一种氟唑菌酰胺残留量的gc-nci-ms测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种氣挫菌酷胺残留量的GC-NCI-MS测定方法，更具体地说是采用气 相色谱-负化学离子源-质谱(GC-NCI-MS)定性定量测定粮谷、猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉等动物 肌肉及制品等复杂基质的动植物源性食品中残留的氣挫菌酷胺含量的方法，属于农药残留 量的测定技术领域。
【背景技术】
[0002] 氣挫菌酷胺(f Iuxapyroxad)是由己斯夫公司开发的班巧酸脱氨酶抑制剂类杀菌 剂。化学名称:3-二氣甲基-1-甲基-N-(3'，4'，5'-S氣联苯-2-基)-lH-化挫-4-甲酯胺;分 子式:Cl細12F5N30;相对分子质量:381.3;烙点：157 °C ;相对密度：1.42。溶剂中的溶解度 (g/L，20°C):丙酬>250、乙腊168、乙酸乙醋123、甲醇53.4、甲苯20.0。氣挫菌酷胺的化学结 构式如下：
[0003] 氣挫菌酷胺具有高效、广谱、持效、优异的内吸传导性、同时具有预防和治疗作用 等优点。它能抑制抱子发芽、芽抱管伸长、菌丝体生长和抱子形成，可有效防治谷物、大豆、 玉米、油菜和特种作物等的主要病害。该产品通过叶面和种子处理来防治一系列真菌病害， 如谷物、大豆、果树和蔬菜上由壳针抱菌（Septoria)、灰葡萄抱菌（Bot巧tis)、白粉菌 化rySiphe)、尾抱菌（Cercospora)、柄诱菌（Puccinia)、丝核菌（RhiZOCtonia)、核腔菌 (Pyreno曲ora SPP.)等引起的病害。其特别适用于豆类植物，防治由链格抱菌(Alternaria spp.)引起的灰霉病(Bot巧tis cinerea)、诱病、白粉病和壳针抱菌引起的病害，大豆诱病 (化akopsora)，棉花上由立枯丝核菌(化izoctonia solani)引起的病害W及向日葵和油巧 菜上由链格抱菌引起的病害等。在所有试验剂量下，对所有作物非常安全。氣挫菌酷胺适配 性强，可与化挫酸菌醋、=挫类杀菌剂和己斯夫其他产品复配使用。研究表明，氣挫菌酷胺 比市售的酷胺类杀菌剂具有更好的活性，该产品无论在活性、多功能性，还是在内吸性和耐 雨水冲刷性等方面都为现代杀菌剂建立了新标杆。己斯夫打算将氣挫菌酷胺引入世界上50 多个国家，用于100多种作物上。2011年，氣挫菌酷胺首先在英国登记和上市，现登记和上市 的国家包括澳大利亚、美国、加拿大、欧盟13国、己西和中国等。公司预测，该产品的年峰值 销售额可达6亿欧元。运是所有SDHI类杀菌剂中，开发公司寄予的期望值最高的产品。
[0004] 随着氣挫菌酷胺的登记、推广和使用，作为我国主要出口市场的美国、加拿大等国 家制定了其在蔬菜、水果、粮谷和畜产品等食品农产品中的最大允许残留量(M化），如美国 规定氣挫菌酷胺在果蔬中的MRL为0.5~30mg/kg，在畜产品及水产品等动物源性食品中MRL 为O . Olmg/kg，在坚果及粮谷中脈L为0.06~15mg/kg;加拿大规定氣挫菌酷胺在果蔬中的 M化为0.02~2mg/kg，在畜产品及水产品等动物源性食品中脈L为0.0 l~0.05mg/kg，在坚果 及粮谷中ML为0.01~3mg/kg;欧盟、日本等国家规定若田间使用农药没有在该国家登记， 没有制定相应的残留限量标准时，出口至其国家的食品农产品包括畜禽肉等动物源性食品 中残留限量均实行O.Olmg/L的"一律标准"。
[0005] 现阶段，对氣挫菌酷胺残留量测定方法的研究较少，报道的检测方法主要为蔬菜 和水果中氣挫菌酷胺残留检测方法，运些检测方法均采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)测 定蔬菜和水果中氣挫菌酷胺残留量的检测方法，使用LC-MS/MS测定食品农产品中农药残留 具有快速、简便、灵敏度高等优点，但由于其价格较昂贵，很多检测机构、企业或科研院所未 配置该仪器或配置台数较少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS检测时，需使用不同的流动 相或色谱柱，运样需要不断更换色谱柱、流动相并耗费比较长的时间对系统进行平衡，运一 定程度上制约了 LC-MS/MS的应用。配备负化学电离源的气相色谱质谱(GC-NCI-MS)分析食 品农产品中农药残留具有很大优势，负化学离子源(NCI源)被称为质谱"软电离源"，对含电 负性集团的分析物具有高选择性和高灵敏度，由于其特征性强，利用其进行残留分析时，基 质干扰很少，可很准确地对目标物进行定性和定量分析。现各种检测机构和企业均购置了 气相色谱-质谱仪(GC-MS)，一般也都配备了负化学离子源(NCI)，现很多类农药均含有电负 性基团，有机氯和拟除虫菊醋类农药分子大都含有一F、一C1、一化或一COO-等强电负性基 团；有机憐农药分子大都含有=S、一OR、一P、一0-、一Cl、或一P = O等电负性基团；而近年 来开发的新型农药中大多含有一F基团，因此，使用GC-NCI-MS可方便实现多种农药的多残 留分析，与GC-EI-MS相比，能获得更好的抗干扰能力、更低的灵敏度和更好的选择性，但迄 今为止未见食品农产品中氣挫菌酷胺残留量的GC-NCI-MS检测方法的报道，氣挫菌酷胺属 电负性化合物，由于粮谷、动物源性食品等食品农产品基质比较复杂，须建立净化效果良好 的样品前处理方法和仪器分析条件才能满足检测要求，因此，建立气相色谱-负化学离子 源-质谱(GC-NCI-MS)定性和定量分析粮谷和动物源性食品中氣挫菌酷胺残留量的检测方 法具有重要意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种氣挫菌酷胺残留量的GC-NCI-MS测定方法，主要用于测 定粮谷、动物源性食品等复杂基质食品农产品中氣挫菌酷胺残留量。
[0007] 为实现W上目的，本发明所采用的技术方案是:一种氣挫菌酷胺残留量的GC-NCI-MS测定方法，包括如下步骤：
[000引（1)提取 称取混匀样品于具塞离屯、管中，加入适量水复苏后，定量加入乙腊或含1%乙酸的乙腊 溶液均质或振荡超声提取，然后加入氯化钢或乙酸钢中的一种和无水硫酸儀，剧烈满旋 Imin后离屯、。
[0009] (2)净化 移取一定体积样品提取液，浓缩至ImL左右，经Cis/PSA固相萃取柱净化，乙腊洗脱，收 集洗脱液，浓缩至干后，用体积比为1/1的丙酬/正己烧混合溶剂溶解定容，过膜后，待气相 色谱-负化学离子源-质谱(GC-NCI-MS)检测。
[0010] (3)标准工作溶液的配制 将不含氣挫菌酷胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理时，得样品提取净 化残渣，加入适量溶剂和标准溶液，满旋混匀，配制成至少3个浓度的氣挫菌酷胺系列标准 工作液。
[0011] (4)气相色谱-负化学离子源-质谱法(GC-NCI-MS)测定 将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC-NCI-MS测定，W标准工作液的色谱峰 面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线;在相同条件下将步骤(2)中净化后的 样品液注入GC-NCI-MS进行测定，测得样品液中氣挫菌酷胺的色谱峰面积，代入标准工作曲 线，得到样品液中氣挫菌酷胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中氣 挫菌酷胺残留量。若上机溶液中氣挫菌酷胺残留量超过线性范围上限，需用定容溶剂将上 机溶液浓度稀释至线性范围之内。
[0012] 步骤（1)中样品若为粮谷及动物肝脏等含水量较少的样品，提取前须加适量水充 分浸润。
[0013] 步骤(1)中采用乙腊提取时加入氯化钢盐析，采用含1%乙酸的乙腊溶液提取时加 入乙酸钢盐析。
[0014] 步骤(2)中进行Cis/PSA固相萃取净化，乙腊洗脱时，洗脱体积为6~8血。
[0015] 步骤(4)中气相色谱条件为:色谱柱:HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0.25mm， 膜厚0.25皿;进样口溫度250°C ;载气：He，不分流模式进样，进样量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分钟20°C的速度升至200°C，然后W每分钟2 °C的速度升至220°C，再W每分钟20°C的速度升至280°C，保持IOmin;传输线溫度:280°C。
[0016] 步骤(4)中质谱条件为:离子源溫度150°C;四极杆溫度150°C;电离模式:负化学电 离，即NCI模式，能量70eV;扫描方式：选择离子监测（SIM)模式，监测的离子为：361.1、 362.U362.9o
[0017] 步骤(4)中测定样液和基质标准工作溶液时，若样液中农药色谱峰保留时间与标 准溶液中相应农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均 出现，而且离子丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在运种农药;若 上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。
[0018] 本发明的有益效果在于：
[0019] 本发明利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰 的样品前处理方法，将此前处理方法结合GC-NCI-MS应用于粮谷、动物源性食品中氣挫菌酷 胺定性确证和定量检测，平均回收率为88.9%~104.7%，平均相对标准偏差(RSD)为4.2% ~7.5%，检出限低于1.09yg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。 能满足美国、欧盟、日本等国家对相应产品安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全 及对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【附图说明】
[0020] 图1为添加在空白猪肉基质中的氣挫菌酷胺的GC-NCI-MS选择离子色谱图。
[0021] 图2为不含氣挫菌酷胺的猪肉空白样品的GC-NCI-MS选择离子色谱图。
[0022] 图3为W不含氣挫菌酷胺的猪肉空白样品为基质配制的氣挫菌酷胺标准工作曲 线。
【具体实施方式】
[0023] 现W W下实施实例来说明本发明，但并不是限制本发明的范围。
[0024] 实施例中使用的仪器与试剂
[0025] T18 Basic均质器（IKA，Germany) ;CR21G虹离屯、机（日立，Japan) ;MS3基本型旋满 混合器（IKA，Germany) ;l\irboVap LV型样品自动浓缩仪（Caliper,USA);7890N气相色谱-5977C质谱仪(Agilent,USA) ;Cis/PSA固相萃取柱(6mL，500mg/500mg)购于天津博纳艾杰尔 科技有限公司。
[0026] 试剂
[0027]乙腊、丙酬、正己烧（HPLC级，Merke，Germany);乙酸（HPLC级，CNW，Germany);无水 硫酸儀、氯化钢和乙酸钢为分析纯，均购自国药集团化学试剂有限公司。
[00巧]标准物质：纯度99.5%，购自德国化.E虹enstorfer公司。
[0029] 实施例1:小麦中氣挫菌酷胺残留量的检测
[0030] (1)样品前处理
[0031] 提取 称取经充分混匀的5g小麦样品（研磨成面粉)于50mL离屯、管中，加入20mL水复苏30min 后，准确加入20mL含1 %乙酸的乙腊溶液，振荡提取20min，超声提取5min，加入3g无水硫酸 儀和2g乙酸钢，满旋Imin后，7000;r/min离屯、5min。离屯、后，取SmL乙腊提取液于40°C旋蒸或 氮气吹至近干，加入ImL乙腊满旋后，待净化。
[0032] 净化 用5mL乙腊预洗Ci