一种土壤中苯并芘的快速检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种土壤中苯并芘的快速检测方法，属于环境监测方法技术领域。
【背景技术】
[0002]苯并芘又称苯并(α)芘，是一种常见的高活性间接致癌物。它经过呼吸或饮食进入体内后，很容易和人的DNA结合，扰乱了人体蛋白质的合成程序。它在DNA的活动中，扮演着一个“扳机”的角色:只要极为微量-纳克级别的苯并芘，就可改变DNA的结构、方向和功能；结合了苯并芘的DNA，合成的细胞不再是正常细胞，而是肿瘤，也就导致了癌症。它在水体，土壤和作物中都容易残留。许多国家都进行过土壤中苯并芘含量调查，残留浓度取决于污染原的性质与距离，在公路两旁的土壤中，在炼油厂附近土壤中以及被煤焦油，沥青污染的土壤中苯并芘的含量都不低。
[0003]苯并芘危害人类健康，随着环境问题的日趋恶化，苯并芘的检测越来越受到人们的重视。常用的检测苯并芘的方法有薄层层析法，荧光分光光度法，气相色谱法，气相色谱-质谱法，高效液相色谱紫外法，高效液相色谱荧光法。其中荧光法有灵敏度高，重现性好等优点，是较常用的方法。根据检测对象不同，分离、提取、富集方式也各不相同，目前，我国已经有了空气，水和食品中的国家标准测定方法，但是还没有土壤中苯并芘的检测方法，建立一种准确、快速、简便的检测土壤中苯并芘的方法，对生态环境、人体健康有着重要的意义。
[0004]另外，目前的苯并芘检测方法中，样品的前处理方法复杂，步骤繁琐，很容易在前处理样品过程中由于操作不慎吸入或皮肤接触到苯并芘，这给实验人员的安全带来了极大的威胁。还有，目前的苯并芘检测方法一般检测时间长，浪费时间和流动相，检测成本高。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是，提供一种操作简便容易，样品中苯并芘提取完全，检测结果真实可靠，检测时间短，节约时间和流动相的土壤中苯并芘的快速检测方法。
[0006]为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为:
一种土壤中苯并芘的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤:
SOl，供试品溶液的制备:准确称取风干后的土壤样品适量于具塞锥形瓶中，加入相当于土壤样品15?20倍量的有机溶剂A，加塞后振摇，再超声提取至少lOmin，离心后收集上清液，残留土壤样品中再加入相当于土壤样品15?20倍量的有机溶剂A，超声提取至少lOmin，离心，合并上清液，取有机溶剂A加入固相萃取柱进行活化，活化完成后将合并的上清液转移到活化后的固相萃取柱中，用有机溶剂A洗脱，收集洗脱液至量瓶，定容，过0.45um微孔滤膜至进样瓶，备用；
S02，标准品溶液的制备:配制浓度为0.05,0.1,0.2,0.3,0.4ng/L的苯并芘标准系列溶液，定容溶液为有机溶剂A，摇匀后过0.45um微孔滤膜至进样瓶，备用；
S03，检测:依次将苯并芘标准系列溶液和供试品溶液注入HPLC，HPLC检测条件为:0DS柱;柱温:30°C;流动相:梯度洗脱:0—3min，乙臆O?20%; 3—lOmin，乙臆20?25%; 10^13min，乙腈25?60%;13—20min，乙腈60?100%;荧光检测器:激发波长290nm，发射波长430nm。
[0007]所述有机溶剂A包括氯仿、丙酮、苯、甲苯、二甲苯、乙醚、正己烷、石油醚和环己烷中的任一种。
[0008]超声提取时需用封口膜将具塞锥形瓶的瓶口封住。
[0009]所述土壤样品的目数为120?200目。
[0010]所述土壤样品还包括前处理步骤，采用网格布置法取样，至少取16个点，在每个点的剖面上对表层土、底层土分别取样。
[0011 ] 所述离心为10000r/min，时间为至少3min。
[0012]所述固相萃取柱的活性完成标准为:取有机溶剂A加入固相萃取柱进行活化，至有机溶剂A自然下滴不少于12?15ml，活化完成。
[0013]本发明提供的一种土壤中苯并芘的快速检测方法，超声提取两次后用固相萃取柱富集纯化土壤样品中的苯并芘的方法，该法操作简便，步骤简单，减少了人为误操作导致吸入或皮肤接触到苯并芘的几率，大大提高了实验人员工作的安全性，并且该法苯并芘提取完全，并得到了一定的纯化效果，使进入高效液相色谱检测时无杂质峰干扰，检测结果准确，真实可靠。本发明使用梯度洗脱的方式洗脱苯并芘，该法洗脱时间短，并能保证苯并芘洗脱完全，节约时间和流动相，使检测成本低。
【具体实施方式】
[0014]下面对本发明作更进一步的说明。
[0015]实施例1:
仪器:安捷伦高效液相色谱仪，1200型;色谱柱为ODS柱(5μπι，4.6mm*150mm);流动相:乙腈-水;进样量:1OyL;检测器为荧光检测器，激发波长290nm，发射波长430nm。
[0016]试剂:实验所用试剂均为分析纯或优级纯，所用水为Mi 11 ipore超纯水。
[0017]苯并花标准品:购自中药标准对照品研究中心。
[0018]土壤标准物质:GSBZ50012-88(ESS-2)购自中国环境监测总站和GBW07453(GSS-24)，购自国家标准物质研究中心(北京)。
[0019]1#样品和2#样品:分别采自炼油厂附近土壤及被煤焦油，沥青污染的土壤。
[0020]一种土壤中苯并芘的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤:
SOI，供试品溶液的制备:准确称取风干后的土壤样品2g于50ml具塞锥形瓶中，加入30ml氯仿，加塞后振摇，再超声提取1min，离心后收集上清液，残留土壤样品中再加入30ml氯仿，超声提取lOmin，离心，合并上清液，取氯仿加入固相萃取柱进行活化，活化完成后将合并的上清液转移到活化后的固相萃取柱中，用氯仿洗脱，收集洗脱液至50ml量瓶，氯仿定容至刻度，摇匀，过0.45um微孔滤膜至进样瓶，备用；
S02，标准品溶液的制备:配制浓度为0.05,0.1,0.2,0.3,0.4ng/L的苯并芘标准系列溶液，定容溶液为氯仿，摇勾后过0.45um微孔滤膜至进样瓶，备用；
S03，检测:依次将苯并芘标准系列溶液和供试品溶液注入HPLC，HPLC检测条件为:0DS柱;柱温:30°C ；流动相:梯度洗脱:0—3min，乙臆O?20%; 3—lOmin，乙臆20?25%; 10^13min，乙腈25?60%;13—20min，乙腈60?100%;荧光检测器:激发波长290nm，发射波长430nm。
[0021 ]超声提取时需用封口膜将具塞锥形瓶的瓶口封住。
[0022]所述土壤样品的目数为120目。
[0023]所述土壤样品还包括前处理步骤，采用网格布置法取样，至少取16个点，在每个点的剖面上对表层土、底层土分别取样。
[0024]所述离心为10000r/min，时间为3min。
[0025]所述固相萃取柱的活性完成标准为:取有机溶剂A加入固相萃取柱进行活