一种苯唑嘧菌胺残留量的gc-ms/ms快速测定方法
【专利说明】一种苯唑嘧菌胺残留量的GC-MS/MS快速测定方法 本发明公开了一种苯唑嘧菌胺残留量的GC-MS/MS快速测定方法，该方法主要用于测定 脂肪含量高的动物源性食品中残留的苯唑嘧菌胺含量的方法。用乙腈均质提取样品中残留 的苯唑啼菌胺，提取液经增强型脂质去除产品（Enhanced MatriX Removal，EMR)基质分散 净化、反萃管萃取浓缩后，气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)检测，采用不含待测农药的空白基 质溶液建立校正的标准工作曲线，外标法定量。本方法平均回收率为91.3 %~99.0%，平均 相对标准偏差(RSD)为5.2 %~8.6 %，检出限低于6.74yg/kg，具有操作简便、快速、去杂效 果好、灵敏度高、特征性强、重复性好、定性定量准确的优点。能满足美国、欧盟、日本等国家 对相应产品安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全及对外出口贸易健康发展提供 有力的技术支撑。 i .一种苯唑嘧菌胺残留量的GC-MS/MS快速测定方法，其特征在于，所述方法包括以下 步骤： (1) 提取 称取混匀样品于具塞离心管中，加适量水后，加入乙腈溶液均质提取后，加入氯化钠和 无水硫酸镁，剧烈涡旋lmin后离心； (2) 净化 将增强型脂质去除产品EMR用水活化，移取样品提取液于活化好的EMR净化管中，祸旋 lmin后，7000r/min离心5min，转移全部上清液至装有无水硫酸镁和氯化钠的离心管中进行 盐析，涡旋离心后，移取一定体积的上清液，浓缩至干后，用体积比为1/1的丙酮/正己烷混 合溶剂溶解定容，过膜后，待气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)检测； (3) 标准工作溶液的配制 将不含苯唑嘧菌胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理，得样品提取净化 残渣，加入适量溶剂和标准溶液，涡旋混匀，配制成至少3个浓度的苯唑嘧菌胺系列标准工 作液； (4) 测定和结果计算 将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰 面积对其相应浓度进行回归分析，得到基质标准工作曲线;在相同条件下将步骤(2)中净化 后的样品液注入GC-MS/MS进行测定，测得样品液中苯唑嘧菌胺的色谱峰面积，代入基质标 准工作曲线，得到样品液中苯唑嘧菌胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到 样品中苯唑嘧菌胺残留量;若上机溶液中苯唑嘧菌胺残留量超过线性范围上限，需用定容 溶剂将上机溶液浓度稀释至线性范围之内。 2. 根据权利要求1所述的一种苯唑嘧菌胺残留量的GC-MS/MS快速测定方法，其特征在 于，步骤(1)中样品若为含水量较少的样品，提取前须加适量水充分浸润。 3. 根据权利要求1所述的一种苯唑嘧菌胺残留量的GC-MS/MS快速测定方法，其特征在 于，步骤(4)中GC-MS/MS分析条件为:色谱柱:HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0.25mm， 膜厚0.25μπι;进样口温度250.0°C ;载气:He，不分流模式进样，进样量：lyL;恒流模式，流速 1.2mL/min;升温程序:初温60°C保持2min，以每分钟20°C的速度升至200°C，然后以每分钟2 °C的速度升至220°C，再以每分钟20°C的速度升至280°C，保持lOmin;传输线温度:290°C ;电 离模式：电子轰击电离(El，70eV);离子源温度280°C ;碰撞气：氩气；多反应监测扫描方式 MRM，监测参数为：
技术领域
[0001 ]本发明涉及一种苯唑嘧菌胺残留量的GC-MS/MS快速测定方法，更具体地说是采用 气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)定性定量测定猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉等动物肌肉及制品等脂 肪含量高的动物源性食品中残留的苯唑嘧菌胺含量的方法，属于农药残留量的测定技术领 域。
【背景技术】
[0002] 苯唑啼菌胺(Ametoctradin)是巴斯夫公司开发的新型杀菌剂，商品名为Initium， 化学名称为:5-乙基-6-辛基[1，2，4]三唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺，化学式为C15H25N5，结构式 为：
[0003] 苯唑嘧菌胺(Ametoctradin)属于均三唑并嘧啶类化合物，它作为一种线粒体呼吸 作用抑制剂而发挥作用，能防治卵菌纲真菌病害，例如霜霉病和各种疫病。Ametoctradin于 2010年在欧盟及南美首次或批准，现已在美国和意大利等多个国家获得登记，登记产品包 括单一活性围城代号为BAS 65000F(ametoctradin 200克/升）产品及两种商标名称为 Zampro和Orvego(两者均含ametoctradin 300克/升+dimethomorph 226克/升，稀酰吗啉） 复配制剂产品，它与烯酰吗啉制成的复配制剂主要用于控制易产生抗性的病害。BAS 65000F被登记用于果树、蔬菜和蛇麻，而Zampro用于果树、蔬菜、葡萄和土豆，Orvego则用于 观赏作物。预计它们的年销售额可达12亿欧元，应用前景广阔。
[0004] 随着苯唑嘧菌胺的登记、推广和使用，作为我国蔬菜、水果主要出口市场的美国和 欧盟对其制定了残留限量标准。欧盟规定其在多种食品农产品中的最大允许残留限量为 0.01~50mg/kg，日本等国家规定若田间使用农药没有在该国家登记，没有制定相应的残留 限量标准时，出口至其国家的食品农产品包括畜禽肉等动物源性食品中残留限量均实行 0.01mg/L的" 一律标准"。
[0005] 现阶段，对苯唑嘧菌胺残留量测定方法的研究较少，报道的检测方法主要为蔬菜 和水果中苯唑嘧菌胺残留检测方法，这些检测方法均采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)测 定蔬菜和水果中苯唑嘧菌胺残留量的检测方法，使用LC-MS/MS测定食品农产品中农药残留 具有快速、简便、灵敏度高等优点，但由于其价格较昂贵，很多检测机构、企业或科研院所 未配置该仪器或配置台数较少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS检测时，需使用不同的流 动相或色谱柱，这样需要不断更换色谱柱、流动相并耗费比较长的时间对系统进行平衡，这 一定程度上制约了LC-MS/MS的应用。使用气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)分析食品农产品中 农药残留具有快速、简便、灵敏度高、选择性强等优点，可实现几百种农药的多残留分析，但 迄今为止未见食品农产品中苯唑嘧菌胺残留量的GC-MS/MS检测方法的报道，但迄今为止未 见食品农产品中苯唑嘧菌胺残留量的GC-MS/MS检测方法的报道。另外，众所周知，QuEChERS 前处理技术已成为农药残留分析中应用最广的样品前处理方法，但QuEChERS方法主要适用 于低脂肪含量的高含水基质，如大部分的水果蔬菜，在面对高脂肪含量基质时能力有限，一 般需要增加正己烷除脂、冷冻样品提取液去脂等步骤，但效果有限。近年来有些公司推出了 增强型脂质去除专利产品-Enhanced Matrix Removal，EMR-lipid，主要用于去除具有直链 烃类结构的脂类干扰物，包括游离脂肪酸、胆固醇、甘油三酯、磷脂等。该产品已被制成基质 固相分散萃取剂，经水活化后可直接通过分散固相萃取流程对提取液中的脂类杂质进行去 除，本发明应用该前处理方法净化动物源性食品时发现，该方法简单高效、对脂类物质去除 效果好，建立EMR基质分散净化、气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)定性和定量分析动物源性食 品中苯唑嘧菌胺残留量的检测方法具有重要意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种苯唑嘧菌胺残留量的GC-MS/MS快速测定方法，主要用于 测定动物源性食品等脂肪含量高的食品农产品中苯唑嘧菌胺残留量。
[0007] 为实现以上目的，本发明所采用的技术方案是:一种苯唑嘧菌胺残留量的GC-MS/ MS快速测定方法，包括如下步骤：
[0008] (1)提取 称取混匀样品于具塞离心管中，加入适量水复苏后，定量加入乙腈溶液均质提取，然后 加入氯化钠和无水硫酸镁，剧烈涡旋lmin后离心。
[0009] 净化 将增强型脂质去除产品EMR用水活化，移取样品提取液于活化好的EMR净化管中，祸旋 lmin后，7000r/min离心5min，转移全部上清液至装有无水硫酸镁和氯化钠的离心管中进行 盐析，涡旋离心后，移取一定体积的上清液，浓缩至干后，用体积比为1/1的丙酮/正己烷混 合溶剂溶解定容，过膜后，待气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)检测。
[0010] (3)标准工作溶液的配制 将不含苯唑嘧菌胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理，得样品提取净化 残渣，加入适量溶剂和标准溶液，涡旋混匀，配制成至少3个浓度的苯唑嘧菌胺系列标准工 作液。
[0011] (4)测定和结果计算 将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰 面积对其相应浓度进行回归分析，得到基质标准工作曲线;在相同条件下将步骤(2)中净化 后的样品液注入GC-MS/MS进行测定，测得样品液中苯唑嘧菌胺的色谱峰面积，代入基质标 准工作曲线，得到样品液中苯唑嘧菌胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到 样品中苯唑嘧菌胺残留量;若上机溶液中苯唑嘧菌胺残留量超过线性范围上限，需用定容 溶剂将上机溶液浓度稀释至线性范围之内。
[0012] 步骤(1)中样品若为动物肝脏等含水量较少的样品，提取前须加适量水充分浸润。
[0013] 步骤(4)中气相色谱条件为:色谱柱:HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0.25mm， 膜厚0.25μπι;进样口温度250°C ;载气：He，不分流模式进样，进样量：lyL;恒流模式，流速 1.2mL/min;升温程序:初温60°C保持2min，以每分钟20°C的速度升至200°C，然后以每分钟2 °C的速度升至220°C，再以每分钟20°C的速度升至280°C，保持lOmin;传输线温度:290°C。 [0014]步骤(4)中质谱条件为：电离模式：电子轰击电离(EI，70eV);离子源温度280°C;碰 撞气:氩气;多反应监测扫描方式MRM，监测参数为：
[0015] 步骤(4)中测定样液和基质标准工作溶液时，若样液中农药色谱峰保留时间与标 准溶液中相应农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均 出现，而且离子丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在这种农药;若 上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药