一种无糖型强力枇杷露指纹图谱检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明提供一种无糖型强力枇杷露指纹图谱检测方法，属于医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 强力枇杷露为常用中成药，由枇杷叶、百部、白前、薄荷脑、罂粟壳、桑白皮、桔梗7 味中药组成，具有养阴敛肺、镇咳、祛痰的作用，用于久咳劳嗽、支气管炎等。
[0003] 1、枇杷叶是一味常用中药，其味苦、微辛，性微寒。归肺、胃经，自古以来就被当作 药材使用，是传统的止咳平喘中药，有化痰止咳、和胃降逆、止痢利尿的功效，对神经痛、关 节炎、腰疼和癌症等亦有一定疗效。还主治肺热咳嗽、阴虚劳咳、湿疹等症，收载于历版《中 国药典》供中医临床使用。
[0004] 枇杷叶的化学成分包括：（1)三萜类:枇杷叶中的三萜类化合物有白桦酯酸甲酯、 齐墩果酸、乌索酸(熊果酸）、2_α羟基齐墩果酸甲酯、科罗索酸甲酯、2-α羟基齐墩果酸、科罗 索酸、委陵菜酸、蔷薇酸等；目前，对枇杷叶三萜酸研究较多主要是熊果酸和齐墩果酸。（2) 黄酮类:枇杷叶中含有多种黄酮化合物，其苷元主要为山萘酚、槲皮素，糖苷由1-3个单糖组 成，常见的苷元为葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖，连接位置多为3-位，还有少量乙酰化 黄酮苷存在。（3)其他成分:倍半萜类、多酚类等成分。
[0005] 2、中药罂粟壳为罂粟科植物罂粟的成熟果壳，有敛肺、涩肠、止痛的功能，用于久 咳、久泻、脱肛、脘腹疼痛。罂粟壳所含的主要生物活性成分为吗啡类生物碱，久服易成瘾。
[0006] 罂粟壳化学成分：（1)盐酸吗啡：属于阿片类生物碱，为阿片受体激动剂。（2)磷酸 可待因：化学名为17-甲基-3-甲氧基-4,5a-环氧_7,8_二去氢吗啡喃-6a-醇磷酸盐倍半水 合物。（3)盐酸罂粟碱:化学名称为：1-[(3,4_二甲氧基苯基）甲基]_6,7_二甲氧基异喹啉盐 酸盐。（4)其他成分:罂粟壳中还含有蒂巴因、那可汀及罂粟壳碱等生物碱。
[0007] 3、桑白皮为桑科植物桑的干燥根皮。桑白皮味甘、辛，性寒，具有泻肺平喘、利水消 肿之功效，用于治疗肺热喘咳、水肿、胀满、尿少，面目肌肤浮肿等症。
[0008] 桑白皮化学成分：（1)香豆素类:5,7_羟基香豆素、伞形花内酯、东莨菪素、skimmi、 东莨菪内酯(6-甲氧基-7-羟基-香豆素）。（2)黄酮类化合物：桑根白皮素、环桑根皮素、桑 素、桑色烯、环桑素、环桑色烯素、桑酮A-V、羟基二氢桑根皮素、桑根皮素-4-葡萄糖苷、桑皮 根素氢过氧化物、化合物A、桑根皮醇、环桑色醇、桑苷A-D、摩查尔酮A、5,7-二羟基色酮、二 氢黄酮类桑根酮。（3)芳香苯骈呋喃衍生物:主要为桑皮呋喃A-Z，此类化合物以苯骈呋喃为 基本结构。（4)多糖类:粘液素、桑多糖、甲壳素、壳聚糖。（5)其他有机化合物:丁醇、桑辛素 (八』、(^16)、3,4-二羟基苯甲酸乙酯、桦皮酸、苷类衍生物、0-谷留醇、鞣质和挥发油等。
[0009] 4、桔梗[Platycodon grandif lorum(Jacq. )A.DC.]为桔梗科植物桔梗的干燥根， 味苦、辛，性平，归肺经，宣肺祛痰，长于宣肺而疏散风邪，为治外感风寒或风热引起的咳嗽、 咽喉肿痛等常用药。
[0010] 桔梗化学成分：（1)三萜皂苷:桔梗的主要有效成分为桔梗皂苷，约占2.5%。迄今 已分得桔梗皂苷A、C、D、D2、D3等18种三萜皂苷，而桔梗皂苷D是桔梗皂苷中的主要皂苷。（2) 黄酮类:黄衫素，槲皮素-7-0-葡萄糖苷，槲皮素-7-0-芸香糖苷，木樨草-7-0-葡萄糖苷等。 (3)其他成分:酚类，聚炔类，挥发油类，脂肪酸、氨基酸、矿物质类等。
[0011] 5、百部为百部科直立百部、蔓生百部、和对叶百部的块根，主产于山东、安徽、江 苏、湖南等地。甘、苦，微温，归肺经。具有润肺下气止咳、杀虫的功效。主治:风寒咳嗽、百日 咳、肺结核、老年咳喘、蛔虫病、蛲虫病、皮肤疥癣、湿疹等。
[0012] 百部化学成分：百部的主要成分为生物碱类，到目前为止已确定结构的百部生物 碱有100多种；（1)直立百部根含:对叶百部碱、百部碱、原百部碱、百部定碱、脱氢原百部定 碱、异原百部碱、狭叶百部碱、直立百部碱A、直立百部碱B、直立百部碱C、直立百部碱D、二氢 百部新碱、双去氧百部新碱A、双去氧百部新碱、百部新碱A、百部新碱B、百部新碱等。（2)蔓 生百部的根含:百部碱、原百部碱、百部宁碱、华百部碱、次百部碱、异次百部碱、蔓生百部碱 及异蔓生百部碱等。（3)对叶百部的根含:百部碱、对叶百部碱、异对叶百部碱、斯替宁碱、次 对叶百部碱、氧化对叶百部、斯替明碱及斯替宁碱等。
[0013] 6、薄荷是我国传统中药，广泛分布于北半球的温带地区，在我国广布于南北各省。 我国栽培的薄荷品种多属东亚及热带亚洲的薄荷种。薄荷药材为唇形科植物薄荷的地上干 燥部分，味辛、性凉，口服用于风热感冒、风温初起、头痛、目赤、喉痹、目疮、风疹、麻疹、胸胁 胀闷。
[0014] 薄荷化学成分:薄荷的成分主要是薄荷挥发油和薄荷脑(薄荷醇）。
[0015] 7、白前为萝摩科植物柳叶白前或芫花叶白前的干燥根茎及根，具有降气、消痰、止 咳的功能，主要用于肺气塗实，咳嗽多疲，胸满喘急等症。
[0016] 白前化学成分：（1)柳叶白前:邱声祥从其根茎的脂溶性成分中分离到3个成分，经 光谱分析鉴定为谷留醇，C24~C 3〇脂肪酸和三萜华北白前醇。（2)华北白前:娄红详等从华 北白前中分离得两种菲吲哚联啶类生物碱，通过高分辨核磁共振谱、CD、0RD等确定结构为 安托芬及6-去甲安托分，后又进一步分离到5个化合物，分别为蔗糖、β-谷留醇、胡萝卜苷、 芥子酸及变型孕留烷的衍生物C 21的留体苷一一白薇苷甲。1991年他们从中分离到4个新三 萜类化合物，通过光谱分析及化学相关等分别鉴定为华北白前醇、新白前醇、新白前酮及 新白前醇二十八烷酸酯，均为新型骨架化合物，后又分离得一个新结构的单萜甙类化合物， 命名3-氧-(β-D-吡喃木糖吡喃葡萄糖基)-芳樟醇。1992年他们从华北白前干燥根 的乙醇提取物中分离得到5个单萜类化合物，其中3个新化合物为4-p-樟烷_1，7,8，_三醇、 华北白前新戒A和华北白前新戒B，已知化合物为4-p-棒稀_1_8，9-二醇和4-p-棒烧-1，8，9 三醇，后又从其干燥根的乙醇提取物中分离鉴定了 6个C21留体类化合物，其中白前苷元C，白 薇苷A，白前苷元A，脱水何拉得苷元为已知化合物;新化合物为华北白前苷元B，华北白前苷 A〇
[0017] 目前关于强力枇杷露的指纹图谱鉴定文献很少，中国专利申请CN201010263871.4 公开了一种枇杷叶的薄层色谱鉴定方法和罂粟壳中吗啡的含量测定方法。中国专利申请 CN201210312564.X，公开了强力枇杷露的三种成分的鉴定方法，包括罂粟壳、薄荷脑、枇杷 叶的薄层色谱法鉴定、罂粟壳含量的液相色谱法测定。中国专利申请CN200610018599,公开 了一种薄荷脑的薄层色谱鉴定方法。
[0018] 上述方法均不能同时测定强力枇杷露的所有成分，而是只能测定某种成分，而且 薄层色谱法存在不精确性。
[0019] 指纹图谱是以多组分为指标，综合评价中药材和中成药内在质量的有效方法，中 国专利201410682971.9-种强力枇杷露指纹图谱质量控制方法，该方法采用高效液相色谱 法，首先将强力批把露待测产品溶液的制备方法及色谱条件进行了优化，包括流动相体系、 流动相梯度、提取溶剂、提取次数等，使得色谱图分离较好、谱峰较多、给出的信息量较大； 然后优化了检测波长，得到基线平稳的强力枇杷露样品色谱图。
[0020] 强力枇杷露是由枇杷叶、罂粟壳、百部、桑白皮、桔梗、白前和薄荷脑七味药材组 成，具有养阴敛肺、镇咳祛痰之功，用于久咳唠嗽，支气管炎等。由于成分组成复杂，有效成 分的多样性，对色谱的柱效要求进一步提高，不仅需要分离度高，灵敏度高，而且处理速度 亦需更进一步提高。因此，为更加准确地反映强力枇杷露的整体质量状况，除了对其中多组 分、多指标进行控制外，有必要研究建立更可靠的强力枇杷露的指纹图谱。
【发明内容】
[0021] 本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，建立一种更准确、可靠且高效的无糖型 强力枇杷露指纹图谱鉴定方法，该方法可用于鉴别无糖型强力枇杷露的品质，本发明提供 一种建立无糖型强力枇杷露指纹图谱的方法，供试品的制备包括以下步骤：
[0022] 1)强力枇杷露中间体：除薄荷脑外，其余枇杷叶等六味药材加水煎煮两次，每次 2h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约750ml，得强力枇杷露中间体；
[0023] 2)强力枇杷露供试品的制备:除薄荷脑外，其余枇杷叶等六味药材加水煎煮两次， 每次2h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约750ml，加苯甲酸钠2.5g，搅拌使溶解，加甜菊素2g， 继续加热至沸，保持20分钟