免疫色谱法中使用光反射材料的检测光的增强方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及用于特异性且迅速地检测样品中的被检测物质的方法和使用该方法 的试剂盒。
【背景技术】
[0002] 免疫色谱法是利用如下原理，通过目视或检测装置检测有无不溶性载体颗粒的聚 集，从而分析有无被检测物质的免疫学方法：使用结合有特异性地识别被检测物质的配体 的不溶性载体颗粒，该载体颗粒捕捉被检测物质，利用毛细管现象在具有纤维结构的试验 片中移动，与在试验片中的规定位置固定的特异性地结合被检测物质的捕捉物质结合，由 此凝集的不溶性载体颗粒在试验片中的规定位置聚集。由于它的简便性，被广泛用作非实 验室用的P0CT(即时检验（PointOfCareTest))的体外诊断用药品。
[0003] 以往，作为标记特异性地识别被检测物质的配体的对象的颗粒，使用金胶体、铂金 胶体、着色聚苯乙烯颗粒等不溶性载体颗粒，利用各种颗粒的色调，使用目视或专用的装置 判断有无颗粒的聚集。
[0004] 以进一步高灵敏度化作为课题，有人提出了使用发射荧光的微粒发挥免疫凝集反 应的简便性以提高灵敏度（参照专利文献1)。
[0005]另外，在使用发射荧光的微粒的情况下，为了其高灵敏度检测而需要专用的装置。 其便携性在考虑作为P0CT利用的情况下是非常重要的课题。
[0006] 为了解决该课题，还有人提出了极具便携性、廉价且耐用的灵敏度高的荧光检测 用装置（参照专利文献2)。
[0007] 虽然提出了使用这种发射荧光的颗粒或装置用于免疫色谱法的高灵敏度检测方 法，但在检测在试验片上的规定位置聚集的发射荧光的颗粒受到光照射被激发而从上述颗 粒产生的光的试验系统中，尚未有人提出可通过改良其试验片和储存试验片的盒子（而非 颗粒）进行高灵敏度检测的技术。
[0008] 现有技术文献 专利文献 专利文献1:日本特开2012-32263号公报 专利文献2:日本特表2005-515429号公报。
【发明内容】
[0009] 发明所要解决的课题 在使用专用的检测装置高灵敏度化时，检测装置侧的检测结构多数不得不复杂化，另 一方面使用含有被检测物质的来源于生物体的物质进行了试验的试验片（P0CT试剂盒本 体）在使用后必须废弃。为了在临床现场广泛普及并可在各领域应用，希望试验片的处理 简便且廉价。因此，试验片的结构必须简单。
[0010] 本发明的目的在于提供一种免疫色谱试验片，其可使被检测物质的高灵敏度检测 与简单的试验片结构这样的通常难以相容的项目并存。
[0011] 解决课题的手段 在使用荧光检测装置等检测装置的测定中，从检测装置所含有的光源向试验片照射一 定波长的激发光。试验片上聚集的发射荧光的颗粒接受该激发光，发出特定波长的荧光。通 过检测装置检测从该发射荧光的颗粒发出的特定波长的光。
[0012] 虽然从检测装置照射的激发光照射试验片上的发射荧光的颗粒聚集的部位，但此 时并不是所有的激发光照射到颗粒，多数的光会穿越至试验片下部，无助于荧光的产生而 会降低光强度。
[0013] 本发明的试验片通过在试验片下部设置反射照射光的光反射材料来反射会穿越 至该试验片下部的照射光，有效地将照射光照射到聚集的发射荧光的颗粒，从而增强产生 的荧光、即最终检测的光。本发明的试验片与以往的试验片相比无大的变化，其不具有复杂 的结构而具有简单的结构，但是，通过设置反射材料，使得可高灵敏度地检测被检测物质。
[0014] 另外，在使用着色成可见光区域的颜色的颗粒而不是发射荧光的颗粒的情况下， 通过在试验片下部设置反射照射光的光反射材料，在颗粒聚集的部位照射的光的反射光因 颗粒的存在而衰减，另一方面，在颗粒聚集的部位以外的周围的部位反射后被检测的光的 强度增强，最终检测的光增强，使得可高灵敏度地检测被检测物质。
[0015] SP，本发明如下所述。
[0016] [1]免疫色谱试验片，其含有固定有作为与被检测物质结合的配体的捕捉物质的 膜，使用结合有与被检测物质结合的配体的不溶性载体颗粒，通过将该不溶性载体颗粒捕 捉至固定于膜上的捕捉物质而使其聚集，将光照射至膜，检测在该不溶性载体颗粒聚集的 部位或不溶性载体颗粒聚集的部位以外的周围的部位发出的光，由此测定被检测物质，其 中，在膜的照射光的一侧的相反侧设置光反射材料。
[0017] [2] [1]的免疫色谱试验片，其中，不溶性载体颗粒为进行了荧光标记的不溶性载 体颗粒，照射激发光作为照射光，通过检测从不溶性载体颗粒聚集的部位发出的荧光来测 定被检测物质。
[0018] [3] [1]的免疫色谱试验片，其中，不溶性载体颗粒为着色的不溶性载体颗粒，通 过照射照射光并检测在不溶性载体颗粒聚集的部位和不溶性载体颗粒聚集的部位以外的 周围的部位反射的反射光，测定被检测物质。
[0019] [4] [1]~[3]中任一项的免疫色谱试验片，其使用照射光的总反射率为85%以上 的光反射材料。
[0020] [5] [1]~[4]中任一项的免疫色谱试验片，其还具有试样添加部位、吸收带和标记 部位。
[0021] [6] [1]~[5]中任一项的免疫色谱试验片，其中，光反射材料为由金属制成的反射 材料。
[0022] [7] [6]的免疫色谱试验片，其中，金属为铝或铜。
[0023] [8] [7]的免疫色谱试验片，其中，在金属为铝的情况下使用250nm~1000nm的照 射光，在金属为铜的情况下使用600nm~1000nm的照射光。
[0024] [9] [1]~[8]中任一项的免疫色谱试验片，其中，光反射材料与膜的照射照射光的 一侧的相反侧接触而设置。
[0025] [10]免疫色谱试验片，其是收纳在储存容器中的[1]~[9]中任一项的免疫色谱 试验片，其中，在作为储存容器的内面且位于膜的照射照射光的一侧的相反侧的储存容器 内面设置光反射材料。
[0026] [11] [10]的免疫色谱试验片，其中，光反射材料具有在免疫色谱试验片的检测部 位附近聚集反射的照射光的结构。
[0027] [12] [10]或[11]的免疫色谱试验片，其中，储存容器本身由光反射材料制成。
[0028] [13] [1]~[12]中任一项的免疫色谱试验片，其中，被检测物质和与被检测物质结 合的配体为：抗原和抗体，或抗体和抗原。
[0029] [14]增强检测光的方法，其中，在免疫色谱法中通过在膜的照射光的一侧的相反 侧设置光反射材料来增强检测光，所述免疫色谱法含有固定有作为与被检测物质结合的配 体的捕捉物质的膜，使用结合有与被检测物质结合的配体的不溶性载体颗粒，通过将该不 溶性载体颗粒捕捉至固定于膜上的捕捉物质而使其聚集，将光照射至膜，检测在该不溶性 载体颗粒聚集的部位或不溶性载体颗粒聚集的部位以外的周围的部位发出的光，由此测定 被检测物质。
[0030] [15] [14]的增强检测光的方法，其中，不溶性载体颗粒为进行了荧光标记的不溶 性载体颗粒，照射激发光作为照射光，通过检测从不溶性载体颗粒聚集的部位发出的荧光 来测定被检测物质。
[0031] [16] [14]的增强检测光的方法，其中，不溶性载体颗粒为着色的不溶性载体颗 粒，通过照射照射光并检测在不溶性载体颗粒聚集的部位和不溶性载体颗粒聚集的部位以 外的周围的部位反射的反射光，测定被检测物质。
[0032] [17] [14]~[16]中任一项的增强检测光的方法，其使用照射光的总反射率为85% 以上的光反射材料。
[0033] [18] [14]~[17]中任一项的增强检测光的方法，其中，光反射材料为由金属制成 的反射材料。
[0034] [19] [18]的增强检测光的方法，其中，金属为铝或铜。
[0035] [20] [19]的增强检测光的方法，其中，在金属为铝的情况下使用250nm~1000nm 的照射光，在金属为铜的情况下使用600nm~1000nm的照射光。
[0036] [21] [14]~[20]中任一项的增强检测光的方法，其中，被检测物质和与被检测物 质结合的配体为：抗原和抗体，或抗体和抗原。
[0037] 本说明书包含作为本申请的优先权基础的日本国专利申请2013-161691号的说 明书和/或附图中记载的内容。
[0038] 发明效果 在免疫色谱试验中，本发明在免疫色谱试验片上的不溶性载体颗粒聚集的部位的下侧 设置光反射材料，所述免疫色谱试验使用荧光色素标记的不溶性载体颗粒或着色的不溶性 载体颗粒，使该颗粒在免疫色谱试验片上聚集，检测从该颗粒发出的荧光，或者，使用着色 的不溶性载体颗粒，使该颗粒在免疫色谱试验片上聚集，在含有该颗粒聚集的部位和聚集 的部位以外的周围的部位的部位检测反射光。因此，在使用荧光色素标记的不溶性载体颗 粒的情况下，即使在照射至荧光色素标记的不溶性载体颗粒聚集的部位的激发光透过膜的 情况下，也可通过光反射材料反射，照射至荧光色素，从而激发荧光色素。另外，产生的荧光 的一部分被光反射材料反射，作为检测光被检测。结果，作为荧光的检测光的强度增强。另 外，在使用着色的不溶性载体颗粒的情况下，由于照射光被不溶性载体颗粒吸收，所以照射 的光的反射光因不溶性载体颗粒而衰减，而另一方面，照射光在不溶性载体颗粒聚集的部 位以外的周围的部位反射，反射的光作为增强的检测光被检测。结果，可提高被检测物质的 检测灵敏度。
【附图说明】
[0039] 图1是示出使用本发明的具备光反射材料的免疫色谱试验片的情况下检测光的 增强原理的图。A示出使用荧光标记的不溶性载体颗粒的情况，B示出使用着色的不溶性载 体颗粒的情况。
[0040] 图2是示出各种金属的总反射率的图。
[0041] 图3是示出本发明的含有光反射材料的免疫色谱试验片、装置中光反射材料的位 置和形状的图。
[0042] 图4是示出本发明的含有光反射材料的免疫色谱试验片和以往的免疫色谱法试 验片的结构的图。
[0043] 图5是示出本发明的含有光反射材料的免疫色谱试验片和以往的免疫色谱法试 验片的检测部位的荧光的图。
[0044] 图6是示出本发明的含有光反射材料的免疫色谱试验片和以往的免疫色谱法试 验片的结构、以及实施例2的切断部位的图。
[0045] 图7是示出使用各种金属箱作为光反射材料的情况下的反射效果的图。
[0046] 图8是示出使用各种金属箱作为光反射材料的情况下的反射效果的图。
[0047] 图9-1是示出使用着色的聚苯乙烯颗粒的情况下使用光反射材料的反射效果的 图。
[0048] 图9-2是示出使用着色的聚苯乙烯颗粒的情况下照射的光的反射光因颗粒导致 的衰减的图。
【具体实施方式】
[0049] 以下详细地说明本发明。
[0050] 本发明为用于通过免疫色谱法检测被检测物质的试验片。在免疫色谱法中，利用 如下原理，在含有不溶性载体颗粒聚集的部位的试验片上照射光，将在试验片上的部位发 出的光作为检测光通过检测装置或目视来测定，检测有无不溶性载体颗粒的聚集，从而分 析有无被检测物质：使用固定有特异性地识别并结合被检测物质的配体的试验片和与特 异性地识别被检测物质的配体结合的不溶性载体颗粒，该不溶性载体颗粒与被检测物质结 合，利用毛细管现象在具有纤维结构的试验片中移动，与在试验片中的规定部位固定的与 被检测物质特异性结合的捕捉物质结合，由此在试验片上的规定部位形成捕捉物质-被检 测物质-不溶性载体颗粒的复合物，凝集的不溶性载体颗粒聚集。
[0051] 本发明的免疫色谱试验片的特征在于，在试验片上的照射光的一侧的相反侧具备 光反射材料。在被检测物质存在的情况下，不溶性载体颗粒在试验片上的固定有捕捉物质 的部位、即检测部位聚集。通过具备光反射材料，增强在试验片上的不溶性载体颗粒聚集的 检测部位发出并通过光检测装置或目视检测的检测光。即，增强在试验片上的不溶性载体 颗粒聚集的检测部位发出的光，或者，与在该检测部位发出的光相比，在该检测部位以外的 周围的部位发出的光的强度增强，结果增强检测光的强度。在这里，检