毛细管电泳两步速差模式提高毛细管电泳峰容量的装置的制造方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种毛细管电泳两步速差模式提高毛细管电泳峰容量的装置。
【背景技术】
[0002]峰容量是在给定的分离体系和操作条件下，在一定时间内，最多可分离出来达到一定分离度的峰的个数，峰容量已成为衡量分离方法分离能力的有效标尺。在色谱分离中，提高峰容量的方法主要有二维或者多维色谱分离、梯度洗脱、增加分离柱长度以及改变固定相粒径等。
[0003]但是对于毛细管电泳来说，至今还未出现一种成熟的方法来完成这个目标。一般只能通过提高分离度的方式增大峰容量，也就是增加毛细管有效分离长度、优化背景电解质条件以及减少进样量等方式。但是过分增加毛细管长度因样品扩散而降低分离度；背景电解质条件的优化能够有限度改善分离度；减小样品进样量虽然能够提高组分间分离度，但是对于某些复杂样品(如生物样品)来说，其中各种组分的含量差别很大，减小进样量同时意味着低含量样品的缺失，导致检测不到这些组分；我们之前提出的毛细管电泳速差模式，是通过控制高压电场，把样品区带按各组分泳动速度不同分割成若干区带，由于每一区带内样品量减小，进而使分离度增加。这个方法在很大程度上改善了毛细管电泳的分离度，但仅适用于样品中组分峰重叠不严重的情况，否则就达不到很好的效果。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种应用广泛的毛细管电泳两步速差模式提高毛细管电泳峰容量的装置。
[0005]本发明的技术方案概述如下:
[0006]毛细管电泳两步速差模式提高毛细管电泳峰容量的装置，包括负极贮液槽1，正极贮液槽2、样品槽4和毛细管5，还包括第一零极贮液槽3、第二零极贮液槽13，毛细管5贯穿第一零极贮液槽3和第二零极贮液槽13设置，毛细管5的一端与正极贮液槽2或样品槽4活动连接，毛细管5的另一端与负极贮液槽1或样品槽4活动连接，位于第一零极贮液槽内的毛细管设置有导电不传质的第一缝隙6，位于第二零极贮液槽内的毛细管设置有导电不传质的第二缝隙16，在毛细管5的大部分外表面设置有保护层7，在毛细管5没有设置有保护层的部分为检测窗8，检测窗8位于第一零极贮液槽3与负极贮液槽1之间；负电极设置在负极贮液槽内，负电极通过导线与电源相连，正电极设置在正极贮液槽内，正电极通过导线与电源相连，零电极设置在第一零极贮液槽或第二零极贮液槽内，零电极通过导线与电源地线相连。
[0007]本发明的优点:
[0008]利用本发明的装置在提高毛细管电泳峰容量中，降低了毛细管自身分离能力的要求，即便样品中部分组分不能达到基线分离，应用此方法最终也能实现基线分离，从而提高毛细管电泳整体峰容量。除此之外，此装置在增大峰容量的同时并不丢失低含量组分信号。
【附图说明】
[0009]图1为毛细管电泳两步速差模式提高毛细管峰容量的装置示意图。
[0010]图2为传统毛细管电泳法机理示意图。
[0011]图3为使用本发明装置的机理示意图。
[0012]图4为毛细管电泳一步速差模式分离二苯胍和1’ 3- 二邻甲苯基胍混合物的对照结果。
[0013]图5为毛细管电泳一步速差模式拉宽样品区带的结果。
[0014]图6为毛细管电泳两步速差模式分离二苯胍和1’ 3- 二邻甲苯基胍混合物的对照结果。
【具体实施方式】
[0015]下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。
[0016]毛细管电泳两步速差模式提高毛细管电泳峰容量的装置(见图1)，包括负极贮液槽1，正极贮液槽2、样品槽4和毛细管5，还包括第一零极贮液槽3、第二零极贮液槽13，毛细管5贯穿第一零极贮液槽3和第二零极贮液槽13设置，毛细管5的一端与正极贮液槽2或样品槽4活动连接，毛细管5的另一端与负极贮液槽1或样品槽4活动连接，位于第一零极贮液槽内的毛细管设置有导电不传质的第一缝隙6，位于第二零极贮液槽内的毛细管设置有导电不传质的第二缝隙16，在毛细管5的大部分外表面设置有保护层7，在毛细管5没有设置有保护层的部分为检测窗8，检测窗8位于第一零极贮液槽3与负极贮液槽1之间；负电极设置在负极贮液槽内，负电极通过导线与电源相连，正电极设置在正极贮液槽内，正电极通过导线与电源相连，零电极设置在第一零极贮液槽或第二零极贮液槽内，零电极通过导线与电源地线相连。
[0017]毛细管上的第一缝隙6和第二缝隙16的制备:
[0018]用刀片在垂直于毛细管的方向上轻轻切割毛细管一侧，用拇指抵着未被切割的一侧轻轻将切点掰开，形成一个切口，然后恢复原状，将切口处朝下用AB胶分别将其固定在第一零极贮液槽3和第二零极贮液槽13内。由于切口处形成的缝隙很小，不足以让样品流出，但可以让离子通过，也就是说，切口处具有导电不传质的特性。当零电极插入第一零极贮液槽3或者第二零极贮液槽13时，就会分别与毛细管两端的正、负极分别形成电回路。
[0019]原理介绍:
[0020]为了方便对比说明，我们给出传统毛细管电泳分离示意图(图2)。
[0021]首先介绍毛细管电泳一步速差模式，使用本发明的毛细管电泳两步速差模式提高毛细管电泳峰容量的装置(见图3)。
[0022]1.毛细管进口端(图1的右端)插入样品槽，利用重力进样法使样品进入毛细管内。
[0023]2.把样品槽拔下，将毛细管进口端插入正极贮液槽，正、负和零电极分别插入正极贮液槽2、负极贮液槽1和第一零极贮液槽3，第二零极贮液槽13闲置不用。调节两个回路的电场强度使得E1= E 2(正极与零极间电场强度为Ei，零极与负极间电场强度为E2)，当样品组分到达零电极时，调节电场强度，使E’ 1= 0，E’ 2= Ερ已经通过零电极的样品组分保持迀移速度不变，而其余样品组分迀移停止，实现样品区带切割。经过时间^后(ti越长，被切割样品区带间距离也越大)。
[0024]3.再次调节电场强度，使E’1= E’ 2= Ei，停滞的样品组分继续向检测窗口迀移。经过时间12后(t 2越长，被切割样品区带越宽)。
[0025]4.重复执行2和3两个步骤。
[0026]这样重复多次便将样品区带切割成若干小区带，由于样品扩散效应减小，样品各组分的分离度得到提高。
[0027]毛细管电泳