脱气机、G1313AZ自动进样器、G1313A 柱温箱、G1315 DAD ;Agilent 1100 ChemStat1n) ;BP221D 电子天平(Sartorius 公司)；KQ-250