一种土壤中硝磺草酮及其代谢物的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析技术领域，设及除草剂残留含量分析方法，特别设及一种±壤中 硝横草酬及其代谢物的检测方法。
【背景技术】
[0002] 硝横草酬(Mesotrione)为Ξ酬类弱酸性除草剂，是一种能够抑制杂草体内径基苯 基丙酬酸醋双加氧酶化PPD)的苗前、苗后广谱选择性除草剂，可W有效防治玉米田主要的 阔叶草和一些禾本科杂草，已在我国得到广泛应用，但其大规模的使用或滥用也会对农产 品质量安全、后巷作物及其他非祀标生物带来潜在的危害。硝横草酬在±壤中易被微生物 降解，降解产物主要为两种：4-甲讽基-2-硝基苯甲酸（4-(methylsulfonyl)-2- ni1:;robenzoicacid，MNBA)和2-氨基-4-甲讽基苯甲酸（2-amino-4-(methylsulfonyl) benzoic acid,AMBA)，已有研究表明AMBA毒性高于硝横草酬，而MNBA毒性低于硝横草酬，Ξ 者化学结构式如下：
[0003]
[0004] 硝横草酬、AMBA和MNBA易溶于水，由于具备难挥发、热不稳定性的特点，无法进行 气相色谱分析。目前，硝横草酬分析方法多采用高效液相色谱法，高效液相色谱主要有紫外 法和巧光法，但紫外法灵敏度较低，抗基质干扰能力弱，对于复杂的±壤样品不能做到有效 分离;而巧光法虽具有灵敏度高、选择性好的特点，但步骤繁琐、耗时较长。目前，国内外尚 未见同时测定±壤中硝横草酬及其代谢物的残留方法报道。
[0005] 而为了保证±壤安全保护人体健康，特别需要一种硝横草酬及其代谢物的检测方 法。
【发明内容】
[0006] 针对现有技术中存在的诸多不足之处，本发明提供了提供了一种±壤中硝横草酬 及其代谢物的检测方法，其具体为超高效液相色谱-串联质谱法，样品用经氨水-乙腊溶液 提取后，过Cleaned PAX固相萃取柱进行净化，W乙腊和0.3%甲酸水为流动相，Acquity HSS T3色谱柱梯度洗脱，电喷雾负离子多反应监测模式UPLC-MS/MS检测获得结果。该方法 准确度高、精密度好、回收率高、简便、可行，特别适合硝横草酬及其代谢物的检测和分析。
[0007] 本发明所采用的分析方法具体如下：
[000引1.标准曲线的获得：
[0009] 1.1标准溶液配制
[0010] 分别准确称取ο . Olg硝横草酬和代谢物MNBA、AMBA标准品，用体积比为50: 50的乙 腊-水混合溶液溶解并定容至lOOmL，配制成lOOmg/L标准储备液，-20°C避光保存;分别移取 标准储备液1血至lOmL容量瓶中，用体积比为10:90的乙腊-水混合溶液定容，配成1-lOmg/L 混合标准工作液;用乙腊和水体积比为10:90的混合溶作为稀释液，分别将标准工作液逐级 稀释成0.1~2(K)yg/L的标准系列工作溶液；
[0011] 1.2色谱条件
[0012] Waters Acquity UPLC 服S T3色谱柱（100X2.1mm，i.d.l.7皿）；柱溫：40°C，样品 室溫度l〇°C;进样体积：5.0化;流动相A为0.3vt%的甲酸水溶液，流动相B为乙腊；流速： 0.5mL/min，梯度洗脱，洗脱程序：
[001；3] 0~2min，95vt%流动相A余量为流动相B;
[0014] 2~3.5min，95~80vt%流动相A余量为流动相B;
[0015] 3.5~7.5111111，80~3〇￥1%流动相4余量为流动相8;
[0016] 7.5~8.5min，30vt %流动相A余量为流动相B;
[0017] 8.5~9.5min，30~95vt %流动相A余量为流动相B;
[001引之后回到初始比例:95vt %流动相A余量为流动相B，并保持4min;
[0019] 洗脱过程获得的洗脱液进入质谱仪进行检测；
[0020] 通过采用上述的洗脱流动相比例调整和对应的洗脱时间，可W获得针对本发明最 好的分离效果，从而获得最准确的检测结果。
[0021] 1.3质谱条件
[0022] 电喷雾离子源;负离子多反应监测;离子源溫度:450°C ;雾化气:50mL/min;辅助加 热气：50mL/min;气帘气：15mL/min，上述雾化气、辅助加热气和气帘气均选用氮气；电喷雾 电压:4500V;碰撞气体:7mL/min，选用氮气，驻留时间：50ms;其它条件参数见表1:
[0023] 表1硝横草酬及其代谢物的ESr-MS/MS条件参数
[0024]
[0026] 1.4.样品检测
[0027] 按1.3配制的0.1~200yg/L系列标准工作液，W进样浓度(yg/L)为横坐标X，定量 离子对的色谱峰面积为纵坐标Y，根据检测结果绘制标准曲线，见表2，
[002引表2标准曲线方程
[0029]
[0030] 可见Ξ种化合物线性关系良好，相关系数r〉0.99，同时根据±壤空白样品的10倍 信噪比确定方法的定量限，硝横草酬、MNBA和AMBA定量限分别为0.03yg/kg、0.扣g/kg和0.3 yg/kg。
[0031 ] 获得上述标准曲线后即可对样品进行检测：
[0032] 2. ±壤样品前处理
[00削 2.1样品提取
[0034] 称取±壤样品lO.Og于50mL具塞塑料离屯、管中，加入25血乙腊和0.1 vt%氨水混合 物，其中乙腊与氨水体积比为10:90，满旋混匀后超声提取lOmin，于7000r/min离屯、5min，上 清液经滤纸过滤至50mL容量瓶中，向残渣±壤中再加入15mL上述乙腊和0.1 vt%氨水混合 物，重复上述操作，合并滤液至50mL容量瓶中，用上述乙腊和0.1 vt %氨水混合物定容，得样 品提取液；
[0035] 采用上述提取方法，使用碱性溶液作为提取液，可W使目标化合物W游离离子形 式存在，降低±壤有机质对目标化合物的吸附，可W显著提高目标化合物回收率；
[0036] 2.2 净化
[0037] 将PAX固相萃取小柱依次用3mL甲醇、3mL水预洗活化平衡后，加入25mL上述样品提 取液，然后依次用3mL 50mmol/L乙酸钢、3mL甲醇淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，抽至近干 后，用5mL体积比为87:9:4的乙酸乙醋-甲醇-甲酸混合液洗脱，收集洗脱液;洗脱液于40°C 水浴下氮气吹至近干，残留物用乙腊和水体积比为10:90的混合溶液定容至l.OmL，满旋混 匀Imin，过0.22μπι微孔滤膜，待测；
[0038] 由于±壤基质复杂，采用上述净化处理，可W显著降低非目标化合物干扰，即可获 得最佳的色谱分离，又可降低质谱基质效应，配合本发明设定的质谱条件，可W大大提高检 测灵敏度；
[0039] 2.3 检测
[0040] 将上述获得的待测样品根据1.2-1.4的方案进行超高效液相色谱-串联质谱法检 测，对照标准曲线即可获得样品浓度。
[0041] 综上所述，本发明提供了一种±壤中硝横草酬及其代谢物的检测方法，其具体为 超高效液相色谱-串联质谱法，样品用经氨水-乙腊溶液提取后，过Cleaned PAX固相萃取 柱进行净化，W乙腊和0.3%甲酸水为流动相，Acquity HSS T3色谱柱梯度洗脱，电喷雾负 离子多反应监测模式UPLC-MS/MS检测获得结果。该方法准确度高、精密度好、回收率高、简 便、可行，特别适合硝横草酬及其代谢物的检测和分析。
【具体实施方式】
[0042] 实施过程中所采用的仪器与试剂：
[0043] LC-30A超高效液相色谱系统（日本岛津公司）；AB SCIEX Triple Quad 4500Ξ重 四极杆串联质谱仪及Analyst工作站(美国AB SCIEX公司）；IKA MS3縱满混合器(德国IKA公 司）;KQ500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；JNC N-EVAPTM112型氮吹仪(美国 O;rganomation公司）；Sigma 3K30高速冷冻离屯、机(德国Sigma公司）A10超纯水系 统(美国Millipore公司）。
[0044] 硝横草酬及代谢物MNBA、AMBA标准品（德国Dr .Ehrenstorfer公司）；Cleane;rt PAX 60mg/3mL Cartridge固相萃取小柱（天津博纳艾杰尔科技有限公司）；乙酸钢、氨水(分析 纯，国药集团化学试剂有限公司）；甲酸(色谱纯，阿沙埃莎(天津)化学有限公司）；甲醇、乙 腊(色谱纯，美国Fisher科技公司）。
[0045] 上述物质均由市场直接购得，操作方法按照其说明书进行操作。
[0046] 实施例1
[0047] 现有一批红±样本，样本来源于室内±壤降解模拟实验（硝横草酬添加量lOmg/ kg)，数量5公斤，需检测该批±壤样本中硝横草酬和代谢物MNBA、AMBA的含量:具体检测方 法如下：
[004引（1).标准曲线的获得：
[0049] (1.1)标准溶液配制
[0050] 分别准确称取0 . Olg硝横草酬和代谢物MNBA、AMBA标准品，用体积比为50: 50的乙 腊-水混合溶液溶解并定容至lOOmL，配制成lOOmg/L标准储备液，-20°C避光保存;分别移取 标准储备液1血至lOmL容量瓶中，用体积比为10:90的乙腊-水混合溶液定容，配成1-lOmg/L 混合标准工作液;用乙腊和水体积比为10:90的混合溶作为稀释液，分别将标准工作液逐级 稀释成0.1~2(K)yg/L的标准系列工作溶液；
[0051] (1.2)色谱条件
[0052] Waters Acquity U化C HSS T3色谱柱；柱溫：40°C，样品室溫度10。。进样体积： 5. 流动相A为0.3vt %的甲酸水溶液，流动相B为乙腊;流速:0.5mL