[0028] 本发明提供二种544种农药的精确质量数据库W及一种用于检测芽菜类蔬菜中 544种农药残留侦测技术。
[0029] 1、本发明提供的二种精确质量数据库为T0F/MS数据库和Q-T0F/MS数据库。
[0030] 1.1 T0F/MS数据库技术内容包括:544种农药的化学式，精确质量数，保留时间W 及农药英文名称等信息。T0F/MS数据库中巧中化合物技术内容示例如下：
[0031]
[0032] 1.2 Q-T0F/MS数据库技术内容包括:544种农药在4个碰撞能量下的碎片离子信息 质谱图。Q-T0F/MS数据库技术内容示例如图1所示。
[0033] 2、本发明提供了一种芽菜类蔬菜中544种农药LC-Q-T0F/MS侦测和确证技术方法。 侦测和确证技术方法内容包括如下：
[0034] 2.1样品制备
[0035] 2.1.1芽菜类蔬菜样品取可食部分切碎，混匀，密封，标明标记。
[0036] 2.1.2称取10旨芽菜类蔬菜样品（精确至0.01旨），于801^离屯、管中，加入40血1%醋 酸乙腊，用高速匀浆机1350化/min,匀浆提取Imin，加入Ig氯化钢，4g无水硫酸儀，振荡 5111；[]1，在420〇1'/111；[]1下离屯、5111；[]1，取上清液2〇1]1]^，在40°(3水浴中旋转蒸发浓缩至约11]11^，待净 化。
[0037] 2.1.3在Ca;rbon/NH2柱中加入约2cm高无水硫酸钢。先用4mL乙腊+甲苯（3+1，v/v) 淋洗SPE柱，并弃去流出液，当液面到达硫酸钢的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱 上，下接新鸡屯、瓶接收。再每次用2mL乙腊+甲苯(3+1，v/v)洗涂样液瓶Ξ次，并将洗涂液移 入S阳柱中。在柱上连接50mL胆液器，再用25mL乙腊+甲苯(3+l，v/v)洗脱农药，合并于鸡屯、 瓶中，并在40°C水浴中旋转浓缩至约0.5mL。
[0038] 2.1.4将浓缩液置于氮气下吹干，加入2mL的乙腊+0.1 %甲酸水(2+8，v/v)混匀，经 0.2μπι滤膜过滤后定容，得到待测样品溶液a。
[0039] 2.2 LC-Q-T0F/MS检测
[0040] 2.2.1液相色谱分离:待测样品溶液a通过配有反相色谱柱(Z0RBAX SB-C18，2.1mm X 100mm，3.5μπι)的液相色谱系统分离;流动相A为5mM的乙酸锭-0.1 %甲酸-水;流动相B为 乙腊;液相色谱梯度洗脱程序为：Omin: 1 % B，3min: 30 % B，6min: 40 % B，9min: 40 % B，15min: 60%8，19111111:90%8,23111111:90%8,23.01111111:1%8，后运行4111111;流速为0.411117111111;柱溫： 40°。进样量：1化1。
[0041 ] 2.2.2质谱检测:4旨116111 653化(：-9-1'0。/]\15在电喷雾电离正离子模式化51+);毛 细管电压:4000V;干燥气溫度:325°C;干燥气流量lOL/min，銷流气流速1 IL/min，銷流气溫 度为325°C;雾化气压力40psi，锥孔电压60V，碎裂电压140V。全扫描质核比范围为50-1600m/z，并采用内标参比溶液对仪器质量精度进行实时校正。通过Agilent Mass化nter Workstation Software(version B.05.00)对质谱数据采集与处理。
[0042] 2.3 T0F/MS数据库定性侦测
[0043] 在Agilent Mass化nter定性软件中调用已建立的T0F/MS数据库，设置检索参数保 留时间偏差为± 0.5min，精确质量偏差为± lOppm，离子化形式选择+H，+NH4，+Na模式;依据 T0F/MS数据库对上述采集的样品溶液质谱数据进行定性检索，通过软件计算出每种化合物 检索匹配得分值，检索匹配得分值>70的化合物，为疑似检出化合物。
[0044] 2.4 Q-T0F/MS数据库定性确证
[0045] 在化rgeted MS/MS采集模式下，输入疑似检出化合物的母离子，保留时间和最佳 的碰撞能量，对待测样品溶液a再次检测，将检测质谱图与Q-T0F/MS数据库中化合物碎片离 子的全扫描质谱图，在镜像对比条件下匹配确证。其匹配得分值>70,即确认检出该目标化 合物。
[0046] 本发明相比现有技术所具有的有益效果为：
[0047] 1、本发明W高分辨精确质量数、同位素分布及同位素丰度等化合物信息为识别标 准，建立的500多种农药侦测和确证技术方法，彻底改变了原有W化合物标准物为参比的定 性模式，是一种不需要标准物对照，快速、高通量、准确可靠的农药残留检测新技术；
[0048] 2、本发明在不需标准物对照的前提下，实现了500多种农药残留的定性侦测和确 证，可W大大节省购买标准物的成本，也更加环保、安全；
[0049] 3、本发明可在1小时内完成500多种农药侦测、定性与确证，与传统检测方法相比 较，可W提高工作效率数百倍；
[0050] 4、本发明能够做到对芽菜类蔬菜样品中500多种农药残留一次性提取净化，一次 进样检测，与传统检测方法相比较，可W节省检测成本、提高工作效率数百倍；
[0051] 5、本发明同时侦测的544种农药中，有327种农药侦测灵敏度低于10微克/千克，占 比64.1 %，基本满足各国农药残留ML水平筛查的要求；
[0052] 6、本发明在不需农药标准物对照的前提下，依据精确质量数据库对目标化合物的 定性和确证，使80% W上农药确证点达到10个W上，全部农药满足欧盟对化合物4个确证点 的要求，定性结果更加准确可靠；
[0053] 7、本发明可W测试的芽菜类蔬菜样品中农药包括W下物质中的一类或几类:有机 憐类农药，氨基甲酸醋类农药，苯并咪挫类农药，横酷脈类农药，烟碱类农药，除虫菊醋类农 药及其他类型的农药及代谢物；
[0054] 8、本发明建立的侦测技术指标：扫描范围50-1600m/z ;测定的精确质量可达 0.0 OOlm/z ;质量精度可控制在分子质量的lOppmW内；扫描速度在50-600m/z范围为每秒4 次；
[0055] 9、本发明提供的二种544种农药的精确质量数据库W及一种用于检测芽菜类蔬菜 中544种农药残留侦测技术已经在7个农药残留分析实验室得到推广和应用，经过对30省市 500多个市售芽菜类蔬菜样品的侦测验证，取得了重要的残留侦测数据。
【附图说明】
[0056] 图1绿豆芽样品全扫描模式T0F得分图；
[0057] 图2绿豆芽样品中疑似农药二级采集方法示例图；
[0化引图3绿豆芽样品中检出农药二级Q-T0F/MS确证得分图。
[0059] 图4草头样品全扫描模式T0F得分图；
[0060] 图5草头样品中疑似农药二级采集方法示例图；
[0061] 图6草头样品中检出农药二级Q-T0F/MS确证得分图。
【具体实施方式】
[0062] 实施例1
[0063] 芽菜类蔬菜m绿豆芽为例）中544种农药(见表1)LC-Q-T0F/MS侦测和确证技术实 施实例，包括如下步骤：
[0064] 1、样品前处理技术的具体步骤：
[00化]1.1绿豆芽样品取可食部分切碎，混匀，密封，标明标记；
[0066] 1.2称取lOg绿豆芽样品（精确至0.0 lg)，于80mL离屯、管中，加入40血1 %醋酸乙腊， 用高速匀浆机1350化/min,匀浆提取Imin，加入Ig氯化钢，4g无水硫酸儀，振荡5min，在 420化/min下离屯、5min，取上清液20mL，在40°C水浴中旋转蒸发浓缩至约ImL，待净化。
[0067] 1.3在Carbon/NHs柱中加入约2cm高无水硫酸钢。先用4mL乙腊+甲苯（3+1，v/v)淋 洗SPE柱，并弃去流出液，当液面到达硫酸钢的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至SPE柱中， 下接新鸡屯、瓶接收。再每次用2mL乙腊+甲苯(3+1，v/v)洗涂样液瓶Ξ次，并将洗涂液移入 SPE柱中。在柱上连接50mL胆液器，用25mL乙腊+甲苯(3+l，v/v)洗脱农药及相关化学品，合 并于鸡屯、瓶中，并在40°C水浴中旋转浓缩至约0.5mL。
[0068] 1.4将浓缩液置于氮气下吹干，加入2mL的乙腊+水(2+8，v/v)混匀，经0.2皿滤膜过 滤后定容，得到待测样品溶液。
[0069] 2、LC-Q-T0F/MS 操作条件
[0070] 色谱条件:液相色谱流动相A为5mM的乙酸锭-0.1 %甲酸-水;流动相B为乙腊;梯度 洗脱程序为：0min:l%B，3min:30%B，6min:40%B，9min:40%B，15min:60%B，19min:90% B，23min:90%B，23. Olmin: 1 %B，后运行4min;流速为0.