一种抗氧化草菇多糖的制备方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明属于农副广品精深加工的技术领域，特别涉及一种抗氧化草燕多糖的制备 方法。
【背景技术】
[0002] 草菇具有很好的保健价值，有补脾益气、清热解暑、提高免疫力、加速伤口愈合等 功效，它还具有降低胆固醇和抗癌等作用，是优良的食药兼用型的营养保健食品。
[0003]对草菇中的抗氧化活性成分已有一些报道。李乐等研究证明草菇的甲醇和水的粗 提物具有自由基清除和抑制大鼠红细胞溶血的作用。孙延芳等采用微波辅助提取对草菇的 多酚含量及抗氧化活性进行研究，结果表明草菇多酚均具有很强的抗氧化能力。Cheung等 采用3种不同方法测定了草菇的甲醇提取物和水提取物的抗氧化活性，发现水提取物中总 酚含量高于甲醇提取物，其抗氧化活性也高于甲醇提取物。赵俊霞等用不同有机溶剂对草 菇培养液及菌丝体中的代谢成分进行分离提取，代谢提取物均有较高的DPPH ?清除率，即 较高的抗氧化活性，其有效成分含有粗三萜和黄酮类物质。多糖是食用菌中重要的药理成 分之一。近年研究表明，多糖除了具有抗衰老、抗病毒、抗癌、免疫调节等功能作用外，还具 有抗氧化作用。草菇多糖抗氧化活性的研究目前还未见报道。
[0004] 微波辅助提取技术是近年来新发展起来的一种方法，与传统的提取方法如回流提 取、有机溶剂提取等方法比较，微波提取技术具有操作简便、快速高效、节能、省时等优点。
[0005]草菇是食用菌中最不易保鲜贮藏的菇类，采后的后熟作用非常强烈，且采收期的 气温较高，又不能在较低温度下贮藏，这些因素制约了新鲜草菇的流通和大规模生产。
[0006]随着草燕栽培技术的提高和产量的快速增加，加强开发出系列的深加工产品，改 变单一的产品结构，延伸产业链，满足不同的消费群体，扩大市场的需求。
【发明内容】
[0007] 发明目的：本发明的目的是提供了一种抗氧化草菇多糖的制备方法。
[0008]技术方案：本发明提供的一种抗氧化草菇多糖的制备方法，该方法包括草菇预处 理、粉碎、微波提取、离心或过滤、浓缩、醇沉分离、除盐、干燥得到抗氧化草菇多糖。
[0009] 该方法包括以下步骤：
[0010] 1)草菇预处理：择未自溶的草燕，洗净、去杂、切片，105°C灭活10-15min ;
[0011] 2)粉碎：将步骤1)中预处理草菇加入搅拌器，加入5-10倍草菇重量的水，充分匀 浆；
[0012] 3)微波法提取；
[0013] 4)离心或过滤：将步骤3)中物料降温至20-50°C，离心转速3000-4000r/min，时 间为5-10min，或过滤，取清液备用；
[0014] 5)浓缩：将步骤4)所述的清液进行浓缩，可采用超滤、常压或减压蒸发浓缩，使提 取液浓缩至原体积1/5-1/10,冷却至室温，有沉淀需进行离心，转速为3000-4000r/min，离 心时间5-10min，弃沉淀，得草菇多糖粗提浓缩液；
[0015] 6)醇沉分离：将步骤5)所述的在浓缩液中，缓缓加入95%乙醇至乙醇浓度达 30%，加入乙醇过程中应不断搅拌，静置沉淀6-24小时后，虹吸上清液至原体积1/5-1/10， 下部液体进行离心分离，转速为3500-4000r/min，离心时间10-15min，将离心后的上清液 中继续加入95%乙醇，至乙醇浓度达80%，静置过夜，离心，得两部分沉淀；
[0016] 7)除盐：将步骤6)所述的沉淀加少量水充分溶解，进行超滤或透析，分子截留量 为5-10kD，得截留液；
[0017] 8)干燥：将步骤6)所述的沉淀干燥，50-70°C烘箱烘干；或将步骤7)所述的截留 液冷冻干燥或50-60°C真空干燥箱烘干，干燥物粉碎，含水量低于4%，即得抗氧化草菇多 糖。
[0018] 所述步骤3)微波提取参数为：草菇匀浆中加入20-25倍草菇重量的水，在常温常 压下进行微波提取，微波功率为210-490?，微波提取总时间为12-18min，间歇1次，间歇时 间10-20min，将得到的物料备用。
[0019] 所述步骤5)中的减压浓缩，真空度为0. 07-0. 095MPa，温度为60-80°C ;常压蒸发 浓缩温度为90-100 °C。
[0020] 所述步骤5)与步骤7)所述的超滤，超滤膜分子截留量5kD，在25°C，入口压力2~ 5kg/m2,出入口压差不要超过I. 5kg/m2。
[0021] 有益效果：相比与现有技术，本发明具有以下优点：
[0022] 1)微波法提取醇沉草菇多糖工艺，多糖提取效率高，抗氧化活性强，易于操作，设 备投入少，工艺路线简单，适合工业化生产；
[0023] 2)通过抗氧化草菇多糖的提取，解决了草菇不易保鲜贮藏，延伸产业链，扩大了草 菇市场需求；
[0024] 3)本发明设计的微波提取草菇多糖抗氧化活性强、提取效率高。微波提取草菇多 糖提取时间控制在Ih内，大大缩短了提取时间。微波提取草菇多糖得率为15. 56%，略高 于热水提多糖15. 00%。微波提取草菇多糖对? OH和DPPH ?有较强的清除作用及还原能 力，均高于热水提多糖。在质量浓度0. 1~5mg/mL范围内，微波法提取草菇多糖对? 0H、 DPPH ?最大清除率分别为100%、76. 15%。微波提取草菇多糖具有较强的还原能力，反映出 其抗氧化能力较强；
[0025] 4)本发明设计的微波法提取草菇多糖优化工艺抗氧化活性强、提取率高。微波提 取参数为：草菇匀浆中加入20-25倍草菇重量的水，在常温常压下进行微波提取，微波功率 为210-350?，微波提取总时间为15-18min，间歇1次，间歇时间10-20min。草菇多糖提取 率为15. 01-15. 56%，在多糖浓度为2. 5mg/mL时，微波法提取草菇多糖对DPPH ?清除率为 56. 42-75. 67% ；
[0026] 5)本发明设计的乙醇分级沉淀分离草菇多糖工艺设备投入少，工艺路线简单，易 于操作，适合大规模化生产。采用乙醇分级沉淀分离热水提草菇多糖可以增强抗*〇H能力， 以及有较强DPPH ?清除活性。80 %分级醇沉草菇多糖对? OH清除活性高于未分级醇沉草 菇多糖，在多糖浓度为2. 5mg/mL时，对? OH清除率为71. 77-72. 26%。30 %分级醇沉草菇 多糖对DPPH ?清除活性较强，在多糖浓度为2. 5mg/mL时清除率为73. 36%。
【附图说明】
[0027] 图1本发明提取草菇多糖对?OH的清除活性比较；
[0028] 图2本发明提取草菇多糖对DPPH?的清除活性比较；
[0029] 图3本发明提取草菇多糖还原力的比较；
[0030] 图4醇沉草菇多糖抗? OH活性；
[0031] 图5醇沉草菇多糖抗DPPH ?活性；
[0032] 图6草菇多糖乙醇分级沉淀工艺路线图。
【具体实施方式】
[0033] 根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限 制权利要求书中所详细描述的本发明。
[0034] 实施例1
[0035] 1)预处理：选择未开伞的草菇，洗净、去杂、切片，105°C灭活lOmin。
[0036] 2)粉碎：将步骤1)中预处理草菇加入搅拌器，加入10倍草菇重量的水，充分匀 浆，不能有块。
[0037] 3)微波法提取：将步骤2)中草菇匀浆加入20倍草菇重量的水，在常温常压下进 行微波提取，微波功率为210w，微波提取总时间为18min，间歇1次，间歇时间lOmin，将得到 的物料备用。
[0038]4)离心：将步骤3)中物料降温至30°C，离心转速4000r/min，时间为lOmin，取清 液备用。
[0039] 5)浓缩：将步骤4)所述的过滤液进行浓缩，采用超滤浓缩，使提取液浓缩至原体 积1/10。超滤膜分子截留量51^)，在25°(：，入口压力2~51^/ 1112，出入口压差不要超过1.51^/ m2，得浓缩液。
[0040] 6)醇沉分离：将步骤5)所述的在浓缩液中，缓缓加入95%乙醇至乙醇浓度达 30%，加入乙醇过程中应不断搅拌，静置沉淀24小时后，虹吸上清液至原体积1/5,下部液 体进行离心分离，转速为4000r/min，离心时间lOmin，将离心后的上清液中继续加入95% 乙醇，至乙醇浓度达80 %，静置过夜，离心，得两部分沉淀。
[0041] 7)干燥：在步骤6)所述的沉淀干燥，60°C烘箱烘干，粉碎，含水量低于4%，即得抗 氧化草菇多糖。
[0042] 8)微波法提取草菇多糖对*0H和DPPH?有较强的清除作用及还原能力，均高于热 水提取法提取的草菇多糖。采用乙醇分级沉淀分离草菇多糖可以增强抗? OH能力，以及有 较强DPPH?清除活性。
[0043]表1在210w微波功率下不同时间对草菇多糖提取率的影响
[0044]
[0045] 实施例2
[0046] 1)预处理：选择未开伞的草菇，洗净、去杂、切片，105°C灭活15min。
[0047] 2)粉碎：将步骤1)中预处理草菇加入搅拌器，加入8倍草菇重量的水，充分匀浆， 不能有块。
[0048] 3)微波法提取：将步骤2)中草菇匀浆加入22倍草菇重量的水，在常温常压下进 行微波提取，微波功率为350w，微波提取总时间为15min，间歇1次，间歇时间15min，将得到 的物料备用。
[0049] 4)过滤：将步骤3)中物料降温至40°C，过滤，取滤液备用。
[0050] 5)浓缩：将步骤4)所述的过滤液进行浓缩，采用减压蒸发浓缩，真空度为 0. 09MPa，温度为70°C，使提取液浓缩至原体积1/8,进行离心去杂，转速为3000r/min，离心 时间lOmin，弃沉淀，得草菇多糖粗提浓缩液。
[0051] 6)醇沉分离：将步骤5)所述的在浓缩液中，缓缓加入95%乙醇至乙醇浓度达 30%，加入乙醇过程中应不断搅拌，静置沉淀20小时后，虹吸上清液至原体积1/8,下部液 体进行离心分离，转速为3500r/min，离心时间12min，将离心后的上清液中继续加入95% 乙醇，至乙醇浓度达80 %，静置过夜，离心，得两部分沉淀。
[0052] 7)除盐：将步骤6)所述的沉淀加少量水充分溶解，进行超滤，超滤膜分子截留量 5kD，在25°C，入口压力2~5kg/m 2,出入口压差不要超过I. 5kg/m2,得截留液。
[0053] 8)干燥：将步骤7)所述的截留液50°C真空干燥箱烘干。干燥物粉碎，含水量低于 4%，即得抗氧化草菇多糖。
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