Ehd2抗体在制备肺癌免疫组化检测试剂中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体设及一种E皿2抗体在制备肺癌免疫组化检测试 剂中的应用。
【背景技术】
[0002] 肺癌的全称为"原发性支气管肺癌"，其发病率及死亡率近年来上升速度极快。我 国肺癌发病的重点在城市，发病率男性为癌症发病的第一位，女性为癌症发病的第Ξ位。肺 癌的治愈率很低，尚属于一种很难治愈的癌症，究其原因在于病程进展快，发现、诊断和治 疗则相对较晚，早期的发现和诊断对肺癌的治愈至关重要。
[0003] 目前在临床上对肺癌的恶性度判别主要还是基于在组织病理水平对肿瘤组织和 肿瘤细胞进行常规形态学观察，它对癌细胞的分化程度和侵犯特性有较强的辨别能力。但 是，运种基于形态学的解读一方面受病理医师经验等人为因素影响，另一方面缺乏更深层 次的与病人个体发病因素相关的分子依据。对肺癌的发生根源，即基因或相关功能性蛋白 等分子进行检测，对肺癌诊断及预后判断具有重要意义，免疫组织化学检测是深刻认识和 有效控制肿瘤恶性本质的非常重要的方法。
[0004]免疫组织化学技术应用免疫学抗原抗体反应基本原理，通过抗体对体内蛋白质分 子抗原的特异性识别，W及化学标记（巧光素、酶、金属离子、同位素等）的第二抗体的显色 等作用来检测组织细胞内目标抗原（多肤和蛋白质）的表达量及其亚细胞定位。近年来， 随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的成功研发，更主要的是对肿瘤分子机制 认识的不断深入，免疫组化在肿瘤的分子诊断与鉴别中的应用价值受到了普遍的认可。
[0005] 本申请项目前期研究发现E皿2蛋白的表达与定位在肺癌中产生 异变，自主研发的E皿2特异抗体可用于肺癌的免疫组化检测。E皿2巧psin homology巧Η)-domain-containingprotein2)是E皿蛋白的一种，是一类新型膜转运调 控蛋白，含有高度保守的EH结构域。参与受体内吞等胞膜转运的多步调控，是整个胞膜转 运机制的必不可少的重要环节，在多种细胞中起分子与物质运输及信号传导等关键作用， 它的失调将导致细胞信号应答失当及细胞功能素乱，并可能进而引发疾病。因此对E皿2 进行免疫组化检测将更客观准确地反映肿瘤的异化本质和患者个体的临床特性。目前，由 E皿2特异抗体制备的免疫组化试剂未见报道，E皿2抗体在制备肺癌免疫组化检测试剂中 的应用也没有先例。
[0006]为解决上述问题，本发明公开了一种E皿2特异抗体在制备肺癌免疫组化检测试 剂中的应用。
【发明内容】
[0007]为解决【背景技术】中提到的目前在临床上对肿瘤的判别主要还是基于在组织病理 水平对肿瘤组织和肿瘤细胞进行常规形态学观察，受病理医师经验等人为因素影响较大， 缺乏更深层次的与病人个体发病因素相关的分子依据的问题，本发明公布了E皿2特异抗 体在制备肺癌免疫组化检测试剂中的应用。
[0008] 本发明解决的技术问题通过W下技术方案来实现：
[0009] E皿2抗体在制备肺癌免疫组化检测试剂中的应用，是W-种对人E皿2蛋白特异 的抗体作为一抗或核屯、抗体。
[0010] 所述E皿2蛋白是指由基因E皿2编码的蛋白，所述基因E皿2的GeneBank国际 通用序列编号为：NM_〇14601，所述基因E皿2编码蛋白的GeneBank国际通用序列编号为： NP-055416。
[0011] 所述一种对人E皿2蛋白特异的抗体，其特征在于，所述抗体能特异性识别人E皿2 蛋白，所述识别位点的氨基酸序列为：503-SEQ ID NO :1-543,由该氨基酸序列构成的一种 多肤，其氨基酸序列为SEQ ID N0:1。
[0012] W所述多肤的氨基酸序列为核屯、序列对其进行修饰，所述修饰为在所述多肤N端 连接一个半脫氨酸；修饰后的所述多肤经纯化后作为抗原对动物进行免疫W制备E皿2抗 体并进行抗原纯化。
[0013] 所述肺癌免疫组化检测试剂，用于对肺癌组织中E皿2的表达水平和定位进行检 巧。，其特征是采用前述对人E皿2蛋白特异的抗体作为一抗或核屯、抗体，配W常规免疫组化 试剂如二抗、显色剂及缓冲剂。
[0014] 有益效果
[0015] 本发明的有益效果为：
[0016] 本发明公开了E皿2抗体在制备肺癌免疫组化检测试剂中的应用，由于E皿2蛋白 参与受体与胞膜转运的多步调控，W及在各种细胞中对维持物质运输与信号传导等起关键 作用，与肿瘤等疾病的发生密切相关。因此对E皿2进行免疫组化检测将更客观准确地从分 子水平反映肿瘤的异化本质和患者个体的临床特点，符合肿瘤的精准医疗原则和趋势。
[0017] 本发明公开的E皿2抗体在制备肺癌免疫组化检测试剂中的应用，W对人E皿2蛋 白特异的抗体作为一抗或核屯、抗体，制备肺癌免疫组化检测试剂，制备出的试剂特异性好， 灵敏度高，显色性好。
【附图说明】
[001引图1为免疫印迹检测结果。
[0019] 图2为肺癌组织200倍镜下免疫组化图。左上为癌旁正常组织，右下为癌组织。
[0020] 图3为肺癌组织200倍镜下免疫组化图。
[0021] 图4为肺癌组织400倍镜下免疫组化图。
【具体实施方式】
[0022] 实施例1 :E皿2特异抗体的制备
[0023] 1)实验材料来源
[0024] 新英格兰大白兔购于上海强耀生物。 阳0巧]多肤CD邸FALASHLIEAKLEGHGLPANLPRRLVPPSKRRHKGSAE由天津赛尔生物技术有限 公司定制并与KLH偶联。
[0026] CNBr活化的凝胶珠，福氏完全佐剂及福氏不完全佐剂购自Invitrigen公司。
[0027]。动物免疫 阳02引取4月龄新西兰大白兔3只，将lOOug抗原多肤溶于0. 2ml0. 1MPBS(pH7. 2)， 与等体积福氏完全佐剂充分混匀，腹部皮下多点注射。第一次免疫后第15和29天，分别用 lOOug多肤/0. 2mlPBS与等体积福氏不完全佐剂充分混合后加强免疫。
[0029] 3化皿2抗血清的制备
[0030] 于免疫结束后一周颈动脉取血，37°C静置3小时后离屯、取血清。
[0031] 4)抗原凝胶珠制备 阳03引 CNBr活化的凝胶珠于ImM肥1中浸泡30分钟，用偶联缓冲液（含0. 1MNa肥03抑 8. 3,和0. 5M化C1)清洗，按Img多肤加1ml凝