油菜蜜酚类特征标识物的鉴别方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种油菜蜜酚类特征标识物的鉴别方法，属于食品科学领域。
【背景技术】
[0002] 蜂蜜（honey)是蜜蜂采集蜜源植物分泌的花蜜酿造而成的天然甜物质。已有研究 表明，蜂蜜具有抗菌、抗氧化、抗感染、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤等功效，因此蜂蜜深受广大 消费者喜爱。然而，由于蜂蜜价格较高，目前国内市场上蜂蜜质量良莠不齐，一些不法商家 在经济利益驱使下，对蜂蜜进行掺假，以达到削减成本谋取暴利的目的。蜂蜜掺假包括两种 方式：（1)向天然蜂蜜产品中直接添加糖浆类物质；(2)将低价蜂蜜添加到或直接冒充高价 蜂蜜出售，也称为品种掺假。蜂蜜成分复杂且不同植物源的蜂蜜成分相近，因此蜂蜜品种掺 假是蜂蜜掺假形式中最难鉴别的一种。蜂蜜中的酚类化合物种类及含量与蜜源植物的种类 密切相关，确定不同种类蜂蜜的酚类标识物对于蜂蜜的品种掺假鉴别有重要意义。
[0003] 油菜)适应性强，耐寒耐旱，作为蜜源植物在我国种植 面积最广，产量最大，素以"铁蜜源"著称。油菜花期为25-30天，开花时间东南、西南地区2 至3月份，长江中下游地区3至4月份，黄河以北地区6至7月份。油菜蜜呈浅琥珀色，略 混浊，有辛辣味和油菜花的香气，极易结晶，结晶后呈乳白色。由于产量高，相对于其他品种 的蜂蜜，油菜蜜价格低廉，故常被用来掺假到高价蜂蜜中。
【发明内容】
[0004] 本发明目的是提供一种油菜蜜酚类特征标识物的鉴别方法，该方法使用高效液相 色谱串联二极管阵列检测器（HPLC-DAD)确定油菜蜜的酚类特征标识物，使用四级杆飞 行时间质谱仪对该酚类特征标识物分子量等信息进行鉴定，从而确定油菜蜜酚类特征标识 物，为鉴别油菜蜜作为低价蜜掺入或直接冒充高价蜜出售提供可靠依据。
[0005]油菜蜜酚类特征标识物的确定是鉴别油菜蜜作为低价蜜掺入或直接冒充高价蜜 出售的关键，为此，发明人开展了以下实验： (1) 选取五种常见高价蜜包括枣花蜜、龙眼蜜、荔枝蜜、椴树蜜和苕子蜜样品加蒸馏水 充分溶解，使用盐酸溶液调节其pH值为2,得到蜂蜜样品水溶液，将蜂蜜样品水溶液注入有 XAD- 2型树脂的层析柱内，依次用pH值为2的盐酸水溶液和蒸馏水冲洗，去除糖类等极性 物质，酚类化合物保留在树脂上，用甲醇进行洗脱，通过减压浓缩的方式去除甲醇洗脱液， 所得残留物用甲醇溶解、定容，配制成供试样品溶液，密封后4°C避光保存；油菜蜜样品做 相同处理； (2) 使用HPLC-DAD对枣花蜜、龙眼蜜、荔枝蜜、椴树蜜、苕子蜜和油菜蜜样品的供试溶 液进行测定分析，确定油菜蜜样品保留时间为50. 49min的特征色谱峰； (3) 采集不同产地的油菜蜜样品，按照步骤（1)方法提取酚类化合物； (4) 使用HPLC-DAD对不同产地的油菜蜜样品的供试溶液进行测定分析，保留时间为 50. 49min的色谱峰强度最大且出现在所有供试油菜蜜样品溶液中； (5)使用高分辨质谱仪QTOF-MS分析油菜蜜样品中保留时间为50. 49min的特征峰，得 到该特征性化合物的分子量为362 ; 上述液相色谱条件为：色谱柱：Zorbax SB-C18 (250mm X 4. 6 mm, 5 Mm);流动相：0. 15%的甲酸溶液和甲醇；流动相流速：1. 0 mL/min ;洗脱方式：梯度洗脱；检测波长：254 nm、280 nm、290 nm、320 nm;柱温：3CTC ; 上述质谱条件为：离子源：电喷雾电离源（ESI);数据采集模式：负离子模式；数据 采集范围：m/zl00~1000 ;离子源参数：裂解电压：130V;毛细管电压：4kV;载气压力：45 psig;气化室温度350°C;干燥气（N2)体积流量10L/min。
[0006] 通过上述实验，发明人获得了一种蜂蜜中油菜蜜酚类特征标识物的鉴别方法，包 括以下步骤： (1) 将蜂蜜加蒸馏水充分溶解，使用盐酸溶液调节其pH值为2,得到蜂蜜样品水溶液， 将蜂蜜样品水溶液注入有XAD- 2型树脂的层析柱内，依次用pH值为2的盐酸水溶液和蒸 馏水冲洗，去除糖类等极性物质，酚类化合物保留在树脂上，用甲醇进行洗脱，通过减压浓 缩的方式去除甲醇洗脱液，所得残留物用甲醇溶解、定容，配制成供试样品溶液，密封后4°C 避光保存； (2) 使用HPLC-DAD对蜂蜜样品的供试溶液进行测定分析，若出现保留时间为50. 49 min的特征色谱峰，进一步使用高分辨质谱仪QT0F-MS分析蜂蜜样品中保留时间为50. 49 min的特征峰，若存在分子量为362,分子式为(：16氏60 9的特征性化合物，即可证明蜂蜜中掺 有油菜蜜。
[0007] 上述液相色谱条件为：色谱柱：Zorbax SB-C18 (250mm X 4. 6 mm, 5 Mm);流动 相：0. 15%的甲酸溶液和甲醇；流动相流速：1. 0 mL/min ;洗脱方式：梯度洗脱；检测波长： 254 nm、280 nm、290 nm、320 nm;柱温：3CTC ; 上述质谱条件为：离子源：电喷雾电离源（ESI);数据采集模式：负离子模式；数据 采集范围：m/zl00~1000 ;离子源参数：裂解电压：130V;毛细管电压：4kV;载气压力：45 psig;气化室温度350°C;干燥气（N2)体积流量10L/min。
[0008] 四级杆飞行时间质谱仪（QT0F-MS)作为典型的高分辨质谱仪器，是物质鉴定的有 力工具之一。相对于普通的液相色谱仪，它可以提供被分析物的相对分子量，化学式及结构 等信息。目前，将质谱与色谱联用的方法，已被广泛应用于临床医学、环境保护、农药测定、 国防化学、食品化学、有机化学等领域，这表明其作为定性、定量工具有较高的准确性。
[0009]本发明的优点与积极效果：（1)本发明中所确定的油菜蜜特征酚类标识物在紫外 280nm波长处有极强的吸收，是其他高价蜜中未检测到或含量极少的明显特征化合物。（2) 对采自中国不同省份和地区的油菜蜜样品进行反复提取分析验证，证明油菜蜜中分子量为 362,分子式为C16H2609的特征酚类标识物稳定存在，不受产地影响。（3)本发明采用四级杆 飞行时间质谱仪对目标化合物进行分析，得到该化合物精确分子量及分子式，为鉴别油菜 蜜作为低价蜜掺入或直接冒充高价蜜出售提供可靠依据。
【附图说明】
[0010] 图1为枣花蜜、龙眼蜜、荔枝蜜、椴树蜜、苕子蜜和油菜蜜样品在紫外280n