一种抗gp210抗体检测试剂盒及其检测方法
【技术领域】
[0001]本发明设及磁微粒化学发光免疫诊断领域，特别是设及一种抗gp210抗体检测试 剂盒及其检测方法。
【背景技术】
[0002] 自身免疫性肝病是一类原因不明的慢性肝病，主要包括3种与自身免疫密切相关 的，W肝、胆损伤为主的疾病：自身免疫性肝炎(Autoimmunehepatitis;AIH)、原发性胆汁 性肝硬化（Primarybiliarycirrhosis;PBC)和原发性硬化性胆管炎（PrimaiT scleroticcholangitis;PSC)，自身免疫性肝病的诊断主要依靠病史、临床表现、体征和 实验室检查结果。每种自身免疫性肝病都具有特征性自身抗体谱，自身抗体检测对自身免 疫性肝病的诊断、分型及鉴别诊断具有重要意义。近年来，国外对自身免疫性肝病相关自身 抗体谱祀抗原性质、临床诊断应用价值(尤其是无症状期的早期诊断）、疾病临床特点及活 动性的关系等方面研究进展迅速。
[0003] 抗即210(Glucop;rotein210)抗体的祀抗原为位于核孔复合物上的210KD跨膜糖 蛋白，所识别的表位是gp210簇基末端上的15个氨基酸残基。该自身抗体被一致认为是PBC 的高度特异性抗体。Wgp210抗原决定簇的重组蛋白或合成多肤作为抗原，应用免疫印迹法 或化ISA法检测抗即210抗体，其诊断PBC的特异性可高达99%，敏感性为10%~41 %。约1/4 (10%~40% )的PBC患者中，抗即210抗体可与ΑΜΑ同时出现，抗即210抗体也存在于20%~ 47 %ΑΜΑ阴性的PBC患者中。抗gp210抗体的存在及抗体滴度一般不随患者诊断的时间及临 床过程而变化，但抗体阳性与阴性患者的预后有显著性差异，阳性患者死于肝衰竭者明显 多于阴性者。抗gp210抗体可能作为一种独立的预后指标，阳性提示患者预后不良。
[0004]对于抗gp210抗体的检测方法主要为间接免疫巧光法和酶联免疫吸附法，但运些 方法都存在着不足之处： 一、间接免疫巧光法 该法的基本原理是用特异性的抗体与切片中的抗原结合后，继用间接巧光抗体，与前 面的抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体巧光复合物。在巧光显微镜下，根据复合物的发光 情况来确定所检测的抗原。该方法评价：由于结合在抗原抗体复合物上的巧光素抗体增多， 发出的巧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的： (1)运用此法是可能出现假阳性。
[0005] (2)在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别。
[0006] (3)操作相对复杂，需要价格较昂贵的巧光显微镜，在很多基层医院难W推广，也 不太适用于标本量较多的实验室。
[0007](4)巧光测定中的本底较高，巧光免疫技术用于定量测定有一定困难。
[000引巧)结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足。
[0009]二、酶联免疫吸附法 ELISA检测抗gp210抗体，简便易行，特异性高，与间接免疫巧光法联合检测，可为临床 对PBC的诊断和治疗提供更为客观的实验依据。但与其他生物检测或免疫检测比较，运种ELISA检测方法、技术、工具或产品仍有较多的不足而使其应用受限，运些不足主要包括W 下几个方面： (1)检测试剂在检测过程中为开放方式，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检 测结果； (2化LISA方法多采用辣根过氧化物酶进行检测，其检测范围和灵敏度都较低。
[0010] (3化LISA方法的检测时间通常反应是一件较长，完成一个测试所需的总时间一般 在2个小时W上，不能完全满足临床上的快速诊断的需求。
[0011] (4化LISA方法不能随机进样检测，检测结果存在滞后性。
【发明内容】
[0012] 本发明主要解决的技术问题是提供一种抗gp210抗体检测试剂盒及其检测方法， 具有稳定性好，灵敏度高，重复性好等优点。
[0013] 为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是:提供一种抗gp210抗体检测 试剂盒，包括生物素化gp210抗原、AP-抗人IgG抗体、校准品、质控品、磁微粒试剂、化学发光 底物和清洗液，所述生物素化gp210抗原为偶联有生物素的gp210抗原，所述AP-抗人IgG抗 体为碱性憐酸酶标记的抗人IgG抗体，所述磁微粒试剂为表面有亲和素的纳米磁微粒悬浮 液。
[0014] 在本发明一个较佳实施例中，所述生物素化gp210抗原是生物素与gp210抗原分子 表面的-N出基团反应得到的。
[0015] 在本发明一个较佳实施例中，所述AP-抗人IgG抗体是碱性憐酸酶AP与抗人IgG抗 体偶联得到的。
[0016] 在本发明一个较佳实施例中，所述磁微粒试剂中所述磁微粒的直径为0.1-0.5μηι， 所述磁微粒具有超顺磁性。
[0017] 在本发明一个较佳实施例中，所述校准品由含抗gp210抗体IgG的人血清配制而 成，用于得到校准曲线。所述质控品由含抗gp210抗体IgG的人血清配制而成。所述清洗液为 清洗浓缩液。
[0018] 在本发明一个较佳实施例中，所述化学发光底物中包括3-(2-螺旋金刚烧)-4-甲 氧基-4- (3-憐氧酷)-苯基-1，2-二氧环乙烧二钢盐AMPPD。
[0019] 提供一种用抗gp210抗体检测试剂盒检测的方法，包括步骤为:将样本与磁微粒试 剂、生物素化gp210抗原混匀得到第一复合物，对所述第一复合物进行洗涂，再加入AP-抗人 IgG抗体混匀，得到第二复合物，对所述第二复合物进行洗涂，再加入化学发光底物，测定发 光结果。
[0020] 在本发明一个较佳实施例中，所述方法包括步骤为:将样本与磁微粒试剂、生物素 化gp210抗原混匀，在37°C下解育15min，得到第一复合物，对所述第一复合物洗涂3次，再加 入AP-抗人IgG抗体，混匀并在37°C下解育15min，得到第二复合物，对所述第二复合物洗涂3 次，再加入化学发光底物，混匀并在37°C下解育5min，测定发光结果。
[0021 ]本发明的有益效果是:本发明的抗gp210抗体检测试剂盒及其检测方法，采用全自 动磁微粒化学发光检测方法，选取碱性憐酸酶AP-金刚烧AMPPD体系，具有稳定性好，灵敏度 高，重复性好等优点。同时大大缩短了检测时间，完成一个测试所需的总时间近在50分钟W内，而且操作简易方便，真正实现了检测全自动化。
【附图说明】
[0022] 为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使 用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于 本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可W根据运些附图获得其它 的附图，其中：抗gp210抗体检测试剂盒及其检测方法 图1是本发明抗gp210抗体检测试剂盒进行全自动化学发光检测的原理图； 图2是本发明抗gp210抗体试剂盒的实际检测浓度与理论浓度的线性回归图。
【具体实施方式】
[0023]下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施 例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通 技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范 围。
[0024] 实施例一. 提供一种抗即210抗体检测试剂盒，包括生物素化即210抗原（R1