一种柑橘类水果中708种农药残留gc-q-tof/ms侦测技术的制作方法
【技术领域】
[00011本发明涉及农残检测领域，特别涉及一种应用GC-Q-T0F/MS筛查柑橘类水果中708 种农残的侦测方法。
【背景技术】
[0002] 水果蔬菜与人们的生活息息相关，尤其是柑橘类水果(橙、橘、柠檬和柚）的营养价 值备受消费者的青睐。目前在柑橘类水果的种植，生长以及保藏过程中可能使用的农药及 化学品已超过1100种。然而，伴随了农药的广泛使用，其过量使用、滥用和误用等不规范行 为也随之产生，使得农药残留于农产品中，从而给人类健康造成潜在威胁，同时也对农产品 的进出口贸易产生了不利影响。
[0003] 早在1976年世界卫生组织(WH0)、粮农组织(FA0)和联合国环境规划署(UNEP)共同 建立了全球环境检测系统/食品项目（Global Environment Monitoring System，GEMS/ Food)，旨在掌握会员国食品污染状况，了解食品污染物摄入量，保护人体健康，促进贸易发 展。现在，世界各国都把食品安全提升到国家安全的战略地位。农药残留限量是食品安全标 准之一，也是国际贸易准入门槛。同时，对农药残留的要求呈现出品种越来越多，限量越来 越严格的发展趋势，也就是国际贸易设立的农药残留限量门槛越来越高。现在欧盟已制定 了839种农药的162248项MRL标准，美国制定了351种农药的39147项MRL标准，日本制定了 579种农药的51600多项MRL标准，我国2014年发布了381种农药的3650项MRL标准。目前，国 际上普遍采用的一律标准限量为l〇yg/kg。因此，食品安全和国际贸易都呼唤高通量快速农 药残留检测技术，这无疑也给广大农药残留分析工作者提供了机遇和挑战。在目前的众多 农药残留分析技术中，色谱质谱联用技术是实现高通量多残留快速检测的最佳分析手段。
[0004] 目前农药残留分析多以气相色谱、液相色谱、气相色谱-质谱和液相色谱-质谱联 用技术为主。这些检测技术都首先需要农药标准品对照进行定性。例如，对100种农药的检 测就需要准备相应的100种农药标准品对照，而这100种之外的农药都会被漏检。在农兽药 残留实验室的实际工作中，绝大多数实验室都不会储备数百种农药标准品，其原因是农药 标准品不仅价格昂贵，而且有效期只有2-3年，需要重复投资。一般实验室常备农药标准品 只有几十种，其日常监测的农药品种也就只限于这几十种，由此造成食品安全监测漏洞。
【发明内容】
[0005] 为了克服上述缺陷，本发明人团队经过多年潜心研究，研发了708种农药的精确质 量数据库以及一种果蔬中708种农药残留的GC-Q-T0F/MS侦测技术，实现了不需标准品对 照、即可对柑橘类水果中708种农药残留进行快速侦测检测，满足了当前农产品中农药残留 高通量快速检测的急需。
[0006] 一方面，本发明提供了一种GC-Q-T0F/MS检测柑橘类水果中708种农药残留的侦测 方法，其特征在于:建立708种农药T0F/MS数据库，同时对柑橘类水果中708种农药进行定性 侦测与确证;该方法包括以下步骤：
[0007] (1)将农药标准品分别配制成l_5mg/L的标准溶液，设定条件下经GC-QT0F/MS-级 模式全谱数据测定每种标准溶液的全谱数据，分别得到每种农药的化学分子式、保留时间、 碎片离子精确质量数、离子丰度比；
[0008] (2)将步骤(1)中获得的一级模式全谱数据，经核实后的碎片离子全扫描质谱图导 入PCDL软件中，并与对应的农药信息相关联，建成T0F/MS精确质量数据库，用于数据检索分 析；
[0009] (3)与步骤(1)相同的设定条件下柑橘类水果的测定待测样品中农药的全谱数据， 得到其含有的农药的化学分子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰度比；
[0010] (4)对样品测定结果经精确质量数据库检索，对符合鉴定依据的检出农药进行准 确鉴定，从而获得柑橘类水果中的农残种类。
[0011]优选的，通过对柑橘类水果进行前处理以获得柑橘类水果的测定待测样品，所述 前处理方法包括以下程序：
[0012]样品制备:柑橘类水果样品经0.5-5体积％醋酸乙腈勾浆提取，经脱水和离心、浓 缩后，再经Carbon/NH2柱净化，乙腈+甲苯洗脱残留农药，经再浓缩、过滤后制成待测样液a。
[0013] 本发明所具有的有益效果：
[0014] 1、本发明以高分辨碎片离子精确质量数、保留时间、离子丰度比等化合物信息为 识别标准，建立的708种农药侦测和确证技术方法，彻底改变了原有以化合物标准物为参比 的定性模式，是一种不需要标准物对照，快速、高通量、准确可靠的农药残留检测新技术。
[0015] 2、本发明在不需标准物对照的前提下，实现了 708种农药残留的定性侦测和确证， 可以大大节省购买标准物的成本，也更加环保、安全。
[0016] 3、本发明可在1小时内完成708种农药侦测、定性与确证，与传统检测方法相比较， 可以提高工作效率数百倍。
[0017] 4、本发明能够做到对柑橘类水果样品中708种农药残留一次性提取净化，一次进 样检测，与传统检测方法相比较，可以节省检测成本、提高工作效率数百倍。
[0018] 5、本发明可以测试的柑橘类水果样品中农药包括以下物质中的一类或几类:有机 磷类农药，氨基甲酸酯类农药，苯并咪唑类农药，磺酰脲类农药，烟碱类农药，除虫菊酯类农 药及其他类型的农药及代谢物。
[0019] 6、本发明建立的GC-QT0F/MS侦测技术指标:扫描范围50-600m/z;测定的精确质量 可达O.OOOlm/ζ;质量精度可控制在20ppm以内；扫描速度在50-600m/z范围为每秒5次。
[0020] 7、本发明提供的一种应用气相色谱四级杆飞行时间质谱(GC-Q-T0F/MS)快速筛查 柑橘类水果中708种农药残留的高分辨质谱侦测技术在7个农药残留分析实验室得到了推 广和应用，经过对30多个省市多个市售柑橘类水果样品的侦测验证，取得了重要的残留侦 测数据。
[0021] 8、同时侦测的708种农药中，侦测灵敏度一律低于标准10微克/千克，满足各国农 药残留MRL水平筛查的要求。
[0022] 本发明的其它特征和优点将在随后的【具体实施方式】部分予以详细说明。
【附图说明】
[0023]附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具 体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：
[0024]图1是北京地区市售橙样品GC-Q-T0F/MS技术检出频次最高农药(特草灵)结果示 例。
[0025]图2是北京地区市售橙样品GC-Q-T0F/MS技术检出的频次最高农药(特草灵）的质 谱信息与数据库进行比对的结果。
[0026] 图3是天津地区市售橘样品GC-Q-T0F/MS技术检出频次最高农药(哒螨灵)结果示 例。
[0027] 图4是天津地区市售橘样品GC-Q-T0F/MS技术检出的频次最高农药(哒螨灵）的质 谱信息与数据库进行比对的结果。
[0028] 图5是河北地区市售柠檬样品GC-Q-T0F/MS技术检出频次最高农药(水胺硫磷)结 果示例
[0029] 图6是河北地区市售柠檬样品GC-Q-T0F/MS技术检出的频次最高农药(水胺硫磷） 的质谱信息与数据库进行比对的结果。
【具体实施方式】
[0030] 以下对本发明的【具体实施方式】进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体 实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
[0031] 本发明提供了一种GC-Q-T0F/MS检测柑橘类水果中708种农药残留的侦测方法，其 特征在于：建立708种农药T0F/MS数据库，同时对柑橘类水果中708种农药进行定性侦测与 确证;该方法包括以下步骤：
[0032] (1)将农药标准品分别配制成l_5mg/L的标准溶液，设定条件下经GC-QT0F/MS-级 模式全谱数据测定每种标准溶液的全谱数据，分别得到每种农药的化学分子式、保留时间、 碎片离子精确质量数、离子丰度比；
[0033] (2)将步骤(1)中获得的一级模式全谱数据，经核实后的碎片离子全扫描质谱图导 入PCDL软件中，并与对应的农药信息相关联，建成T0F/MS精确质量数据库，用于数据检索分 析；
[0034] (3)与步骤(1)相同的设定条件下柑橘类水果的测定待测样品中农药的全谱数据， 得到其含有的农药的化学分子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰度比；
[0035] (4)对样品测定结果经精确质量数据库检索，对符合鉴定依据的检出农药进行准 确鉴定，从而获得柑橘类水果中的农残种类。
[0036] 具体的，以稻丰散(Phenthoate)为例说明本发明的GC-QT0F/MS数据库通过如下的 方法进行建立：
[0037] 1)在数据采集界面，对稻丰散(Phenthoate)标准物（l_5mg/L)在指定色谱质谱条 件下经GC-QT0F/MS-级模式进行碎片离子全扫描质谱图采集。
[0038]色谱条件为：色谱柱：VF-1701MS(30mX0.25mmX0.25um)(J&W Scientific， Folsom，CA);色谱柱升温程序:30-50°C保持0 · 5-5min，然后以再以3-10°C/min升温至200-280°C，然后以 20-50°C/min 升温至 110-150°C，再以 3-10°C/min 升温至 200-280°C，随后以 5-15°C/min 升温至 250-320°C，保持 3-10min，再以 5-20°C/min 降温至 200-290°C，保持 l_5min; 载气：氦气；纯度2 99.999% ; 0.5-2mL/min;进样口温度：230-320°C;进样量lyL;进样方式： 无分流进样，