一种苏丹红i的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种苏丹红I的检测方法，具体涉及I，8_萘二胺/Cu2+复合物作为荧光探针定量检测苏丹红I的方法。
【背景技术】
[0002]随着经济社会的快速发展，癌症的发病率和死亡率呈不断上升的趋势。苏丹红I(Sudan I，分子式:C16H12N2q)，是一种常用的红色染料，它在1896年由化学家Daddi命名，是一种工业用油溶性偶氮染料，也被工业应用中称为溶剂黄14或油溶黄R，化学名为1-苯基偶氮-2-萘酚，用于彩色蜡、油脂、汽油、溶剂和鞋油等的增色添加剂及焰火礼花的着色。
[0003]但是苏丹红禁止用于食品行业中，因为它被国际癌症研究机构(IARC)列为致癌物质之一，而常见食品如番茄酱、火腿肠、辣椒酱等经常发现含有苏丹红添加剂，因此，快速准确检测食品中苏丹红含量十分重要。
[0004]目前，苏丹红I的检测方法主要采用高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱一质谱法(LC-MS)、电喷雾解析电离质谱法(DES1-MS)和等离子共振光散射法等，由于色谱方法的前处理过程复杂，检测时间长，检测费用高，给实际分析带来不便。
【发明内容】
[0005]针对以上不足，本发明提供了一种苏丹红I的检测方法，通过I，8_萘二胺与Cu2+螯合形成I，8_萘二胺/Cu2+复合物，焚光猝灭，当往该体系中加入苏丹红I时，苏丹红I能夺取I，8-萘二胺/Cu2+复合物中的Cu2+形成较稳定的苏丹红Ι/Cu2+复合物，释放出I，8-萘二胺，从而使1，8_萘二胺的荧光回升，据此建立了苏丹红I的检测方法。该方法灵敏度高、操作简单、检测限低。
[0006]本发明采取的技术方案为:
[0007]—种苏丹红I的检测方法，通过向I，8-萘二胺/Cu2+复合物体系中加入不同浓度的苏丹红I水溶液，通过苏丹红I水溶液浓度与荧光回升比率F/Fo之间的线型关系定量检测出苏丹红I的浓度；
[0008]Fo和F别为I，8_萘二胺/Cu2+复合物在440nm处的荧光强度和I，8_萘二胺/Cu2+复合物加入苏丹红I后在440nm后的荧光强度。
[0009]—种苏丹红I的检测方法，所述检测方法包括以下步骤:
[0010]A.配置多组I，8-萘二胺/Cu2+复合溶液体系:取I，8-萘二胺水溶液与Cu2+水溶液混合，反应20?40min;
[0011 ] B.往上述溶液中依次加入ImL浓度为O?7.5 X lO^mol L—1苏丹红I水溶液，并加入ImL pH为6.7?7.5的PEPES缓冲溶液，最后用去离子水稀释至10mL，混合液搅拌放置70?90min后测其荧光强度；
[0012]C.以苏丹红I浓度为X轴，对应的荧光回升比率F/Fo为Y轴作图，得到苏丹红I浓度与荧光回升比率F/Fo之间的线性方程，根据线性方程可计算出任意荧光强度所对应的苏丹红I浓度；
[0013]所述I，8_萘二胺水溶液的终浓度为1X10—V)1L—1;
[0014]所述Cu2+水溶液的终浓度为3.75 X 10—6mol L—1 ；
[0015]所述苏丹红I水溶液的终浓度分别为0、5X10—7mol L—\ 12 X 10—7mol L—1、17 X 10一7mol r\23X10_7mol L—\28 X 10—7mol L—\34 X 10—7mol L—\40 X 10—7mol L—\46 X 10—7molL-、
[0016]所述PEPES缓冲溶液的pH优选为6.7。
[0017]所述线性方程为F = 20.9 X C+736.38且线性相关系数R2为0.9986 ； C表示苏丹红I的终浓度。
[0018]所述检测方法具体包括以下步骤:
[0019]A.配置多组I，8-萘二胺/Cu2+复合溶液体系:取ImL浓度为I X 1^mol L—1的I，8_萘二胺水溶液与ImL浓度为3.75X 10—5H1l L—1的Cu2+水溶液加入到具塞比色管中，反应20min;
[0020]B.往上述溶液中依次加入ImL浓度为O?7.5X10—6H1l L—1苏丹I水溶液，并加入ImLpH为6.7的PEPES缓冲溶液，最后用去离子水稀释至10mL，混合液搅拌放置70min然后测其荧光强度；
[0021]C.以苏丹红I浓度为X轴，对应的荧光回升比率F/Fo为Y轴作图，得到苏丹红I浓度与荧光回升比率F/Fo之间的线性方程F = 20.9XC+736.38且线性相关系数R2为0.9986。，根据线性方程可计算出任意荧光强度所对应的苏丹红I浓度；
[0022]所述苏丹红水溶液的终浓度分别为0、5X10—7mol L—1、12 X 10—7mol L—\l7X10—7mol r\23X10_7mol L—\28 X 10—7mol L—\34 X 10—7mol L—\40 X 10—7mol L—\46 X 10—7molL-、
[0023]上述检测方法中，随着苏丹红I浓度的增大，1，8_萘二胺/Cu2+复合体系的荧光强度逐渐增强。
[0024]所述检测方法可以排除其它金属离子的干扰，检测限可达到4.35nmolL—S所述其它金属离子包括 Ag+，Na+，Cd2+，Zn2+，Al3+，Co2Mg2+, K+，Ca2+，Ni2+和 Hg2+金属离子。
[0025]本发明现对于现有技术，具有以下优点:
[0026]1.本方法不需要合成新材料，通过1，8-萘二胺/Cu2+复合体系构成的荧光探针实现对苏丹红I高灵敏型检测，其操作简单；
[0027]2.本发明提供了一种新型的基于荧光分光光度法检测苏丹红I的方法，操作简单方便、快速、检测限更低。
【附图说明】
[0028]图1为I，8_萘二胺溶液中加入不同浓度铜离子溶液的荧光光谱图；
[0029]图2为Cu2+浓度对体系荧光回升效率的影响图；
[0030]图3为I，8_萘二胺/Cu2+复合体系中加入不同浓度苏丹红I溶液后的荧光光谱图；[0031 ]图4为苏丹红I浓度与I，8_萘二胺/Cu2+复合体系荧光回升比率关系图；
[0032]图5为pH对体系荧光回升效率的影响图；
[0033]图6为I，8_萘二胺在Cu2+和其他金属离子存在时，加入苏丹红I的荧光回升强度图。
【具体实施方式】
[0034]实施例1
[0035]I，8-萘二胺/Cu2+复合溶液的荧光测试
[0036]向终浓度为IX 10—6H1l L—1的I，8-萘二胺溶液中分别加入终浓度为0、I X 1θΛιο1L—S I.5 X 10—6mol ^,2.25X10^01 L—1，3.0 X 10—6mol L—S3.75X 10—6mol L—1，4X 10—6molL—1AXKT6mOl L—1J-OXKT6mol L—1，7.5 X 10—6mol L—1 的Cu2+溶液，分别测试各复合溶液体系的荧光光谱。
[0037]试验结果如图1所示，I，8_萘二胺溶液具有很强的荧光强度，当加入Cu2+后，I，8_萘二胺的荧光强度随着Cu2+浓度的增加而逐渐降低，说明Cu2+对I，8_萘二胺的荧光有猝灭作用。
[0038]I，8_萘二胺与Cu2+的浓度不仅能影响体系的荧光强度，还能影响实验的灵敏度。考虑到上述两方面因素，实验中选择I，8_萘二胺的浓度为10—V)1 L—'Cu2+浓度对体系荧光回升效率的影响如图2所示。从图2.5中可以看出，当Cu2+的浓度为3.7 5 X I O—6mo I L—1时，体系的荧光回升效率最大。因此，实验中选取终浓度为3.75X 10—V)1 L—1的Cu2+溶液进行苏丹红I的检测实验。
[0039]实施例2
[0040]—种苏丹红I的检测方法，所述方法包括以下步骤:
[0041 ] A.配置多组I，8-萘二胺/Cu2+复合溶液体系:取ImL浓度为I X 1^mol L—1的I，8_萘二胺水溶液与ImL浓度为3.75X 10—5H1l L—1的Cu2+水溶液加入到具塞比色管中，反应20min;
[0042]B.往上述溶液中依次加入ImL浓度为O?7.5 X 10—Vol L—1苏丹红I水溶液，并加入ImLpH为6.7的PEPES缓冲溶液，最后用去离子水稀释至10mL，混合液搅拌放置70min然后测其荧光强度；
[0043]所述苏丹红I水溶液的终浓度分别