一种石蜡制片粘片剂配方及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于制片技术领域，涉及一种石蜡制片粘片剂配方及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 制片技术是生物显微观察技术的一个重要组成部分，而石蜡制片技术又是生物制 片技术中应用最为普遍的一种，它适合于绝大部分生物材料的光学显微镜观察，对硬件要 求较低，实验成本也很低，是各层次研究人员比较钟爱的一种显微观察手段。粘片剂是石蜡 制片技术中的一个重要环节，脱片现象是石蜡制片中极为常见的一种情况，很多时候因为 脱片而导致整个制片过程失败，既浪费了大量试剂，也消耗了宝贵的时间；当实验材料比较 稀有和珍贵时，因粘片剂不良而导致的制片失败，更会造成无法挽回的损失和遗憾。石蜡制 片技术中最为常用的粘片剂主要有火棉胶粘片剂、明胶粘片剂和蛋白粘片剂，但他们存在 的最突出的共性问题是脱片率较高，实验失败率也随之增高，尤其是对于技术不娴熟的操 作者来说，脱片始终是一个颇令人烦恼的问题。所以，探索适用性更广、效果能够得到更好 保障的粘片剂新配方及其制备方法，对丰富和完善生物制片技术具有积极的意义，实际推 广应用前景广阔。
[0003] 目前，各类文献记载的石蜡切片制片过程中用到的粘片剂有三种，即火棉胶粘片 剂、明胶粘片剂和蛋白粘片剂，其配方如下：
[0004] 火棉胶粘片剂:火棉胶1~2g溶解在纯酒精和乙醚各半的混合液中即成。
[0005] 明胶粘片剂:溶液甲（明胶lg+100mL蒸馏水+石炭酸2g+甘油15mL)，溶液乙（40%甲 醛4mL+100mL蒸馏水），使用时先滴加溶液甲，再滴加溶液乙。
[0006] 蛋白粘片剂:鸡蛋清25mL+甘油25mL+石炭酸0.5g。
[0007] 以上三种传统的火棉胶粘片剂、明胶粘片剂和蛋白粘片剂在石蜡制片中都有应 用，但存在的问题也较为突出，这些不足集中体现在：（1)三种粘片剂的脱片率均比较高，应 用效果难以把握；（2)明胶粘片剂涉及试剂较多，而且使用步骤较为繁琐；（3)三种粘片剂均 涉及毒性较强的化学试剂，如石炭酸、乙醚，对长时间操作制片人员存在潜在的人身危害； (4)三种粘片剂通用性比较欠缺，如火棉胶粘片剂更加适合大型材料和切片较厚的材料，对 小型或要求切片较薄时使用效果较差;蛋白粘片剂更加适合动物材料等。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺陷，提供一种石蜡制片粘片剂配方及 其制备方法，达到以下目的：
[0009] (1)提尚石錯制片过程中粘片剂的广谱性；（2)提尚粘片剂使用效果，改善石錯制 片过程中传统粘片剂黏固不牢固、易于脱落的问题；（3)提高石蜡制片的成功率。
[0010]其具体技术方案为：
[0011] 一种石蜡制片粘片剂配方，每100mL含有以下组成成分:糯米粉乳液3~5mL、鸡蛋 清1~3mL、明胶0.4~0.6g，余量为蒸馏水。
[0012] 优选地，每lOOmL含有以下组成成分:懦米粉乳液4mL、鸡蛋清2mL、明胶0.5g，余量 为蒸馏水。
[0013] -种本发明所述的石蜡制片粘片剂配方的制备方法，包括以下步骤：
[0014] 步骤1.糯米粉乳液的制备：称取糯米粉3g，于烘箱中130°C干热lh，放入10mL离心 管中，加7mL蒸馏水，在涡旋振荡器震荡lOmin后，2000r/min离心2min，上清液即为糯米粉乳 液；
[0015] 步骤2.粘片剂混合液的制备过程：
[00?6]①称取明胶0.4~0.6g，放入烧杯，加入蒸馏水70mL，置于36°C烘箱至明胶完全溶 解，再冷却至室温，备用；
[0017] ②吸取1~3mL鸡蛋清加入10mL离心管，在涡旋振荡器震荡lOmin，静置lOmin后加 入步骤①的冷却至室温的明胶液;再加入步骤1所述的糯米粉乳液3~5mL，室温下混合均 匀，用5层纱布过滤，将滤液用蒸馏水定容至100mL，即制得的片剂，粘片剂于4°C保存备用。
[0018] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0019] 本发明通过不断的探索、优化，摸索出了一种新型粘片剂配方及其制备技术，丰富 了石蜡制片技术途径，在石蜡制片、微生物形态观察中具有很强的实用性。
[0020] 1.在本发明技术方案中，将糯米粉乳液引入粘片剂配方中，是基于糯米粉的主要 成分是支链淀粉、蛋白质和少量脂肪，当糯米粉干热糊化后，分子之间的相互作用力增加， 可促进淀粉成分和蛋白成分的结合，形成新的更加复杂的网络结构，其结构也更加致密，且 胶凝性和稳定性均有较大提高，更加符合粘片剂对成分特征的要求。
[0021] 2.本发明粘片剂配方中的鸡蛋清含有0.3%的纤维状粘蛋白，这是作为粘片剂成 分之一的本质原因。但要充分发挥蛋清的效果，要对蛋清进行充分的震荡处理，以使纤维状 蛋白分散均匀。
[0022] 3.明胶是胶原变性产物，是一种热可逆性混合物，其没有固定的结构，分子量分布 在几万到几十万，具有较好的持水性、成膜性特征，这些特征有利于对不同切片材料进行物 理黏附和和固定。但使用浓度要准确把握，浓度不宜过高，否则会掩填切片材料，降低观察 效果；另外，当浓度过高时，涂抹到载玻片上后会形成较厚的凝固层，反而会造成更加严重 的脱片现象。明胶融化时，温度以不超过38°C为宜，因为较高的温度会使明胶分子均一化， 不利于对不同切片材料的黏附。
[0023] 4.糯米粉乳液、鸡蛋清和明胶三者混合过程中，要在室温条件下进行，因为较高温 度下，鸡蛋清比较容易形成絮状沉淀，降低粘片效果。
[0024] 5.糯米粉乳液、鸡蛋清和明胶混合使用，为生物切片材料提供了更加丰富的物理 黏附背景，可大大降低石蜡制片时脱片情况的发生，进而提高生物材料显微观察实验的成 功率。具体使用时也可根据实验材料的大小、细胞组成特征等情况适当调整成分用量，以达 到最佳的使用效果。
[0025]总之，本发明技术方案目的明确，效果可靠，制备过程通俗易懂，便于操作，可作为 动植物材料石蜡制片显微观察时的备选粘片剂，适合推广应用。
【附图说明】
[0026]图1为使用本发明粘片剂获得的石蜡制片观察效果示例，其中A.棉花根横切面;B. 棉花茎横切面;C.棉花叶横切面;D.昆虫复眼纵切面。
【具体实施方式】
[0027]下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
[0028] 实施例