单糖单元为d-甘露糖的皂苷及其制备方法和在制药中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域。涉及单糖单元为D-甘露糖的皂巧及其制备方法和在 制药中的用途，具体涉及单糖单元为D-甘露糖的齐域果酸皂巧及白枠脂酸皂巧及其制备 方法和在制备抗流感病毒药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 流感病毒属于正黏液病毒科（化thomyxoviridae)，是一种球形或丝状、有包膜的 单股负链RNA病毒，基因组分为8个节段，送一特点使其在复制过程中极易发生基因重组， 导致新病毒的出现。根据流感病毒核蛋白（N巧和基质蛋白（Ml)抗原性的不同，可将其 分为甲（A)、己度）和丙（C)型。甲型常W流行的形式出现，可在禽类和哺乳类宿主间传 播，较易发生突变，具有强烈的传染性和致病性，是对人类威胁最大的亚型；己型常造成局 部爆发，可感染人类和海豹、猪等；丙型则多散发，是对人类危害较小的非临床病原体。甲 型流感病毒外膜上镶嵌着3种重要的膜蛋白，分别为血凝素化emagglutinin，HA)、神经氨 酸酶（neuraminidase, NA)和基质蛋白（M2)。依据HA和NA抗原性特性的不同，甲型流感 病毒可进一步被分为16个Η〇Π -Η16)亚型和9个N(N1-N2)亚型，经组合后有100多种亚 型的病毒株。甲型流感病毒还可W发生变异，进而感染其它物种（包括人类）。H5N1高致 病流感病毒即是如此，1997年在中国香港首次证实了册N1高致病流感病毒感染人类的病 例，说明该病毒已具备W人为宿主的跨种属传播的能力。WK)的数据显示，2003-2013年我 国发生45例册N1禽流感，四季均有发生，W 11月到次年2月为主，5月也是一个发病高 峰(http://WWW, who, int/influenza/human_animal_interface/Influenza_Summary_IRA_ ΗΑ_?η?Θ^·3ΕΘ_13Μ3Γ?3. )。2013年在中国又出现了 H7N9流感病毒，截止到2013年6月2 日，已经确诊132人，死亡38人，康复77人。死亡率达28. 8%，目前为止还没有有效的疫 苗，因此开发新型、高效、低毒、高特异性和用药方便的抗流感病毒药物迫在眉睫。
[000引 目前，临床上针对甲型流感病毒的药物主要有两个祀点；M2离子通道抑制剂和 神经氨酸酶抑制剂。前者包括有Amantadine和化mantadine,后者包括Oseltamivir 和 Zanamivir 等（J. Clin. Virol. 30,（2004): 115-133)。但由于流感病毒的高变异性， 目前已经对所有M2离子通道抑制剂产生耐药性（自2007年起，美国FDA已经禁止送类 药物用作病毒性流感治疗药物）；因而神经氨酸酶抑制剂几乎是唯一一类临床用药，但 自2006年起，在泰国和越南出现了对该类药物耐药的册N1高致病流感病毒株（Nippon Rinsho. 64,（2006) :1845-1852 ;Antiviral Res. 73 (2007) :228-231) 0 同时，还是由于流感 病毒的高变异性，目前尚无一劳永逸的针对流感病毒的疫苗。
[0004] 血凝素蛋白（HA)是流感病毒表面的糖蛋白，由HA1和HA2两个亚基组成。其中HA1 亚基与祀细胞膜上的唾液酸受体结合，介导病毒进入细胞质，并被包裹在包体内；HA2为跨 膜亚基，介导病毒膜与包体内膜的融合，是病毒基因进入宿主细胞并进行复制的关键分子。 因此，若能在送个环节上阻断流感病毒的入侵，则可W有效地进行预防和治疗。本发明即针 对此环节，在前期发现的结构复杂的墓葫皂巧和熊果酸皂巧的基础上，进行了深入的构效 关系研究和结构改造，发现了两个结构简单的齐域果酸和白枠脂酸皂巧有抑制高致病流感 病毒册N1感染宿主细胞的作用。
【发明内容】
[0005] 本发明目的在于提供新的单糖单元为D-甘露糖的皂巧及其制备方法和在制药中 的用途，具体涉及单糖单元为D-甘露糖的齐域果酸皂巧和白枠脂酸皂巧及其制备方法和 在制备抗流感病毒药物中的用途。
[0006] 本发明W齐域果酸和白枠脂酸作为原料，合成出具有抑制高致病流感病毒H5N1 感染宿主细胞的单糖单元为D-甘露糖的皂巧，其包括齐域果酸皂巧和白枠脂酸皂巧。
[0007] 本发明所述的皂巧，其特征在于，所述皂巧的单糖单元为D-甘露糖，包括如结构 通式（I)和（II)所示的齐域果酸皂巧和白枠脂酸皂巧，其中，
[0008] Ri为C1-C18烷氧基；单糖通过α -糖巧键与齐域果酸和白枠脂酸的C-3链接；
[0009]
〇
[0010] 本发明所述的皂巧类化合物W齐域果酸和白枠脂酸作为原料，按式（I)反应路 线，通过下述步骤制备：
[0011]
[001引 （a)齐域果酸或白枠脂酸与贿甲焼或其他醇反应，在C-28引入醋基；
[001引 化）分别将齐域果酸醋和白枠脂酸醋的3目-OH与糖基供体反应引入α-甘露糖单 元；
[0014] (C)在邸3〇化/邸3地条件下脱除糖单元上的醜基保护基分别得到3目-0- α -甘露 糖基齐域果酸醋和3目-0- α -D-甘露糖基白枠脂酸醋。
[0015] 本发明中，D-甘露糖基供体优选己醜基、苯甲醜基、叔戊醜基为居基保护基，甘露 糖C-1活化基团优选Η氯己醜亚胺醋、己硫巧、苯硫巧、对-甲苯硫巧；
[0016] 本发明中，构建α -D-甘露糖巧键的路易斯酸催化剂优选Cs-Cg的因代醜胺、Ci-Ce 的氣代姪基礙酸、C2-Cs的娃基氣代姪基礙酸醋、Ci-Ce的氣代姪基礙酸银、Η氣化测-己離 络合物或Η氣化测-己離混合物；
[0017] 本发明中，糖巧化反应中的有机溶剂优选C1-C4的氯代焼姪、甲苯或己離；
[001引本发明中，浑灭剂优选Η甲胺、Η己胺或硫代硫酸钢；
[0019] 本发明中，分子筛优选3 Α-5 A型娃铅酸盐分子筛；
[0020] 本发明中，柱层析纯化中洗脱用的溶剂优选石油離、二氯甲焼、己酸己醋、Η氯甲 焼、甲醇、正己焼或环己焼中一种或多种的混合物。
[0021] 本发明中，脱保护基反应中极性溶剂优选四氨巧喃、甲醇、己醇、二氯甲焼、水中的 一种或多种的混合物；
[0022] 本发明中，重结晶纯化中的溶剂优选Η氯甲焼、C1-C4的烷基醇、己酸己醋、丙丽、正 己焼、石油離、环己焼、二氯甲焼、水中一种或多种的混合物。
[0023] 本发明进行了药理实验，结果表明，所述的皂巧类化合物对册Ν1高致病流感病毒 的侵入宿主细胞过程有明显的抑制作用，可进一步用于制备预防或治疗流感病毒的药物， W及制备与其它抗病毒药的联合用药W及包含它的药物组合物。
【具体实施方式】
[0024] 下面用实施例进一步说明本申请，但送并不意味着对本发明的限制。本发明采用 的合成原料齐域果酸和白枠脂酸为市售商品。
[00巧]实施例1 ;制备齐域果酸-28-甲基醋
[0026]
[0027] 将齐域果酸（456mg，1. Ommol)溶于5血DMF中，加入碳酸钟（414mg，3. Ommol) 和贿甲焼（180 μ L 3. Ommol)，5(TC条件下反应7h，TLC检测原料无剩余，减压浓缩除去 大部分DMF，己酸己醋（150血）稀释，依次用水（2X70血)、饱和碳酸氨钢（2X70血)、饱 和氯化钢（2X70mL)洗涂，收取有机层用无水硫酸钢干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析得到齐 域果酸-28-甲基醋白色固体（425mg, 90 % )。iHNMR 巧OOMHz, CDCI3) δ 5. 29 (t, 1H, J = 3. 5Hz)，3. 63 (s, 3H)，3. 22 (dd, J = 11. 5, 4. 4Hz, IH)，2. 86 (dd, J = 13. 8, 4. 3Hz, IH)，1. 25-1 .73 (m, 20H)，1. 15-1. 22 (m, 2H)，1. 14 (s, 3H)，1. 04-1. 10 (m, IH)，0. 99 (s, 3H)，0. 96-1. 01 (m, IH)，0. 93 (s, 3H)，0. 91 (s, 3H)，0. 90 (s, 3H)，0. 79 (s, 3H)，0. 73 (s, 3H)。
[002引实施例2 ;制备齐域果酸-28-甲基醋-3目-0-化3, 4, 6-四-0-苯甲醜 基-a-D-甘露糖巧）
[0029]
[0030] 将齐域果酸-28-甲基醋（235mg，0. 5mmol)和苯甲醜基保护的甘露糖Η氯亚胺醋 (445mg, 0. 6mmol)溶于二氯甲焼巧0血）中，再加入4Α.分子筛，成保护下室温揽拌30min， 将反应温度降至〇°C后，滴加 TMSOTf (17μ L 0.1 mmol)反应30min，然后自然升至室温反 应化。TLC检测反应进程，反应结束后加入4滴Η己胺终止反应，滤掉分子筛，将滤液浓 缩，经硅胶柱层析（ΡΕ:ΕΑ = 15 ;1)得齐域果酸-28-甲基醋-3目-0-(2,3, 4,6-四-0-苯 甲醜基-α -D-甘露糖巧）白色固体巧32. 8mg, 90 % )。古 NMR (CDCI3, 400MHz