一种提取辛弗林的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种从橘皮中提取辛弗林的方法。
【背景技术】
[0002] 柑橘属在植物分类学上为芸香科（Rutaceue)柑橘属（Citrus)植物。我国柑橘种 质资源丰富，是世界许多柑橘种类的原产地，目前，中国柑橘品种仍然以宽皮柑橘为主，约 占总种植面积的55 %，甜橙占30 %，柚子占10 %，其它柑橘类占5 %。
[0003] 目前，对柑橘加工废弃物的研究越来越受到人们的重视，对柑橘皮渣利用的主要 途径之一就是围绕其所含成分的提取而展开的，如从中提取香精油、色素、果胶、类黄酮、膳 食纤维等。柑橘果渣的另一个主要利用途径就是利用微生物发酵，如生产果醋、乳酸饮料、 高蛋白饲料和栽培食用菌。
[0004] 辛弗林（syn印hrine)分子式为C9H13N02,分子量为167. 20,结构如下式所示，辛 弗林属于生物碱中的麻黄碱类，分子结构中同时含有酚羟基和氨基，因此辛弗林具有两性 性质，与酸碱均能结合成盐。游离的辛弗林易溶于有机溶剂，难溶于水；其酸式盐和碱式盐 则易溶于水，难溶于有机溶剂。
[0005]
[0006] 辛弗林已收载于北欧三国药典和德国药典。目前认为，其为肾上腺素 a-受体兴 奋剂。辛弗林有收缩血管、产生升高血压的作用。辛弗林有较强的扩张气管和支气管的作 用。麻醉猫静脉注射可完全对抗组织胺所引起的支气管收缩，对豚鼠离体气管亦有同样作 用。辛弗林临床用于治疗支气管哮喘及手术和麻醉时低血压、虚脱及休克、体位性低血压 等。辛弗林是21世纪天然兴奋剂，无任何副作用和阳性反应，广泛用于医药、食品、饮料等 保健行业，随着化学合成药物的禁用，辛弗林的需求量和价值将会倍增。
[0007] 因此，本领域的技术人员致力于开发一种低成本、高效率的辛弗林制备工艺。
【发明内容】
[0008] 有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种从柑橘皮中 提取辛弗林的方法。
[0009] 为实现上述目的，本发明提供了一种从柑橘皮中提取辛弗林的方法，该方法包括 步骤：
[0010] ⑴制备辛弗林粗提物
[0011] 取柑橘皮渣，用乙醇水溶液提取得到辛弗林粗提物；
[0012] ⑵初步纯化
[0013] 将辛弗林粗提物用乙酸乙酯萃取后，使用HP20树脂进行柱层析；
[0014] ⑶精制
[0015] 将步骤（2)得到的初步纯化的辛弗林用XAD18树脂进行柱层析，并通过HPLC检 测，将辛弗林纯度大于95%的洗脱液混合，冷冻干燥得白色粉末状物质即为辛弗林。
[0016] 优选地，步骤（2)中使用HP20树脂进行柱层析过程中，上柱液pH为2.5-4.5。
[0017] 优选地，步骤（3)中使用XAD18树脂进行柱层析过程中，上柱液pH为6.0-8.0。
[0018] 优选地，步骤（2)中调节辛弗林粗提物ρΗ2· 5-4. 5后再用乙酸乙酯萃取。
[0019] 优选地，所述步骤（1)中，取柑橘皮渣，用60-95 % (v/v)的乙醇水溶液在 50°C -70°C下浸泡提取l_2h后，过滤取上清液，真空旋蒸去除乙醇，得到辛弗林粗提物。
[0020] 优选地，所述步骤（2)中，调节辛弗林粗提物的pH至2. 5-4. 5,乙酸乙酯萃取后蒸 干除去乙酸乙酯，再用含10%的乙醇水溶液溶解，并用盐酸将其pH调整到2. 5-4. 5,上大孔 吸附树脂HP20层析柱，上柱后先用10% -20%的乙醇水溶液洗脱除杂，再用50-70%的乙醇 水溶液将辛弗林集中洗下。
[0021] 优选地，所述步骤（3)中，将步骤（2)所得辛弗林洗脱液旋蒸去除乙醇，用盐酸调 节pH至2. 5-4. 5,乙酸乙酯萃取后旋蒸除去乙酸乙酯；用pH6-8的水溶解，并用氢氧化钠调 节pH至6-8后上XAD18层析柱，上柱后先用水洗脱除杂，再用5-20%的乙醇水溶液将辛弗 林洗脱下来，分步收集洗脱液，并通过HPLC检测，将辛弗林纯度大于95%的洗脱液混合，冷 冻干燥得白色粉末状物质即为辛弗林。
[0022] 技术效果
[0023] 本发明的从柑橘皮中提取辛弗林的方法，合理充分地利用了柑橘加工产业的废弃 物，并且能够获得HPLC纯度大于95%的辛弗林，并且制备过程中辛弗林回收率在65 %以 上。
【具体实施方式】
[0024] 实施例1
[0025] 取1kg柑橘皮渣，水洗后滤干，用3L 80% (v/v)乙醇在60°C下浸泡提取lh后，过 滤取上清液，重复提取一次，合并两次上清液，在30-35°C下真空旋蒸至无醇味儿，得到粗提 物浓缩液。
[0026] 用盐酸调节上述浓缩液的pH至3,过滤后用粗提物浓缩液的1/2体积的乙酸乙酯 萃取两次，萃取后向乙酸乙酯相中加入pH为3的蒸馏水，振荡混合后取酯相在30°C下旋蒸 除去乙酸乙酯得辛弗林粗品；再用含10%的乙醇水溶液溶解辛弗林粗品，并用盐酸将其pH 调整到3。
[0027] 将辛弗林粗品的溶液上大孔吸附树脂ΗΡ20(Φ80Χ350πιπι)层析柱，上柱后先用 3BV含20%的乙醇水溶液洗脱除杂，再用3BV 60%的乙醇水溶液将辛弗林集中洗下，分步 收集洗脱液，并通过HPLC检测，将辛弗林纯度大于70 %的洗脱液混合，ΗΡ20树脂柱提取收 率为82. 6%。
[0028] 将上述辛弗林混合液在30_35°C下真空旋蒸至无醇味儿，用盐酸调节上述混 合液的pH至3,过滤后用1/2体积的乙酸乙酯萃取两次，取酯相在30°C下旋蒸除去乙 酸乙酯；用pH6. 5的水溶液溶解辛弗林粗品，并用氢氧化钠将其pH调整到6. 5后上 XAD18(〇80X350mm)层析柱，上柱后先用4BV水洗脱除杂，再用10%的乙醇水溶液将辛弗 林洗脱下来，分步收集洗脱液，并通过HPLC检测，将辛弗林纯度大于95 %的洗脱液混合， XAD18树脂柱提取收率为90. 6%，冷冻干燥得白色粉末状物质即为辛弗林。
[0029] 实施例2
[0030] 取lkg柑橘皮渔，水洗后滤干，用2L 95% (v/v)乙醇在55°C下浸泡提取2h后，过 滤取上清液，重复提取一次，合并两次上清液，在30_35°C下真空旋蒸至无醇味儿，得到粗提 物浓缩液。
[0031] 用盐酸调节上述浓缩液的pH至4,过滤后用粗提物浓缩液的1/2体积的乙酸乙酯 萃取两次，萃取后向乙酸乙酯相中加入pH为4的蒸馏水，振荡混合后取酯相在30°C下旋蒸 除去乙酸乙酯得辛弗林粗品；再用含10%的乙醇水溶液溶解辛弗林粗品，并用盐酸将其pH 调整到4。
[0032] 将辛弗林粗品的溶液上大孔吸附树脂ΗΡ20(Φ80Χ350πιπι)层析柱，上柱后先用 3BV含15%的乙醇水溶液洗脱除杂，再用3BV 50%的乙醇水溶液将辛弗林集中洗下，分步 收集洗脱液，并通过HPLC检测，将辛弗林纯度大于70%的洗脱液混合，ΗΡ20树脂柱提取收 率为80. 2%。
[0033] 将上述辛弗林