所述含水混合液中的羟基磷灰石进入牙本质小管的能力。
[0094] 在某些实施方式中，含水混合液的pH值为约7到约14。优选地，含水混合液的pH 值在口腔生理可接受的范围内，即，当施用于口腔内时，不引起口腔内组织（例如牙齿、肌 肉、粘膜等）过度的刺激或伤害。在某些实施方式中，含水混合液的PH值为约7到约10， 约7到约9,或约7到约8。含水混合液的pH值可以通过本领域公知的方式进行调节。例 如，可以使用适当的缓冲液配制所述包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混 合液，和/或用适当的酸或碱调节PH至所需的范围。
[0095] 在某些实施方式中，所述混合液进一步包含金属离子。在某些实施方式中，所述金 属离子能够与多羧基化合物中的羧基相互作用，例如与羧基形成金属盐或络合物等。示例 的金属离子例如，铜离子、锌离子、银离子或其任意组合。在某些实施方式中，金属离子对口 腔健康有一定益处。例如，铜离子具有预防牙菌斑、美白的作用；锌离子能抑制牙菌斑和牙 结石的形成，从而阻止烟斑、茶斑等各种色素在牙齿表面的粘附和沉积，达到去渍效果；银 离子具有超强的抗菌能力和广谱的抗菌性能。
[0096] 本申请所述的包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液可以通过 适当的方法来制备。在某些实施方式中，所述方法包括将多羧基化合物与分散的羟基磷灰 石、可溶性钙在水溶液中混合。
[0097] "分散的羟基磷灰石"是指，分散在溶剂中的羟基磷灰石。优选地，羟基磷灰石分散 在水中或水溶液中，水溶液可以含有必要的溶质，例如但不限于调节pH的缓冲盐等。分散 的羟基磷灰石可以具有适当的分散密度，以便于与多羧基化合物更好地形成复合物。
[0098] 可以使用任意适当的混合方式将多羧基化合物、分散的羟基磷灰石、可溶性钙进 行混合。在某些实施方式中，可以在分散的羟基磷灰石中加入多羧基化合物、可溶性钙并搅 拌均匀。
[0099] 在某些实施方式中，所述多羧基化合物选自下组：柠檬酸根化合物，例如柠檬酸 钾、柠檬酸钠等，聚天冬氨酸盐，例如聚天冬氨酸钠、聚天冬氨酸钾等，亚氨基二琥珀酸盐， 例如亚氨基二琥珀酸钾、亚氨基二琥珀酸钠等，2-膦酸基丁烷-1，2，4-三羧酸盐，例如2-膦 酸基丁烷-1，2,4-三羧酸四钠等，聚丙烯酸盐，例如聚丙烯酸钠、聚丙烯酸钾等。优选不会 对口腔产生副作用的盐。在某些实施方式中，可以将多羧基化合物的固体加入到分散的羟 基磷灰石中。多羧基化合物的固体可以是多羧基化合物粉末、晶体等适合分散的固体形式。 [0100] 在某些实施方式中，所述可溶性钙以钙离子形式存在。在某些实施方式中，将可溶 性含钙化合物分散在溶剂中，优选地，分散在水中或水溶液中，从而形成可溶性钙。可溶性 含钙化合物的固体可以是含钙化合物粉末、晶体等适合分散和溶解的固体形式。在某些实 施方式中，可以将可溶性含钙化合物加入到羟基磷灰石的分散液中再与多羧基化合物形成 混合物。在某些实施方式中，可溶性钙来源于羟基磷灰石制备过程中未反应的钙离子同时 又没有将其通过本领域熟知的方法如离心清洗进行去除，未反应的钙离子来源于用于制备 羟基磷灰石的可溶性的钙源，如氯化钙，硝酸钙等。在某些实施方式中，可溶性钙来源于羟 基磷灰石在螯合剂或酸性条件下解离出的钙离子或与螯合剂结合的结合钙，所述的螯合剂 如EDTA等，所述的酸如柠檬酸等。
[0101] 在某些实施方式中，可以将含有可溶性钙、多羧基化合物的溶液加入到分散的羟 基磷灰石中。可以选择适当的含有可溶性钙和多羧基化合物溶液的浓度和分散的羟基磷灰 石的含量，使得混合后得到的含水混合液具有所需的浓度和含量。这些都是本领域技术人 员所熟知的常规实验操作。
[0102] 用涂
[0103] 在另一方面，本发明提供一种填充牙本质小管的方法，包括用本申请提供的口腔 护理组合物接触牙本质，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。
[0104] 本申请提供的口腔护理组合物中的羟基磷灰石能够进入牙本质小管。优选地，羟 基磷灰石能够进入牙本质小管中至少约5微米、至少约10微米、至少约15微米、至少约20 微米、至少约30微米、至少约40微米、至少约50微米、至少约60微米、至少约70微米。
[0105] 羟基磷灰石进入牙本质小管的深度可以通过适当的实验方法测定。例如，可以用 口腔护理组合物接触牙齿样本，例如动物的牙齿样本，接触一定时间后（例如10-120分钟） 取所述牙齿样本，制备牙本质小管的平行剖面，电镜下观察和测量羟基磷灰石的进入深度。 进入牙本质小管内部的羟基磷灰石对牙本质小管的封堵起重要的作用，其不仅能够封堵牙 本质小管的开口，还能够持久地保持牙本质小管封堵的状态，有助于达到更好更持久的抗 牙齿敏感效果。
[0106] 口腔护理组合物可以是本申请提供的任何适合的口腔护理组合物，例如但不限 于，牙膏、漱口水、凝胶、牙线、被用于清洁口腔表面的糊剂、粉末、片剂、或液体制剂等洁牙 剂、牙胶、牙贴、口腔喷剂、牙粉、泡沫、口香糖、唇膏、海绵、漱口剂、咀嚼胶、或义齿产品等。 通过用本申请提供的口腔护理组合物进行口腔护理，特别是进行牙齿护理，能够有效地促 进羟基磷灰石进入牙本质小管。在某些实施方式中，所述口腔护理组合物是牙膏，所述方法 包括用所述牙膏刷牙，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。在某些实施方式中，所述口 腔护理组合物是凝胶，所述方法包括用所述凝胶刷牙，或用所述凝胶与牙齿接触，以允许所 述羟基磷灰石进入牙本质小管。在某些实施方式中，所述口腔护理组合物是漱口水，所述方 法包括用所述漱口水接触牙齿，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。
[0107] 在某些实施方式中，本申请提供的包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的 含水混合液可以用于制备缓解或预防牙齿敏感的口腔护理组合物。牙齿敏感是一种常见的 口腔不适，其主要原因是由于牙本质小管内液体流动改变，刺激牙髓神经末梢，产生冲动， 传导痛觉。主要表现为刺激痛，当刷牙、吃硬物、酸、甜、冷、热等刺激时均引起酸痛，尤其对 冷刺激最敏感。本申请提供的羟基磷灰石能够深度进入到牙本质小管中，深入封堵牙本质 小管，从而减少外界环境对牙本质和/或牙神经的刺激，缓解或预防牙齿敏感。
[0108] 在某些实施方式中，本申请提供的包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的 含水混合液可以用于制备用于填充牙齿中的牙本质小管的口腔护理组合物。如本申请所表 明，羟基磷灰石能够填充牙本质小管，并且能够进入到一定的深度。
[0109] 牙科材料
[0110] 在另一方面，本发明提供一种具有牙本质小管的牙科材料，其特征在于在所述牙 本质小管中填充有羟基磷灰石。在某些实施方式中，其中所述牙科材料是牙齿。
[0111] 当用口腔护理组合物治疗或处理牙齿后，羟基磷灰石能够深入填充牙本质小管， 形成在牙本质小管中填充有羟基磷灰石的牙科材料例如牙齿。
[0112] 在某些实施方式中，所述羟基磷灰石在所述牙小管中的填充深度为至少约5微 米、至少约10微米、至少约15微米、至少约20微米、至少约30微米、至少约40微米、至少 约50微米、至少约60微米、或至少约70微米。在某些实施方式中，所述牙小管的直径为约 1-4微米。
[0113] 在本申请中，当"约"用于修饰数值时，是指数值上下浮动±10%、±5%、±4%、 或±3%的范围内。
[0114] 具体实施例
[0115] 实施例1 :制备纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的含水混合液
[0116] 1.1 原料
[0117] 原料1 :纳米羟基磷灰石（Nano HAP)为商业成品（购自葡萄牙Fluidinova公司）， 为约15% Nano HAP水溶液，其中含有约1053ppm可溶性钙，可溶性钙来源于制备纳米羟基 磷灰石时未反应完全的可溶性钙源氯化钙，同时又没有经过本领域技术人员公知的手段去 除。
[0118] 原料2:纳米羟基磷灰石（Nano HAP)为商业成品（购自上海紫林生物技术公司）， 为Nano HAP干粉，将其配置成15% Nano HAP水溶液，测量其可溶性钙约为4ppm，由于Nano HAP的溶解度非常小，其在水中溶解产生的可溶性钙基本可以忽略。
[0119] 两种Nano HAP的形貌和大小如图1、图2所示，图1为长20nm-50nm的短棒状，图 2为20nm-50nm的针状。
[0120] 柠檬酸钾为食品级原料。
[0121] 制备过程中用到的其他原料和试剂都可以在市场上通过购买方式获得或者本领 域技术人员根据已知技术经简单配置后获得。
[0122] I. 2实验仪器
[0123] Zeta 电位仪（Malvern Zetasizer Nano ZS);扫描电子显微镜（HITACHI S-4800)。
[0124] 1.3实验步骤及结果分析
[0125] 1.3. 1使用原料1
[0126] 使用原料1作为Nano HAP和可溶性钙来源，将原料1加入去离子水稀释，混合均 匀，然后再按照下表1中的不同比例加入不同剂量的柠檬酸钾，再混合均匀，配置得到悬浮 液 I-I ~I-VIIL·
[0127] 表1.不同配比的Nano HAP与柠檬酸钾悬浮液
[0130] 按照表1中的配比，分别将每组中的Nano HAP加入水中分散，然后再将柠檬酸 钾加入溶液中分散，得到悬浮液I-I~1-VIII。通过Zeta电位仪分别测试悬浮液I-I~ I-VIII的Zeta电位，从而表征不同剂量的梓檬酸钾对Nano HAP表面电性的影响。悬浮液 I-I~I-VIII的Zeta电位测量结果如图3所示。
[0131] 由图3可知，原料Nano HAP和可溶性钙作用后表面带有较强的正电荷，其水悬浮 液的Zeta电位为+34. 3mV。加入不同剂量的柠檬酸钾形成纳米羟基磷灰石-柠檬酸根复 合物，不同量的柠檬酸根均使得Nano HAP表面带有较强的负电荷，其水悬浮液的Zeta电位 在-30mV到-38mV附近。这说明带有负电荷的柠檬酸根吸附在Nano HAP表面使Nano HAP 表面的电荷由较强的正电荷转变为较强的负电荷。
[0132] 由上述表征方法结果可知，在悬浮液I-I~I-VIII中，柠檬酸根成功地吸附在 Nano HAP表面，对Nano HAP进行表面改性。
[0133] 1.3. 2使用原料2
[0134] 使用原料2为Nano HAP来源，加入去离子水稀释，并加入原料CaCl2 ·2Η20获得可 溶性钙，其Zeta电位变化如下表2所示。加入可溶性钙使Nano HAP表面电性发生转变。在 未加入可溶性钙之前，Nano HAP表面带有微弱的负电荷，加入少量可溶性钙离子之后，Nano HAP表面电性发生改变，由负电荷转变成正电荷。钙离子为Nano HAP的构势离子，对Nano HAP的表面结构以及表面电性有重要的影响。
[0135] 表2.加入可溶性钙前后Nano HAP表面Zeta电位的改变
[0137] 加入可溶性钙后再按照表3加入不同配比的柠檬酸钾，其表面电荷又发生转变变 成负电荷，且Zeta电位的绝对值增大，如图4所示。这也说明纳米羟基磷灰石的分散性得 到大幅度提1?。
[0138] 表3.不同配比的Nano HAP与柠檬酸钾悬浮液
[0140] 实施例2 :纳米羟基磷灰石封堵和进入牙本质小管
[0141] 2. 1牙本质小管暴露模型制备方法
[0142] (A)垂直于牙本质小管观测面模型A的制备方法
[0143] 取牛牙，在牙根与牙冠交界处向下3mm垂直于牛牙长轴方向切取2mm厚的圆盘， 用抛磨机抹除圆盘边缘，得到2_ X 6_的长方形观测区域。然后分别用600目、1200目、 2000目的砂纸打磨观测区域得到平整光滑的观测面。抛磨完成后，用6wt%柠檬酸进行酸 蚀5分钟，暴露牙本质小管，然后用超声波清洗机冲洗3次，每次15分钟，得到垂直于牙本 质小管观测面模型A。在SEM下观察到的垂直于牙本质小管观测面模型A如图5所示，可清 晰看到开放的牙本质小管。
[0144] ⑶平行于牙本质小管观测面模型B的制备方法
[0145] 按照（A)中的方法得到垂直牙本质小管的模型A，用待测样品处理该模型，处理完 成后，在40°C下于烘箱内烘干24小时。然后用手术刀将该模型平行于牙本质小管方向抛 开，所得抛面平行于牙本质小管即为制备的平行于牙本质小管观测面模型B。在SEM下观察 到的平行于牙本质小管观测面模型B如图6所示，可见牙本质小管管壁光滑，无沉积物，可 见纤维状物质。
[0146] 2. 2实验过程
[0147] 2. 2. 1纳米羟基磷灰石封堵牙本质小管开口实验
[0148] 2. 2. Ll 原料
[0149] 原料1 :纳米羟基磷灰石（Nano HAP)为商业成品（购自葡萄牙Fluidinova公司）， 为约15% Nano HAP水溶液，其中含有约1053ppm可溶性钙，可溶性钙来源于制备纳米羟基 磷灰石时未反应完全的可溶性钙源氯化钙，同时又没有经过本领域技术人员公知的手段去 除。
[0150] 原料2 :纳米羟基磷灰石（Nano HAP)为商业成品（购自上海紫林生物技术公司）， 为Nano HAP干粉，将其配置成15% Nano HAP水溶液，测量其可溶性钙约为4ppm，由于Nano HAP的溶解度非常小，其在水溶中溶解产生的可溶性钙基本可以忽略。
[0151] 两种Nano HAP的形貌和大小如图1、图2所示，图1为长20nm-50nm的短棒状，图 2为20nm-50nm的针状。
[0152] 柠檬酸钾为食品级原料。
[0153] 2. 2. L 2实验步骤
[0154] 将两种不同的原料分别用去离子水配制成Nano HAP含量为2. 25 %的悬浮液，处 理模型A2min，然后冲洗、干燥模型A，在SEM下观察模型A表面的封堵情况，如图7所示。
[0155] 将两种Nano HAP分别与柠檬酸钾和可溶性钙按照表4的比例混合，其中Γ -I组 使用原料1，可溶性钙来源于原料制备时未反应完全的可溶性钙源。2' -II组使用原料2， 可溶性钙源来源于加入的CaCl2 · 2H20,用Γ -I和2' -II悬浮液分别处理模型A 2min，然 后冲洗、干燥模型A，在SEM下观察模型A表面的封堵情况，如图8所示。
[0156] 表4两种不同Nano HAP、朽1檬酸钾、可溶性钙的悬浮液
[0158] 未经柠檬酸钾处理的原料INano HAP对牙本质小管表面的封堵效果由图7 (a)所 示，未经柠檬酸钾和可溶性钙处理的原料2Nano HAP对牙本质小管表面的封堵效果由图 7(b)所示。原料INano HAP能够在牙本质小管的开口表面形成封堵（见图7(a))，而分散 性较差的原料2Nano HAP对牙本质小管的封堵率较低（见图7 (b))，说明Nano HAP与牙本 质之间的作用力较差。
[0159] 经柠檬酸钾、可溶性钙处理的两种Nano HAP对牙本质小管表面的封堵效果由图 8(a)到8(b)所示。虽然两种Nano HAP原料在封堵效果上存在明显的差别，但在经过柠檬 酸钾、可溶性钙处理后，两种Nano HAP都在牙本质小管表面形成封堵，如图8 (a)、图8 (b)所 示。尤其是对于分散性较差的原料2 (如图2所示），其经过柠檬酸根、可溶性钙处理后对牙 本质小管的封堵率显著提高。而原本具有一定封堵效果的原料1 (如图1所示）在经柠檬 酸根、可溶性钙处理前后在牙本质表面的沉积层形貌有所不同，经柠檬酸根、可溶性钙处理 后的Nano HAP封堵层显得更加坚固（如图8(a)所示），说明柠檬酸根、可溶性钙的引入增 强了 Nano HAP与牙本质之间的作用力。
[0160] 2. 2. 2纳米羟基磷灰石进入牙本质小管内部实验
[0161] 按照表5中不同比例配置悬浮液1" -I、1" -II、1" -III、1" -IV，其中的Nano HAP 使用的是图1所示的Nano HAP原料，即原料1。取各悬浮液IOml,每组悬浮液中放入2只牙 本质模型A，分别在各悬浮液中浸泡40min，同时放在摇床上震荡保证悬浮液混合均匀。浸 泡完成后，用100mL去离子水清洗牙本质模型A观测面30秒，40°C下干燥。将每组悬浮液 的2个模型A之一按照2. 1中B方法得到模型B。分别将悬浮液1" -I、1" -II、1" -III和 1"-IV处理得到的模