一种基于金属弹簧圈栓塞后动脉瘤组织切片方法
【技术领域】
[0001] 本发明属生物材料检测领域，涉及脉瘤瘤组织材料的切片方法，具体涉及一种金 属弹簧圈栓塞后动脉瘤组织的切片方法。
【背景技术】
[0002] 报道公开，颅内动脉瘤是一种威胁公众健康的较为严重的疾病。国外多宗尸检研 究结果显示，普通人群中未破裂动脉瘤的发病率差异较大（〇. 2%~9. 9% )。近年的一些前 瞻性尸检和动脉造影研究显示，普通人群中的发病率约在2%~4%之间，且颅内动脉瘤已 经成为自发性蛛网膜下腔出血的首位原因。研究显示，动脉瘤的发病率随着人群年龄的增 大而增高。近年来随着神经影像学的发展及介入神经外科的兴起，改变了颅内动脉瘤治疗 单纯依赖开颅手术的局面。血管内弹簧圈栓塞治疗不仅同样有效，而且具有更加微创、快速 的优点。"国际蛛网膜下腔动脉瘤临床研究（international subarachnoid aneurysm trial, ISAT)"显示：从I年无残疾生存方面考虑，血管内介入治疗的确优于开颅夹闭术，然而介 入治疗方案中也存在弊端，主要包括复杂动脉瘤弹簧致密填塞圈困难，以及高远期复发率 等问题；其中，部分动脉瘤栓塞后，因瘤体填塞大量栓塞材料，占位效应仍然存在甚至加重； 另外，由于介入治疗所需的栓塞材料价格昂贵，常使患者经济上难以承受；宽颈动脉瘤常规 栓塞无法致密填塞瘤颈，即使采用支架或球囊辅助（如Remodeling技术等），其复发率仍然 很高。
[0003] 关于弹簧圈栓塞后脑动脉瘤复发这一难题，有关领域学者们做了大量的研究和工 作，期望探究其发生机制，找到解决这一问题的方法。但受限于弹簧圈属于金属材料，使得 学者们的研究多采用扫描电镜和树脂包埋组织HE染色硬切片来观察弹簧圈栓塞后动脉瘤 的闭合、载瘤动脉的狭窄、动脉瘤复发或子瘤形成的相关现象，但无法探究其发生机制，以 及参与细胞的亚群分型分析。上述问题的存在，使得弹簧圈栓塞后动脉瘤的复发相关研究 进展变得异常缓慢。
[0004] 鉴于现有技术存在的问题，本申请的发明人拟提供提供一种有助于对金属弹簧圈 栓塞后的动脉瘤进行免疫组化等常规研究的简易、稳定的切片方法。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种脉瘤瘤组织材料的切片方法，具体涉及一种金属弹簧圈 栓塞后动脉瘤组织的切片方法。本方法简易、稳定、易操作，尤其适用于对金属弹簧圈栓塞 后的动脉瘤进行5 μ m石錯切片,进而进行免疫组化、免疫荧光等常规研究。
[0006] 本发明采用结合慢速金刚锯切割的二次包埋双切割技术，对石蜡包埋的栓塞后动 脉瘤标本进行处理，能明显提高含金属弹簧圈血管组织切片的可行性和稳定性，并降低对 实验机构及器械和技术的要求。
[0007] 具体而言，本发明的一种金属弹簧圈栓塞后动脉瘤组织的切片方法，其特征在于， 其包括步骤：
[0008] 1)离体的栓塞后动脉瘤血管标本取材和处理：
[0009] 将离体的栓塞后动脉瘤组织标本浸泡福尔马林溶液中固定；
[0010] 2)动脉瘤标本的包埋：
[0011] 取步骤1)固定的标本，分别经酒精福尔马林、以及不同浓度酒精浸泡后；再经过 二甲苯透明，石蜡浸润；最后用石蜡包埋标本置矩形模具盒内；
[0012] 3)动脉瘤远端切除：
[0013] 使用低速金钢锯，将上述包埋的动脉瘤瘤体标本其远端切除"帽端"；
[0014] 4)金属弹簧圈抽取：
[0015] 将步骤3)的切除掉帽端的动脉瘤侧暴露，在手术显微镜下使用显微镊抽取其中 的弹簧圈；
[0016] 5)修饰后动脉瘤标本再包埋：
[0017] 将抽取过弹簧圈的标本石蜡块再次融化，再用石蜡将标本包埋在矩形模具盒内；
[0018] 6)石蜡组织薄切片：
[0019] 使用常规石錯切片机（Leica Microsystems, Nussloch, Germany)将二次包埋的动 脉瘤标本切片为5 μ m石蜡切片。
[0020] 本发明中，所述的离体的栓塞后动脉瘤组织标本为从载瘤动脉瘤颈的两端切除获 得；本发明的一个实施例中，将从载瘤动脉瘤颈两端切除离体的栓塞后动脉瘤组织标本浸 泡于10%福尔马林溶液中固定至少24小时；
[0021] 本发明步骤2)中，将步骤1)固定的标本，分别经2h酒精福尔马林、70%酒精 3〇111；[11，80%酒精30111；[11，95%酒精30111；[1112遍，和100%酒精55111；[1112遍 ；然后经过二甲苯透 明55minx2遍，石錯浸润40minx3遍；最后用石錯包埋标本置矩形模具盒内；
[0022] 本发明中，对低速金钢锯的精度无特定限制，可使用价格低廉的工业产品替 代；本发明的一个实施例中，使用低速金钢锅（SYJ_150Kejing automation equipment co.，Shenyang，China)，将所述包埋的含有弹簧圈的动脉瘤瘤体标本其远端切除"帽端 "（含部分弹簧圈）；
[0023] 本发明中，将二次包埋的动脉瘤标本切片，优选为5 μ m石蜡切片。
[0024] 本发明中，所需的操作器械、实验器材均较为简单易用，价格低廉，普通实验室可 以常规配备，成本较低。同时，本方法操作简便，无需长时间的经验积累。
[0025] 本发明方法的优点为：
[0026] 1.联合慢速金刚锯切割与二次包埋进行双切割技术能实现对带有金属弹簧圈栓 塞的动脉瘤石蜡组织进行薄切片（5 μ m)，使得通过免疫组化等方法对动脉瘤瘤颈处内皮化 的进程以及动脉瘤复发的原因的研究成为了可能。
[0027] 2.本方法从动脉瘤远端抽去弹簧圈，可以保护瘤颈，不破坏瘤颈结构，易使动脉瘤 瘤颈处保持原有状态。
[0028] 3.本方法对低速金钢锯的精度要求不高，可使用价格低廉的工业产品替代。
[0029] 4.本方法所需操作器械、实验器材均较为简单易用，价格低廉，普通实验室可以常 规配备。
[0030] 5.操作简便，无需长时间经验积累。
[0031] 6.成本低。
[0032] 为了便于理解，以下将通过具体的附图和实施例对本发明的方法进行详细地描 述。需要特别指出的是，具体实例和附图仅是为了说明，显然本领域的普通技术人员可以根 据本文说明，在本发明