一种海产鱼贝类中三丁基锡的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及海洋水产品的安全检测技术领域，具体涉及一种基于磁性分子印迹技 术HPLC-ICP-MS检测的海产鱼贝类中三丁基锡的检测方法。
【背景技术】
[0002] 有机锡化合物具有良好的反应活性和生物活性，所以被广泛应用于工农业各个领 域。（1)作为舰艇的防污添加剂:三丁基锡、三苯基锡对真菌、藻类等有特殊的毒性作用，因 此主要用于船只的防污涂料中，以防止贻贝等生物附着在船上，进而减少燃料浪费、船速降 低等。（2)作为杀虫剂杀菌剂:三苯基醋酸锡主要用于甜菜褐斑病、水稻稻瘟病等的防治;三 苯基氯化锡可以用来合成杀菌农药毒菌锡和杀菌农药薯瘟锡，还可用作昆虫不育剂，抑制 家蝇的繁育；三环己基锡和苯基锡被用于生产农药和杀虫剂。（3)作为塑料稳定剂：二丁基 锡是聚氨基甲酸酯塑料的催化剂及PVC的稳定剂，甲基锡和乙基锡用于聚氯乙烯(PVC)稳定 剂，月桂酸型有机锡热稳定剂主要用于PVC软质透明制品，如软膜、软片、塑料鞋、软管及PVC 输送带等，特别是可以用作聚胺酯发泡制品的催化剂等。
[0003] 由于有机锡化合物的广泛使用，大量有毒的有机锡化合物已通过各种途径进入环 境生态系统中，从而对生态系统造成破坏，引发了一系列的环境污染问题，因而受到各国科 学家们的关注。尤其是由含三丁基锡(TBT)的船舶防螺涂料所造成的全球范围内的水域污 染，不仅能持久存在，还能通过生物富集对海洋生物甚至人类健康造成极大危害，被认为是 迄今为止人为引入海洋环境毒性最大的物质之一。三丁基锡引起肝脏的损害，对粘膜和皮 肤有强刺激作用，与人体正常分泌的激素竞争细胞中的激素受体，干扰内分泌系统而产生 一系列的不良作用，包括致癌、损伤生理功能、导致神经系统和免疫系统异常等。而由于污 染使得三丁基锡进入到海洋的鱼类和贝类中去，引起蓄积。因此，建立高灵敏度和高选择性 的检测方法，快速高效的检出海产鱼类和贝类中微量三丁基锡迫在眉睫。
[0004] 目前实验室常用有的检测方法主要有:气相色谱法(GC)、液相色谱法(HPLC)、毛细 管电泳(CE)及其联用技术。在有机锡的检测中，以气相色谱法的应用最为广泛。常用的有气 相色谱-质谱检测(GC-MS)、气相色谱火焰光度检测(GC-FPD)、气相色谱原子吸收光谱检测 (GC-AAS)、气相色谱-微波等离子体发射光谱(GC-MIP-AES)等。但是这些方法要么耗时长， 要么灵敏度很低或者阈值高，不适于痕量有机锡测定。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是针对以上现有技术，提供一种海产鱼贝类中三丁基 锡的检测方法，主要采用磁性分子印迹技术联合HPLC-ICP-MS检测海产的鱼类和贝类产品 中的三丁基锡，该检测方法具有更好的抗干扰，灵敏度高和快速的特征；同时，该方法可以 提高检测过程中三丁基锡的富集为检测提供必要的条件，同时采用印迹分子有利于特异性 的检测。
[0006] 本发明所采用的技术方案为：
[0007] 一种海产鱼贝类中三丁基锡的检测方法，包括以下步骤：
[0008] (1)待检测样品的制备：取待检测样品置于离心管中，添加50-100yg/L的标准TBT 溶液，每〇. lg待检测样品添加 100yL标准TBT溶液，振动1-1.5h，静置，然后使用乙酸-甲醇溶 液作为萃取液进行超声萃取，离心取沉淀重复萃取1-3次，然后合并萃取上清液并使用超纯 水定容至一定体积，得待吸附液；
[0009] (2)Fe3〇4纳米粒子制备：称取FeCl3 · 6H20和Fe(NH4)2(S〇4)2 · 6H20于容器中，加入 0.1mol/L盐酸溶液，FeCl3 · 6H20:Fe(NH4)2(S〇4)2 · 6H20:盐酸溶液= 4.7g:3.9g:200ml，通 氮驱氧，在机械搅拌下使溶解完全，然后调节溶液pH>9，使体系从黄色变成黑色，升温至80-85°C，陈化1-1.5h，等降至室温，产物用磁铁分离收集，并用蒸馏水洗涤至中性，真空干燥；
[0010] ⑶Fe3〇4纳米粒子的APTS修饰:取Fe304纳米颗粒溶解在乙醇-7JC溶液中，逐滴加入 8-氨基芘-1，3，6-三磺酸三钠盐(APTS)并搅拌，Fe304纳米颗粒：乙醇-水溶液:8-氨基芘-1， 3，6-三磺酸三钠盐=100mg: 150mL: 50yL，混合物在室温下反应7-7.5h，产物通过外部磁场 分离，乙醇清洗，真空干燥得Fe3〇4纳米颗粒表面修饰上APTS的Fe 3〇4@APTS颗粒；
[0011] (4)Fe3〇4@APTS颗粒的MAA修饰：取Fe3〇4@APTS颗粒与过量的甲基丙烯酸(MAA)反 应，然后磁铁分离，乙醇洗涤，真空干燥，得Fe3〇4纳米颗粒表面修饰上MAA的Fe3〇4@MAA颗粒； [0012] (5)包覆着MIP层的磁性颗粒的制备:将Fe 3〇4@MAA颗粒和TBT溶解在乙腈中，Fe3〇4@ MAA颗粒:TBT = : 100mg: lmmol，室温搅拌6-6 · 5h，然后加入二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA) 和偶氮二乙丁腈(AIBN)，通氮下冰浴超声5-10min，于50°C搅拌反应5-5.5h，65°C下聚合20-20.5h，80-85°C下熟化5-5.5h，最后分离，用甲醇-二氯甲烷溶液清洗，然后用氢氧化钠-甲 醇溶液作为洗脱剂数次提取直至聚合物中不含模板分子TBT，产物分离，真空干燥得MIP层 包覆的磁性分子印迹聚合物Fe3〇4麵IPs，待用富集分离分析；
[0013] (6)待检测样品的吸附：在步骤（1)的得到的待吸附液中加入步骤(5)得到的磁性 分子印迹聚合物Fe3〇4iMIPs，待吸附液:Fe3〇4@MIPs = 50mL: 20mg，磁力搅拌吸附，离心，取甲 酸-甲醇溶液洗脱吸附在聚合物中的TBT，将洗脱液用氮吹仪吹干，并使用甲醇-水溶液定 容，每50mL待吸附液定容至lmL，过滤膜，待检测；
[0014] (7)HPLC-ICP-MS检测:采用C18硅胶色谱柱进行色谱分析。
[0015] 所述步骤（1)乙酸-甲醇溶液中乙酸与甲醇的体积比为1:1，乙酸-甲醇溶液的加入 量为每〇. lg待检测样品5mL。
[0016] 所述步骤(1)中超声萃取的频率为30-40KHZ，超声时间为30秒。
[0017]所述步骤⑴中待检测样品的定容体积为每〇. lg待检测样品50mL。
[0018]所述步骤(3)乙醇-水溶液中乙醇与水的体积比为14:1。
[0019] 所述步骤⑷中Fe304@APTS颗粒与甲基丙烯酸的反应在甲醇溶剂中进行，反应温度 为20-25°C，反应时间为24h。
[0020] 所述步骤(5)中乙腈的使用量为40mL，二甲基丙烯酸乙二醇酯的添加量为22mmol， 偶氮二乙丁腈的添加量为15mg。
[0021] 所述步骤(5)甲醇-二氯甲烷溶液中甲醇与二氯甲烷的体积比为4:1，氢氧化钠-甲 醇溶液中氢氧化钠的浓度为〇. 3mo 1 /L。
[0022] 所述步骤（6)甲酸-甲醇溶液中甲酸的浓度为0.1M，甲酸-甲醇溶液的添加量为 6mL，甲醇-水溶液中甲醇与水的体积比为7:3。
[0023] 所述步骤(7)中色谱分析的检测条件为:流动相为甲醇：水=7: 3(v/v)，其中水相 中含3%的乙酸、0.05%三乙胺，进样量20yL，流速1.2mL/min，0.1M的甲酸-甲醇溶液作为洗 脱剂洗脱2h以上。
[0024] 由于三丁基锡在海水中易发生光降解、化学降解、生物降解，且含量较低（ppt~ ppb)，因此，形态分离和预富集技术是必不可少的，也是进一步降低检出限的主要途径。本 方法采用分子印迹固相萃取，将分子印记聚合物作为固相萃取剂，利用其对分析物的亲和 性和特异识别性可克服生物或环境样品体系复杂、预处理手续繁杂等不利因素，降低检测 限，提高分析的精密度和准确性，为痕量组分的富集和分析提供极大的方便。同时采用进一 步的磁