分离测定盐酸达泊西汀及其潜在遗传毒性杂质的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析化学领域，具体涉及一种分离测定盐酸达泊西汀及其潜在遗传毒 性杂质的方法。
【背景技术】
[0002] 盐酸达泊西汀(Dapoxetine Hydrochloride)，化学名称S-( + )_N,N-二甲基-1-苯 基-3-( 1-萘氧基）丙胺盐酸盐，英文名称（5-( + )-1'1，1'1-(1;[11161:1171-3-(113。111:1^16116-1-yloxy)-1-phenylpropan-l_amine Hydrochloride)，是达泊西汀的盐酸盐，达泊西汀原研 厂家为美国伊莱利利公司，其原始专利EP 0288188描述了达泊西汀的制备方法。盐酸达泊 西汀是一种选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)，属短效型SSRI，与传统长效型SSRI相比， 具有药效快，半衰期短，副作用低等特点，可用于治疗抑郁和相关的情感障碍。盐酸达泊西 汀能够选择性抑制突触前神经元对血清素再吸收功能，增加和突触后神经元受体结合的血 清素水平，从而达到治疗早泄的作用。目前，盐酸达泊西汀用于治疗符合下列所有条件的18 至64岁男性早泄(PE)患者：（1)阴茎在插入阴道之前、过程当中或者插入后不久，以及未获 性满足之前仅仅由于极小的性刺激即发生持续的或反复的射精；（2)因早泄(PE)而导致的 显著性个人苦恼或人际交往障碍；（3)射精控制能力不佳。2009年2月作为治疗男性早泄的 药物（PriligTM)在欧洲批准上市，这是世界上第一种用于此适应症的口服治疗药物，被 Thomson Reuters 2009年第一季度全球药物研发重大进展季度报告列为五个已经上市或 正在审批的最具前景药物之一。
[0003] 盐酸达泊西汀的制备方法已在W02008035358、US5292962、CN101012147、 〇附821212、0附01875666、1^5068432、1^6025517等专利中公开，主要有两种方法 :一种是以 手性试剂还原形成达泊西汀手性中心的方法，文献US5068432和US6025517都有提到先对起 始原料三氯苯丙酮进行手性还原后与萘酚发生亲核反应，然后成胺再成盐得到所要的产 品；另一种是拆分方法形成达泊西汀手性中心的方法，如专利US5292962和W02008035358中 公开的方法。其结构式如下：
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[0005] 潜在遗传毒性杂质(PGI)定义为"具有遗传毒性警示结构的杂质，但并未经实验测 试模型验证。这里的潜在性指的是遗传毒性的潜在性而非杂质潜在性。在盐酸达泊西汀合 成中，其合成使用的原料3-氯苯丙酮SMle(3-氯-1-苯丙烯），以及合成过程中产生的中间体 UI_1 (3_氣苯丙醇）、副广物SMle(3_氣-1-苯丙稀）、Zlb( 1_(3_氣_3_苯基丙氧基)蔡），这些 都是最终获得的盐酸达泊西汀中含有的潜在遗传毒性杂质杂质，它们的结构式如下：
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[0007] 为了控制成品的质量，需要对盐酸达泊西汀及其潜在遗传毒性杂质进行分离测 定，检查潜在遗传毒性杂质是否超过限度。但是，目前还没有公开的方法报道分离测定盐酸 达泊西汀及其潜在遗传毒性杂质的方法。因此开发一种分离测定盐酸达泊西汀及其潜在遗 传毒性杂质的方法对于实现对盐酸达泊西汀的质量控制、安全性保证具有极其重要的意 义。
【发明内容】
[0008] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种分离测定盐酸达泊西汀及其潜在遗传毒性 杂质的方法，用高效液相色谱法分离盐酸达泊西汀及其潜在遗传毒性杂质，能够有效实现 盐酸达泊西汀及其潜在遗传毒性杂质的分离，同时对潜在遗传毒性杂质进行限量控制，该 方法操作方法简单，快速，专属性强，准确度高。
[0009] 为实现上述目的，本发明的技术方案为：
[0010] 分离测定盐酸达泊西汀及其潜在遗传毒性杂质的方法，所述方法以十八烷基硅烷 键合硅胶为固定相进行固液分离，所述流动相为流动相I或流动相II，所述流动相I为乙腈 的水溶液，所述流动相II为乙腈、碳酸氢铵和二乙胺的水溶液。
[0011] 所述盐酸达泊西汀的结构式如下：
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[0013]进一步，所述潜在遗传毒性杂质包括UI-1(3-氯苯丙醇）、SMle(3_氯-1-苯丙烯）、 Zlb(l-(3-氯-3-苯基丙氧基)萘)的一种或多种。
[0014]潜在遗传毒性杂质(PGI)定义为"具有遗传毒性警示结构的杂质，但并未经实验测 试模型验证。这里的潜在性指的是遗传毒性的潜在性而非杂质潜在性。在盐酸达泊西汀合 成中，其合成使用的原料3-氯苯丙酮SMle(3-氯-1-苯丙烯），以及合成过程中产生的中间体 UI_1 (3_氣苯丙醇）、副广物SMle(3_氣-1-苯丙稀）、Zlb( 1_(3_氣_3_苯基丙氧基)蔡），这些 都是最终获得的盐酸达泊西汀中含有的潜在遗传毒性杂质，所述潜在遗传毒性杂质的结构 式如下：
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[0016」进一步，用所还流动相I对所还3-鼠苯内酮、UI-1和SMle进仃梯度洗脫；用所还流 动相II对所述Zlb进行梯度洗脱。
[0017] 本发明的目的之二在于提供一种利用高效液相色谱法分离测定盐酸达泊西汀及 其潜在遗传毒性杂质的方法，所述方法采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料， 流动相为流动相I或流动相II，进入检测器进行检测;所述流动相I为乙腈的水溶液;所述流 动相II为乙腈、碳酸氢铵和二乙胺的水溶液。
[0018] 进一步，所述梯度洗脱的条件为：
[0019] 流动相I的梯度洗脱的程序如下表：
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[0021] 流动相T T的梯麼洗脱的耜序加下耒，
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[0023] 其中，流动相A为10mm〇l/L碳酸氢铵和6mmol/L的二乙胺水溶液;流动相B为乙腈。
[0024] 作为一种优选，所述梯度洗脱条件为：
[0025] 流动相I的梯度洗脱的程序如下表：
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[0029] 进一步，所述潜在遗传毒性杂质为3-氯苯丙酮、UI_l、SMle和Zlb，包括以下步骤： [0030] (1)分别取待测样品盐酸达泊西汀及其潜在遗传毒性杂质3-氯苯丙酮、UI_l、SMle 和Zlb的对照品，用稀释剂溶解制成待测样品及所述各潜在遗传毒性杂质的定位溶液，分别 取待测样品盐酸达泊西汀及其各潜在遗传毒性杂质定位溶液进样，进行高效液相色谱分 析，确定待测样品盐酸达泊西汀及其各潜在遗传毒性杂质的保留时间；
[0031] 2)取供试品加稀释剂制成供试品溶液，再取供试品溶液加稀释剂按一定倍数稀释 得自身对照溶液，分别取供试品溶液及自身对照溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色 谱图，按限度法比较杂质UI-1、3-氯苯丙酮、SMle和Zlb的含量。
[0032] 判定结果:若供试品溶液记录色谱图中有与对照品溶液记录色谱图中保留时间一 致的色谱峰，其峰面积不得大于对照品溶液中相应杂质的峰面积，则判为符合规定。
[0033]进一步，所述稀释剂为乙腈或乙腈水溶液。
[0034]进一步，所述色谱柱的规格为4.6 X 250mm，5μπι或3.0 X 150mm，3.5μπι。
[0035] 进一步，所述流动相的流速为0.6-1 .Oml/min。
[0036] 进一步，所述检测器的检测波长为210-225nm。
[0037] 本发明中的固定相及流动相在分离或测定盐酸达泊西汀及其潜在杂质的色谱法 中的应用，所述固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，所述流动相为流动相I或流动相II，所述 流动相I为乙腈的水溶液，所述流动相II为乙腈、碳酸氢铵和二乙胺的水溶液，所述色谱法 具体包括高效液相色谱、液质联用色谱、薄层色谱等。
[0038] 本发明的有益效果在于:本发明提供了一种分离测定盐酸达泊西汀及其潜在遗传 毒性杂质的方法，采用十八烷基硅烷键合相为填充剂的色谱柱，以乙腈水溶液或者乙腈、碳 酸氢铵和二乙胺的水溶液为流动相对盐酸达泊西汀及潜在遗传毒性杂质进行检测；用高效 液相色谱法分离盐酸达泊西汀及其潜在遗传毒性杂质，能够有效实现盐酸达泊西汀及其潜 在遗传毒性杂质的分离，同时对潜在遗传毒性杂质进行限量控制，该方法操作方法简单，快 速，专属性强，准确度高，对于实现对盐酸达泊西汀的质量控制、安全性保证具有极其重要 的意义。
【附图说明】
[0039] 图1为实施例1盐酸达泊西汀对照品HPLC图，图1中的色谱峰为盐酸达泊西汀对照 品的色谱峰，保留时间在30.6min左右。
[0040] 图2为实施例1杂质UI-1对照品HPLC图，图2中的色谱峰为杂质UI-1的色谱峰，保留 时间在10.3min左右。
[0041] 图3为实施例1杂质3-氯苯丙酮对照品HPLC图，图3中的色谱峰为杂质3-氯苯丙酮 的色谱峰，保留时间在13.8min左右。
[0042]图4为实施例1杂质SMle对照品HPLC图，图4中的色谱峰为杂质SMle的色谱峰，保留 时间在20.2min左右。
[0043]图5为实施例1杂质Zlb对照品HPLC图，图5中的色谱峰为杂质Zlb的色谱峰，保留时 间在31.4min左右。
[0044]图6为实施例1杂质A对照品HPLC图，图6中的色谱峰为杂质A的色谱峰，保留时间在 31.3min 左右。
[0045]图7为实施例1混合HPLC图，图7中的色谱峰UI-1、3-氯苯丙酮、SMle的色谱峰，保留 时间依次为：10 · 2min、13 · 6min、19 · 9min。
[0046]图8为实施例1杂质UI-1、3_氯苯丙酮、SMle对照品溶液HPLC图，图8中的色谱峰为 1]1-1、3-氯苯丙酮、5]\116的色谱峰，保留时间依次为：10.211^11、13.711^11、20.111^11。
[0047] 图9为实施例1杂质UI-1、3-氯苯丙酮、SMle检测限HPLC图，图9中的色谱峰为UI-1、 3_氯苯丙酮、SMle的色谱峰，保留时间依次为：10.3min、13.8min、20.2min。
[0048]图10为实施例1杂质UI-1、3_氯苯丙酮、SMle加入试验HPLC图，图10中的色谱峰为 1]1-1、3-氯苯丙酮、5]\116的色谱峰，保留时间依次为：10.3111丨11、13.8111丨11、20.211^11。
[0049] 图11为实施例1盐酸达泊西汀HPLC图，图11中的色谱峰UI-1、3-氯苯丙酮、SMle都 未检出。
[0050]图12为实施例2盐酸达泊西汀对照品HPLC图，图12中的色谱峰为盐酸达泊西汀的 色谱峰，保留时间在10.3min左右。
[0051 ]图13为实施例2杂质UI-1对照品HPLC图，图13中的色谱峰为杂质UI-1的色谱峰，保 留时间在3.4min左右。
[0052]图14