一种快速检测农产品中有机磷残留的试剂盒及其使用方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种试剂盒，具体是一种快速检测农产品中有机磷残留的试剂盒及其使用方法。
【背景技术】
[0002]随着我国工业的迅速发展及农业和产业结构的战略性调整，特别是栽培方式的变革，原先为次要的、甚至为检疫性的病虫草等有害生物的发生危害日趋严重，抗药性不断上升，导致农药用量和施药次数不断增加。滥用高毒、高残留农药的现象屡禁不止，有不按规范要求使用农药，有的甚至严重违反农药安全使用标准。使用高毒农药致使相当部分农产品农药残留明显超标，食用后在人体内积累，引发疾病，有时甚至发生急性中毒，严重危及人民健康和生命安全。
[0003]有机磷农药品种多、药效高，用途广，易分解，在人、畜体内一般不积累，在农药中是极为重要的一类化合物。但有不少品种对人、畜的急性毒性很强，在使用时特别要注意安全，近年来，高效低毒的品种发展很快，逐步取代了一些高毒品种，使有机磷农药的使用更安全有效。但是，农药残留问题也给农产品生产和正常贸易带来了许多负面影响。随着消费者的健康意识、环保意识的日益增强，人们更加关心粮食、蔬菜、水果、中药材及肉类中有无农药污染。国家科技部设立了食品安全重大专项，在食品安全检测方面也投入了大量研究开发经费，说过蔬菜批发市场、集贸市场、超市、宾馆、学校食堂以及个人用户等，对食品安全的现场快速检测有很大的需求。
[0004]目前国内检测蔬菜水果中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留常用的方法有速测卡法及分光光度法，其中速测卡法在检测过程当中需保持环境温度37°C条件进行反应，检测结果需通过肉眼与空白对照卡进行比对，为定性判断，肉眼的判断有时会存在较大误差，若所测结果为阳性样品，则需采用其他分析方法进一步确定其农药残留的含量；分光光度法检测过程中需保持环境温度在37°C左右，实验员需现场配置底物及根据酶的活性配置乙酰胆碱酯酶，检测结果需经计算得到酶抑制率，若得到阳性样品结果则需用其他分析方法进一步确定农药残留含量，此种方法步骤较繁琐。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种结构简单、使用方便的快速检测农产品中有机磷残留的试剂盒及其使用方法，以解决上述【背景技术】中提出的问题。
[0006]为实现上述目的，本发明提供如下技术方案:
一种快速检测农产品中有机磷残留的试剂盒，包括第一显色剂、第二显色剂、20mL加热试管、滴管、定性滤纸、C酶瓶和T酶瓶、所述C酶瓶和T酶瓶均用酶瓶密封盖密封，且装有酶冻干的三酶混合剂，所述第一显色剂为4-8mL的的溴的四氯化碳溶液，所述第二显色剂为4-10g/L刚果红的乙醇溶液。
[0007]所述快速检测农产品中有机磷残留的试剂盒的使用方法，具体步骤如下: (1)将蔗糖、牛血清白蛋白、甘氨酸、甘油加入氯化钙溶液中，搅拌至完全溶解，冷冻保存待用，所述氯化钙溶液的浓度为5-15mmol/L，氯化钙溶液的体积为lOOmL，蔗糖为l_3g，甘氨酸为l_3g，甘油为5-15mL，牛血清白蛋白为l_3g ;
(2)将所述酶冷冻保护剂分别稀释乙酰胆碱酯酶、胆碱氧化酶、过氧化物酶，混合，冷冻干燥后，分别装入C酶瓶和T酶瓶中，所述乙酰胆碱酯酶稀释3000-8000倍，所述胆碱氧化酶稀释200-800倍，所述过氧化物酶稀释200-800倍；
(3)取少量待测样品用清水洗去表面泥土，搅拌5-10min后静置3_5min;
(4)分别向C酶瓶、T酶瓶内滴加纯净水，摇匀后，用塑料滴管向所述T酶瓶中滴加待检样品溶液，向C酶瓶中滴加纯净水或磷酸盐缓冲液，摇匀，静置，用滴管从所述C酶瓶、T酶瓶中吸取反应产物，分别滴加于定性滤纸上，挥发干后，将滤纸的点样处置于加热的第一显色剂的溶液上，所述向C酶瓶、T酶瓶内滴加纯净水为50-200 μ L，所述待检样品溶液为50-200 μ L，所述C酶瓶中纯净水为50-200 μ L，磷酸盐缓冲液为0.lmol/L,且pH为7.0 ;
(5)至溴挥发完后，在步骤二中所述的点样处滴加第二显色剂，观察颜色变化；
(6)若步骤(5)中所述的点样处显蓝色则残留有有机磷农药；若步骤(5)中所述的点样处显粉红或者红色则无有机磷农药残留。
[0008]作为本发明再进一步的方案:所述步骤(4)中加热第一显色剂的溶液的温度为45-55 Γ。
[0009]与现有技术相比，本发明的有益效果是:
本发明成本低、制作简单，检测灵敏度高，其灵敏度比现有技术高出数十倍及上千倍，且检测线性范围显著增宽，使用方便，操作简单快捷，在测试中不需要复杂的配制试剂过程，非专业人员按照试剂盒说明书便可轻易完成检测。
【具体实施方式】
[0010]下面结合【具体实施方式】对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
[0011]实施例1
一种快速检测农产品中有机磷残留的试剂盒，包括第一显色剂、第二显色剂、20mL加热试管、滴管、定性滤纸、C酶瓶和T酶瓶、所述C酶瓶和T酶瓶均用酶瓶密封盖密封，且装有酶冻干的三酶混合剂，所述第一显色剂为4mL的的溴的四氯化碳溶液，所述第二显色剂为4g/L刚果红的乙醇溶液。
[0012]所述快速检测农产品中有机磷残留的试剂盒的使用方法，具体步骤如下:
(1)将蔗糖、牛血清白蛋白、甘氨酸、甘油加入氯化钙溶液中，搅拌至完全溶解，冷冻保存待用，所述氯化钙溶液的浓度为5mmol/L，氯化钙溶液的体积为100mL，蔗糖为lg，甘氨酸为lg，甘油为5mL，牛血清白蛋白为lg ；
(2)将所述酶冷冻保护剂分别稀释乙酰胆碱酯酶、胆碱氧化酶、过氧化物酶，混合，冷冻干燥后，分别装入C酶瓶和T酶瓶中，所述乙酰胆碱酯酶稀释3000倍，所述胆碱氧化酶稀释200倍，所述过氧化物酶稀释200倍；
(3)取少量待测样品用清水洗去表面泥土，搅拌5min后静置3min;
(4)分别向C酶瓶、T酶瓶内滴加纯净水，摇匀后，用塑料滴管向所述T酶瓶中滴加待检样品溶液，向C酶瓶中滴加纯净水或磷酸盐缓冲液，摇匀，静置，用滴管从所述C酶瓶、T酶瓶中吸取反应产物，分别滴加于定性滤纸上，挥发干后，将滤纸的点样处置于加热的第一显色剂的溶液上，加热第一显色剂的溶液的温度为45°C，加热过程是通风的，所述向C酶瓶、T酶瓶内滴加纯净水为50 μ L，所述待检样品溶液为50 μ L，所述C酶瓶中纯净水为50 μ L，磷酸盐缓冲液为0.lmol/L,且pH为7.0 ;
(5)至溴挥发完后，在步骤二中所述的点样处滴加第二显色剂，观察颜色变化；
(6)若步骤(5)中所述的点样处显蓝色则残留有有机磷农药；若步骤(5)中所述的点样处显粉红或者红色则无有机磷农药残留。
[0013]实施例2
一种快速检测农产品中有机磷残留的试剂盒，包括第一显色剂、第二显色剂、20mL加热试管、滴管、定性滤纸、C酶瓶和T酶瓶、所述C酶瓶和T酶瓶均用酶瓶密封盖密封，且装有酶冻干的三酶混合剂，所述第一显色剂为5mL的的溴的四氯化碳溶液，所述第二显色剂为5g/L刚果红的乙醇溶液。
[0014]所述快速检测农产品中有机磷残留的试剂盒的使用方法，具体步骤如下:
(1)将蔗糖、牛血清白蛋白、甘氨酸、甘油加入氯化钙溶液中，搅拌至完全溶解，冷冻保存待用，所述氯化钙溶液的浓度为8mmol/L，氯化钙溶液的体积为100mL，蔗糖为1.5g，甘氨酸为1.5g，甘油为8mL，牛血清白蛋白为1.5g ；
(2)将所述酶冷冻保护剂分别稀释乙酰胆碱酯酶、胆碱氧化酶、过氧化物酶，混合，冷冻干燥后，分别装入C酶瓶和T酶瓶中，所述乙酰胆碱酯酶稀释4000倍，所述胆碱氧化酶稀释300倍，所述过氧化物酶稀释300倍；
(3)取少量待测样品用清水洗去表面泥土，搅拌6min后静置3.5min ;
(4)分别向C酶瓶、T酶瓶内滴加纯净水，摇匀后，用塑料滴管向所述T酶瓶中滴加待检样品溶液，向C酶瓶中滴加纯净水或磷酸盐缓冲液，摇匀，静置，用滴管从所述C酶瓶、T酶瓶中吸取反应产物，分别滴加于定性滤纸上，挥发干后，将滤纸的点样处置于加热的第一显色剂的溶液上，加热第一显色剂的溶液的温度为48°C，加热过程是通风的，所述向C酶瓶、T酶瓶内滴加纯净水为80 μ L，所述待检样品溶液为80 μ L，所述C酶瓶中纯净水为80 μ L，磷酸盐缓冲液为0.lmol/L,且pH为7.0 ;
(5)至溴挥发完后，在步骤二中所述的点样处滴加第二显色剂，观察颜色变化；
(6)若步骤(5)中所述的点样处显蓝色则残留有有机磷农药；若步骤(5)中所述的点样处显粉红或者红色则无有机磷农药残留。
[0015]实施例3
一种快速检测农产品中有机磷残留的试剂盒，包括第一显色剂、第二显色剂、20mL加热试管、滴管、定性滤纸、C酶瓶和T酶瓶、所述C酶瓶和T酶瓶均用酶瓶密封盖密封，且装有酶冻干的三酶混合剂，所述第一显色剂为6mL的的溴的四氯化碳溶液，所述第二显色剂为6g/