析 W比较Steamchol组和DMSO对照组。
[0194] Steamchol对化iderm FT培养物中基因表达的作用表明，组中94个选择的基因中， 有2个基因 KRT 1(角蛋白1)和KRT 10(角蛋白10)展示出当与用DMSO处理的细胞相比多于两 倍的统计学上显著偏离(参见下表2)。未观察到ABCAl的mRNA水平的显著变化。如表2所示， Steamchol显著抑制角蛋白1和10的表达，角蛋白1和10是已知的角质形成细胞分化的标志 物。
[0195] 表2.用FABAC处理之后角蛋白1和10基因表达的变化倍数。
[0197] 在角质形成细胞有丝分裂活跃的表皮的基底层中，它们表达角蛋白5和14。当细胞 成为基底上层时，表达角蛋白1和10,同时关闭角蛋白5和14。随着细胞继续向外移动到颗粒 层，它们变得被含有多种分化蛋白化oricin、丝聚合蛋白原、内皮蛋白）的颗粒体充满。谷氨 酷胺转移酶，一种将角蛋白和其它蛋白质交联到不能渗透的细胞包膜中的酶，也在该层中 合成。最后，角质形成细胞死亡并且它们的死亡变平的鱗状形式构成角质层。
[0198] 对角质形成细胞分化的作用被认为是可逆的，并且从胆固醇消耗的恢复被认为发 生在刺激物被去除时。不希望受到任何理论或作用机制的约束，FABAC增强ABCAl蛋白的转 运活性，引起脂俊处胆固醇水平的消耗，从而减少角蛋白1和10的表达。
[0199] 本文第一次证实了脂肪酸-胆汁酸缀合物的活性类似于已知的被视黄酸诱导的效 应。运两种化合物在棘层表皮水平和表皮细胞外基质水平上影响分化标志物。尽管视黄酸 经由核受体的活化起作用，推测脂肪酸-胆汁酸缀合物在细胞膜的水平上引起组织结构的 变化，运导致类似于视黄酸的那些的级联。在两个不同、不相关的研究中，证实脂肪酸-胆汁 酸缀合物在人类表皮模型中激活ABCAl细胞转运子并且下调角蛋白1和10的表达。运两个活 性支持了角质形成细胞分化的减少，在表皮和真皮水平上引发补偿机制，并且最终导致组 织恢复活力W及可能更强的细胞外基质基础，运可能导致更年轻的皮肤外观的临床表现。
[0200] 已经证实影响表皮皮肤层处的细胞分化是抗老化活性的根本机制。但是，在许多 情况下，诸如在视黄酸的情况下，该活性伴随严重不良反应的"代价"一起发生，所述不良反 应诸如致崎性、皮肤刺激性和更高的对阳光损害的敏感性。运可能是由于该效应在核受体 水平上开始，并且从而是深远的并且恢复缓慢。本发明的FABAC的表明的作用机制提供了更 溫和但却有前景的生物化学途径，作为胆固醇消耗的结果其影响脂俊中脂质的组织结构。
[0201] 实施例4. FABAC对角质形成细胞分化的作用
[0202] 为了检测公开的FABAC对角质形成细胞的分化的作用，使用高度分化的全厚度体 外皮肤培养物模型化iderm FT(MatTek，MA)。用在DMSO中的S种不同浓度的Steamcho巧口在 DMSO中的S种不同浓度的Aramchol处理皮肤培养物，重复两次。测试的浓度之一是0.5% (5000iig/mL)，其在降低KRTl和KRTlO的基因表达中有效。使用两个未处理的皮肤培养物和 两个用单独媒介物(DMSO)处理的培养物作为阴性对照。使用视黄酸处理的两个皮肤培养物 作为阳性对照。
[0203] 组合物应用至每个测试培养物表面24小时后收集细胞。从部分细胞中提取蛋白质 并使用对角蛋白1、角蛋白l〇、SCDl和ABCA-I特异的第一抗体对所述蛋白质进行蛋白印迹和 ELISA分析。固定另一部分细胞并使用对角蛋白1、角蛋白10、SCD1和ABCA-I特异的第一抗体 进行免疫组织化学染色。
[0204] 角蛋白1和/或角蛋白10表达的下调指示角质形成细胞分化的降低。
[02化]实施例5. FABAC对角质形成细胞增殖和细胞外基质化CM)蛋白表达的作用
[0206] 为了检测公开的FABAC对角质形成细胞增殖和ECM蛋白表达的作用，使用高度分化 的全厚度体外皮肤培养物模型化idem FT(MatTek，MA)。
[0207] 用在DMSO中的S种不同浓度的Steamchol和S种不同浓度的Aramchol处理皮肤培 养物，重复两次。现聯的浓度之一是0.5% (5000iig/mL)，其在降低KRTl和KRTlO的基因表达 中有效。使用两个未处理的皮肤培养物和两个用单独媒介物(DMSO)处理的培养物作为阴性 对照。使用视黄酸处理的两个皮肤培养物作为阳性对照。
[0208] 组合物应用至每个测试培养物表面24小时后收集细胞。使用如上文实施例1中使 用的MTT测定，使用一些细胞用于测定细胞增殖。从部分细胞中提取蛋白质，并使用对弹性 蛋白、前胶原和基质金属蛋白酶I(MMP-I)特异的第一抗体对所述蛋白质进行ELISA分析。固 定另一部分细胞并使用对弹性蛋白、前胶原和基质金属蛋白酶I(MMP-I)特异的第一抗体进 行免疫组织化学染色。
[0209] 具体实施方案的W上描述将如此完全地掲示本发明的一般性质，W致其他人可通 过应用现有的知识，容易地为各种应用修改和/或调整此类具体实施方案而不需要过度实 验和不偏离一般概念，且因此，此类调整和修改应当并且预期被包含在公开的实施方案的 等价物的含义和范围内。应理解的是，本文采用的措辞或术语是为了描述而非限制的目的。 用于进行各种公开的功能的手段、材料和步骤可采取多种替代形式而不偏离本发明。
【主权项】
1. 一种用于预防或治疗与老化相关的皮肤状况的局部组合物，所述组合物包含脂肪酸 胆汁酸缀合物(FABAC)作为活性成分以及至少一种皮肤病学可接受的稀释剂、载体或赋形 剂，其中所述FABAC具有式I: ff-X-G(I) 其中G代表胆汁酸或胆汁盐基团;W代表具有6-22个碳原子的一个或两个脂肪酸基团； 并且X代表键合成员，所述键合成员包含杂原子或直接的C-C或C = C键。2. 如权利要求1所述的组合物，其中所述FABAC包含两个脂肪酸基团，其中在每次出现 时W独立地为具有6-22个碳原子的脂肪酸基团；并且X独立地为键合成员，所述键合成员包 含杂原子或直接的C-C或C = C键。3. 如权利要求1所述的组合物，其中所述键合成员选自由NH、P、S、0或直接的C-C或C = C 键组成的组。4. 如权利要求3所述的组合物，其中所述键合成员是NH。5. 如权利要求1所述的组合物，其中所述一个或两个脂肪酸基团独立地选自由以下组 成的组:硬脂酸、山嵛酸、二十烷醇酸、棕榈酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、油酸。6. 如权利要求5所述的组合物，其中所述一个或两个脂肪酸是硬脂酸。7. 如权利要求1所述的组合物，其中所述胆汁酸选自由以下组成的组:胆酸、熊脱氧胆 酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、石胆酸以及其衍生物。8. 如权利要求7所述的组合物，其中所述胆汁酸是胆酸。9. 如权利要求1所述的组合物，其中所述FABAC选自由以下组成的组： 3-β_硬脂酰-氨基，7a，12α-二羟基-5-β-胆烷-24-酸、3-β二十烷醇氨基，7α，12α-二羟 基-5-β-胆烷-24-酸、及其组合。10. 如权利要求1所述的组合物，其中所述FABAC是3-β-硬脂酰-氨基，7α，12α-二羟基-5-β-胆烷-24-酸。11. 如权利要求1所述的组合物，其中所述与老化相关的皮肤状况与时序老化、光老化、 皮肤萎缩或其组合的至少一种相关。12. 如权利要求1所述的组合物，其中所述皮肤状况选自由以下组成的组:细纹、皱纹、 变色、不均匀色素沉着、下垂、毛孔粗大、皮肤粗糙、皮肤干燥和妊娠纹、肤色不均、疵点、皮 肤变厚或变薄及其组合。13. 如权利要求12所述的组合物，其中所述皮肤状况为起皱纹。14. 如权利要求12所述的组合物，其中所述皮肤状况为细纹。15. -种预防或治疗与老化相关的皮肤状况的方法，所述方法包括向需要其的受试者 施用局部组合物，所述局部组合物包含脂肪酸胆汁酸缀合物(FABAC)作为活性成分以及皮 肤病学可接受的稀释剂或载体，其中所述FABAC具有式I: ff-X-G(I) 其中G代表胆汁酸或胆汁盐基团;W代表具有6-22个碳原子的一个或两个脂肪酸基团； 并且X代表键合成员，所述键合成员包含杂原子或直接的C-C或C = C键。16. 如权利要求15所述的方法，其中所述FABAC包含两个脂肪酸基团，其中在每次出现 时W独立地为具有6-22个碳原子的脂肪酸基团；并且X独立地为键合成员，所述键合成员包 含杂原子或直接的C-C或C = C键。17. 如权利要求15所述的方法，其中所述键合成员选自由NH、P、S、0或直接的C-C或C = C 键组成的组。18. 如权利要求17所述的方法，其中所述键合成员是NH。19. 如权利要求15所述的方法，其中所述一个或两个脂肪酸基团独立地选自由以下组 成的组:硬脂酸、山嵛酸、二十烷醇酸、棕榈酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、油酸。20. 如权利要求19所述的方法，其中所述一个或两个脂肪酸是硬脂酸。21. 如权利要求15所述的方法，其中所述胆汁酸选自由以下组成的组:胆酸、熊脱氧胆 酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、石胆酸以及其衍生物。22. 如权利要求21所述的方法，其中所述胆汁酸是胆酸。23. 如权利要求15所述的方法，其中所述FABAC选自由以下组成的组： 3-β_硬脂酰-氨基，7α，12α-二羟基-5-β-胆烷-24-酸、3-β-二十烷醇氨基，7α，12α-二羟 基-5-β-胆烷-24-酸、及其组合。24. 如权利要求23所述的方法，其中所述FABAC是3-β-硬脂酰-氨基，7α，12α-二羟基-5-胆烧_24_酸。25. 如权利要求15所述的方法，其中所述与老化相关的皮肤状况与时序老化、光老化、 皮肤萎缩或其组合的至少一种相关。26. 如权利要求15所述的方法，其中所述皮肤状况选自由以下组成的组:细纹、皱纹、变 色、不均匀色素沉着、下垂、毛孔粗大、皮肤粗糙、皮肤干燥和妊娠纹、肤色不均、疵点、皮肤 变厚或变薄及其组合。27. 如权利要求26所述的方法，其中所述皮肤状况是起皱纹。28. 如权利要求26所述的方法，其中所述皮肤状况是细纹。29. 如权利要求15所述的方法，其中所述组合物局部施用至需要其的受试者。30. -种局部组合物，所述组合物包含脂肪酸胆汁酸缀合物(FABAC)作为活性成分以及 皮肤病学可接受的稀释剂、载体或赋形剂，其中所述FABAC具有式I: ff-X-G(I) 其中G代表胆汁酸或胆汁盐基团;W代表具有6-22个碳原子的一个或两个脂肪酸基团； 并且X代表键合成员，所述键合成员包含杂原子或直接的C-C或C = C键。31. 如权利要求30所述的局部组合物，其中所述FABAC包含两个脂肪酸基团，其中在每 次出现时W独立地为具有6-22个碳原子的脂肪酸基团；并且X独立地为键合成员，所述键合 成员包含杂原子或直接的C-C或C = C键。32. 如权利要求30所述的局部组合物，其中所述键合成员选自由NH、P、S、0或直接的C-C 或c=c键组成的组。33. 如权利要求32所述的局部组合物，其中所述键合成员是NH。34. 如权利要求30所述的局部组合物，其中所述一个或两个脂肪酸基团独立地选自由 以下组成的组:硬脂酸、山嵛酸、二十烷醇酸、棕榈酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、油酸。35. 如权利要求30所述的局部组合物，其中所述胆汁酸选自由以下组成的组：胆酸、熊 脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、石胆酸以及其衍生物。36. 如权利要求30所述的局部组合物，其中所述FABAC是3-β-硬脂酰-氨基，7α，12α-二 羟基-5-β-胆烷-24-酸。37.如权利要求30所述的局部组合物，所述局部组合物以选自由以下组成的组的形式 配制:水性溶液、霜剂、洗液、油包水乳液或水包油乳液、多重乳液、硅酮乳液、微米乳液、纳 米乳液、泡沫、凝胶和具有共溶剂的水性溶液。
【专利摘要】本发明提供了包含脂肪酸胆汁酸缀合物(FABAC)的局部组合物。本发明还提供了使用公开的组合物用于预防、减弱或治疗皮肤老化和与其相关的症状的方法。
【IPC分类】A61Q19/08, C07J9/00, A61K8/63, C07C53/42, A61K31/575, A61K8/36, A61P17/00
【公开号】CN105611910
【申请号】CN201480055618
【发明人】纳瓦·达扬, 艾伦·巴哈拉夫
【申请人】盖尔德姆疗法有限公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2014年8月7日
【公告号】CA2920456A1, EP3030221A1, US20160175223, WO2015019358A1