一种评估基因对人体高密度脂蛋白影响的检测试剂盒和方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及基因检测，具体涉及人体高密度脂蛋白基因检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 高密度脂蛋白为血清蛋白之一。缩写为皿L。亦称为al脂蛋白。比较富含磯脂 质，在血清中的含量约为300mg/dl。由于可输出胆固醇促进胆固醇的代谢，所W现在作为动 脉硬化预防因子而受到重视。高密度脂蛋白运载周围组织中的胆固醇，再转化为胆汁酸或 直接通过胆汁从肠道排出，动脉造影证明高密度脂蛋白胆固醇含量与动脉管腔狭窄程度呈 显著的负相关。所W高密度脂蛋白是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，是冠必病的保护 因子，俗称"血管清道夫"。
[0003] 当血液中皿L含量高时，血脂及血垢的清运速度大于沉积速度，不但不会有新的 血脂沉积，连早已沉积的脂质斑块也会被逐渐清除，血管越来越干净，血流畅通无阻，大量 的皿L进入血管内膜及内皮细胞，修复内膜破损，恢复血管弹性，必脑血管病变几率就比较 低；当皿L含量低时，血脂及血垢的清运速度小于沉积速度，血脂增高，沉积加快，硬化逐渐 加重，病变必然发生。
[0004] 世界卫生组织研究证实，每100毫升血液中的皿L升高1毫克，可使由动脉粥样硬 化引起的必脑血管疾病的发病率和死亡率降低3-4%，世界卫生组织（WHO)专家组宣称；对 于必脑血管病，广为接受而又最少争议最重要的保护因素是体内高密度脂蛋白（皿L)含量 越局越好！ 人体内皿L水平的高低除了与日常的生活习惯有关W外，和自身的基因也密切相关。 由于皿L本身就是一种基因编码的产物蛋白质，体内基因间的相互调节和表达程度的不同 也在根本上决定了皿L水平的高低。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明提供了一种高密度脂蛋白基因检测试剂盒，该试剂盒对受测者 的相关基因进行检测，分析得到其体内皿L表达水平的遗传因素，且PCR扩增反应在同一台 PCR仪上同步进行并具备检测的高效性、特异性。
[0006] -种高密度脂蛋白基因检测试剂盒，包括盒体及盒体内单独存放的试剂，存放的 试剂包括： (1)针对4个基因 SNP多态位点的PCR反应引物组：
(3)琼脂糖凝胶电泳分析试剂。
[0007] 本发明提供的高密度脂蛋白基因检测试剂盒的有益效果是；通过PCR引物的设计 使多个PCR扩增反应在同一台PCR仪上同步进行，对受测者的相关基因进行检测，并实现检 测的高效性、特异性，分析得到其高密度脂蛋白的遗传因素，评估相关的风险因素，从而为 受测者获得一个合适的健康方案，采取相应的策略避免对其无效甚至是有害的方法。
【附图说明】
[0008] 图1是反应产物琼脂糖凝胶电泳图。
【具体实施方式】
[0009] 高密度脂蛋白基因检测试剂盒，包括盒体及盒体内单独存放的试剂，存放的试剂 包括： (1)针对4个基因 SNP多态位点的PCR反应引物组：
(3)琼脂糖凝胶电泳分析试剂。
[0010] 下面将结合实施例对本发明提供的方法予W进一步的说明。
[0011] 本实施例对测试者采用高密度脂蛋白基因检测试剂盒同时检测4个基因的SNP 多态位点，并根据基因分型结果，分析得到其高密度脂蛋白的遗传因素，评估相关的风险因 素，从而为受测者获得一个合适的健康方案，采取相应的策略避免对其无效甚至是有害的 方法。
[0012] 使用到的高密度脂蛋白基因检测试剂盒内试剂由W下组成： (1)针对4个基因 SNP多态位点的PCR反应引物组：
(2)PCR扩增试剂；lOXPCR缓冲液，该PCR缓冲液为lOOmM Tris-肥1 p册.3,500mM KCl，15mM MgC12 ;dNTPs混合物，该dNTPs混合物为Η磯酸鸟嘿岭脱氧核巧酸dGTP，Η磯 酸腺嘿岭脱氧核巧酸dATP，Η磯酸胸腺嚼巧脱氧核巧酸dTTP，Η磯酸胞嚼巧脱氧核巧酸 dCTP四种核巧酸，各组分浓度为2. 5mM ;5υ/μ 1热启动Taq酶。
[001引（3)琼脂糖凝胶电泳分析试剂谅脂糖、TAE缓冲液、DNA分子量标准、Goldview 染色液和DM上样缓冲液，该缓冲液W漠酪藍为指示剂稀释至IX后使用。
[0014] 使用上述高密度脂蛋白基因检测试剂盒按如下步骤进行检测： (1)提取样本基因组DNA。
[0015] 采集该测试者唾液，向l-2ml唾液样品中加入500ul提取缓冲溶液，该DNA提取 缓冲溶液溶剂为50mM的化is-肥1 pH7. 4、0. 5mM的邸TA和50mM的化C1，反复吹打混匀 后，8000Xg离必5分钟，弃去上清，此步骤重复一次；得到的沉淀中加入500ul裂解液， 该裂解液溶剂为 50mM Tris-肥 1 pH7. 4,50mM Tris-肥 1 pH7. 4，150mM 化Cl，lmM 邸TA，1% Triton χ-100，1% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS,蛋白酶 K20mg/mL,彻底悬浮沉淀并 充分混匀后，室温放置30分钟，期间来回颠倒离必管数次；得到的混合液中，加入浓度为 lOmg/mLRNA酶的水溶液10 μ L，37°C下静置lOmin ;得到的上清液中，加入等体积苯酪-氯 仿混合溶液，苯酪和氯仿体积比为1 : 1，充分混匀，混合液4°C，12000Xg离必5分钟，上清 液移入干净离必管内；加入等体积苯氛-氯仿-异戊醇混合溶液，苯酪、氯仿和异戊醇体积 比为25 : 24 : 1，充分混匀后，4°C，12000Xg离必5分钟，上清液移入干净离必管内；加 入等体积氯仿-异戊醇混合溶液，充分混匀后，4°C，12000Xg离必5分钟，上清液移入干 净离必管内；加入0. 6倍体积的冰浴异丙醇溶液及0. 1倍的3mol/L醋酸钢溶液，-2(TC静 置60分钟后，4°C，12000 X g离必10分钟，弃上清液；得到的沉淀物中加入0. 5血70 %己醇 清洗沉淀物，4°C，12000 X g离必5分钟，弃上清液，此步骤重复一次；得到的沉淀物自然风 干，加入20 μ L无菌超纯水回溶，电泳检测，-2(TC保存。
[001 引（2)PCR 扩增 本实施例同时检测rs2271293、rsl7145738、rs3764261和rs964184。每个SNP的检测 需要一对上下游引物、两条多态引物共4条PCR引物，共需要16条引物。每个SNP的检测 需要做两管PCR扩增，为防止出现假阳性之类的反应，衡量