一种蓝莓快速育苗方法以及专用培养器皿与流程

本发明属于农业技术领域，尤其涉及一种蓝莓快速育苗方法以及专用培养器皿。

背景技术：

蓝莓，学名越橘，为多年生落叶果树，呈灌木。蓝莓果实为浆果呈蓝色，近圆形，果肉细腻，种子极小，甜酸适度，具有香爽宜人的香气。蓝莓果实营养非常丰富，富含超氧化物歧化酶（SOD），是清除人体过剩氧自由基的清除剂，它不仅具有良好的营养保健作用，还具有防止脑神经老化，强心、抗癌、软化血管、增强人体机能免疫等功能。蓝莓不仅具有较高的营养价值，而且具有较高的经济价值，是近几年世界发展最为迅速的集营养与保健于一身的第三代果树品种，风靡欧美日等发达国家。美国和加拿大是蓝莓种植业和加工业的发源地。欧洲的波兰和亚洲的日本的蓝莓产量持续增加。由于国内外市场对蓝莓浆果的需求量越来越大，中国北方的辽宁省和吉林省的长白山区建立了蓝莓产业化生产基地，中国科学院南京植物研究所从1988年开始从美国引种蓝莓进行栽培研究，筛选出适合中国南方地区栽培的优良品种，近年来，山东省、江苏省、浙江省、四川省、贵州省出现了成片栽培蓝莓的种植基地，但是现有的育苗方法育苗速度较慢，且难以实现苗木的脱毒培养，难以实现优良品种的工厂化大规模繁殖。

故有必要针对上述存在的现实问题，利用植物组织培养技术的无性繁殖特点，提高育苗速度快，实现苗木的脱毒培养，使之适宜于优良品种的工厂化大规模繁殖。

在植物组织培养技术中，组培苗生根是外植体通过腋芽萌发和不定芽发生再生形成完整植株的关键必备步骤，而液体生根技术是利用液体培养基进行生根培养，完成植株再生。液体培养基是固体培养基的对应词，培养基未加入凝固剂称为培养液。培养液中营养成分、激素可自由扩散，外植体培养过程中一直保持均匀分布，所以有利于组织细胞生长，提高培养效果。

液体生根技术应用于蓝莓增殖新梢生根缺少有效固定支撑物，故而很少见有这方面研究报道。2011年关丽霞和韩德伟，研究了蓝莓组培的浅层液体生根技术，生根效果良好，同时，简化了培养基配制、节约了成本80％，不用洗根，减少了伤苗伤根。同年，廉家盛将生物反应器应用于蓝莓品种‘美登’组培快繁体系建立。在其他研究中，也有采用蛭石、珍珠岩及滤纸代替琼脂凝固剂，进行液体培养。然而，这些琼脂替代物存在外植体易污染、接种难操作、易受伤、不能有效固定、不能工厂化应用等问题中的一个或多个。

技术实现要素：

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种简便易行、成本低、且能够使蓝莓组培苗瓶内生根率、根系质量大幅度提高的蓝莓组培苗液体生根方法，亦即提供一种蓝莓快速育苗方法。

本发明采用的技术方案包括以下步骤：

(一)、配制溶液：配制B5培养基的大量元素母液、微量元素母液、有机物母液和铁盐母液4种试验母液，配制1mg/ml IBA、1mg/ml IAA、1mg/ml NAA3种激素溶液；

(二)、制备培养基：称取蔗糖30g，放入1000ml容器中，加冷蒸馏水500ml，加热搅拌使蔗糖溶化，依次吸取50ml大量元素母液、5ml微量元素母液、5ml有机物母液和5ml铁盐母液加入到上述容器中，再分别添加0.5ml IBA、0.3ml IAA、0.1ml NAA3种激素溶液，搅拌均匀，加蒸馏水至1000ml，调pH至5.4，趁热将培养基分装于吸头盒外盒中，每盒装100ml，然后在吸头盒外盒中放置支架，最后用食用菌袋包裹，高压蒸汽灭菌；

(三)、接种：选取生长势强的2-3cm增殖新梢作为外植体，超净工作台内无菌操作，每盒接种10-30个外植体，封口膜封边；

(四)、生根培养：将接种有外植体的吸头盒外盒摆放于组培室培养架上培养，待根5条以上、平均根长1cm以上时，打开吸头盒外盒移栽入基质进行驯化。

进一步地，所述在步骤(三)中，所述增殖新梢包括：初代培养腋芽和继代培养的不定芽、丛生芽。

进一步地，所述在步骤(四)中，生根培养的条件为：

培养温度昼25℃、夜15℃，先暗培养1周，然后光培养，光照强度3000lx，光周期16h光照/8h黑暗。

进一步地，所述由吸头盒改造而来，包括：吸头盒外盒和设置于所述吸头盒外盒内的支架，所述支架上设计有若干支架孔，支架的高度、孔数、孔径与增殖新梢的长度、粗度相适应。

本发明由于采用了上述技术，使之与现有技术相比具体的积极有益效果为：

1、本发明对培养基的配方进行了优化，使得蓝莓组培苗生根率大幅度提高，增殖新梢生根数、根长等根系质量指标也得到提升。

2、本发明在吸头盒外盒中放置支架，解决了液体生根技术缺少有效固定支撑物的问题，使得蓝莓组培苗瓶内生根率大幅度提高，增殖新梢生根数、根长等根系质量指标也得到提升；另外，因不使用琼脂凝固剂，故根系不易受伤、且降低了成本，方法简便易行。

3、本发明提高了育苗速度。

4、本发明实现了苗木的脱毒培养。

5、本发明能够实现优良品种的工厂化大规模繁殖。

附图说明

图1为本发明的步骤流程图；

图2是本发明的用于蓝莓快速育苗的专用培养容器的一个具体实施例的结构示意图

图中：1-吸头盒外盒，2-支架，21-支架孔。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明，本发明的实施方式包括但不限于下列实施例。

实施例：为了实现上述目的，本发明采用的技术方案包括以下步骤：

(一)、配制溶液：配制B5培养基的大量元素母液、微量元素母液、有机物母液和铁盐母液4种试验母液，配制1mg/ml IBA、1mg/ml IAA、1mg/ml NAA3种激素溶液；

(二)、制备培养基：称取蔗糖30g，放入1000ml容器中，加冷蒸馏水500ml，加热搅拌使蔗糖溶化，依次吸取50ml大量元素母液、5ml微量元素母液、5ml有机物母液和5ml铁盐母液加入到上述容器中，再分别添加0.5ml IBA、0.3ml IAA、0.1ml NAA3种激素溶液，搅拌均匀，加蒸馏水至1000ml，调pH至5.4，趁热将培养基分装于吸头盒外盒中，每盒装100ml，然后在吸头盒外盒中放置支架，最后用食用菌袋包裹，高压蒸汽灭菌；

(三)、接种：选取生长势强的2-3cm增殖新梢作为外植体，超净工作台内无菌操作，每盒接种10-30个外植体，封口膜封边；

(四)、生根培养：将接种有外植体的吸头盒外盒摆放于组培室培养架上培养，待根5条以上、平均根长1cm以上时，打开吸头盒外盒移栽入基质进行驯化。

本发明进一步设置为：在步骤(三)中，所述增殖新梢包括：初代培养腋芽和继代培养的不定芽、丛生芽。

本发明进一步设置为：在步骤(四)中，生根培养的条件为：

培养温度昼25℃、夜15℃，先暗培养1周，然后光培养，光照强度3000lx，光周期16h光照/8h黑暗。

本发明进一步设置为：由吸头盒改造而来，包括：吸头盒外盒和设置于所述吸头盒外盒内的支架，所述支架上设计有若干支架孔，支架的高度、孔数、孔径与增殖新梢的长度、粗度相适应。

在实施本发明的蓝莓快速育苗方法时，需要使用专门的培养容器与其配套，参照图1，该专用的培养容器由吸头盒改造而来，具体包括两大部分：吸头盒外盒1和支架2，支架2上设计有若干支架孔21。使用时，将支架2设置于吸头盒外盒1内即可，支架2的高度、孔数、孔径与增殖新梢的长度、粗度相适应。

下面介绍蓝莓组培苗液体生根方法，该方法包括以下步骤：

一、配制溶液

1、配制B5培养基的大量元素母液、微量元素母液、有机物母液和铁盐母液4种试验母液，配方和配制方法按照《NUTRIENT REQUIREMENTS OF SUSPENSION CULTURES OF SOYBEAN ROOT CELLS》(Experimental Cell Research50,151-158(1968))中的记载配制。

2、配制1mg/ml IBA、1mg/ml IAA、1mg/ml NAA3种激素溶液。

二、制备培养基

1、称取蔗糖30g，放入1000ml搪瓷杯中，加冷蒸馏水500ml，加热搅拌使蔗糖溶化。

2、依次吸取50ml大量元素母液、5ml微量元素母液、5ml有机物母液和5ml铁盐母液加入到上述搪瓷杯中。

3、分别添加0.5ml IBA、0.3ml IAA、0.1ml NAA3种激素溶液到上述搪瓷杯中，搅拌均匀，加蒸馏水至1000ml，此时培养基中IBA、IAA、NAA3种激素的浓度分别是0.5mg/L、0.3mg/L、0.1mg/L，最后调培养基的pH至5.4。

具体研究中，不同蓝莓品种其培养基中IBA、IAA、NAA3种激素的浓度可分别在0.3-0.7mg/L、0.2-0.4mg/L、0.06-0.14mg/L范围内适当调整。

4、趁热将培养基分装于吸头盒外盒中，每盒装100ml，然后在吸头盒外盒中放置支架，最后用食用菌袋包裹，高压蒸汽灭菌。

吸头盒外盒：长120mm×宽85mm×高80mm；

支架：长115mm×宽80mm×高25mm，28孔，孔径8mm。

三、接种

选取生长势强的2-3cm增殖新梢作为外植体，超净工作台内无菌操作，每盒接种10-28个外植体，封口膜封边。

增殖新梢既可以是初代培养腋芽，也可以是继代培养的不定芽、丛生芽。

四、生根培养

将接种有外植体的吸头盒外盒摆放于组培室培养架上培养，培养的条件为：培养温度昼25、℃夜15，℃先暗培养1周，然后光培养，光照强度3000lx，光周期16h光照/8h黑暗。

待根5条以上、平均根长1cm以上时(大约30天左右)，打开吸头盒外盒移栽入基质进行驯化。依据季节，驯化选择在温室或露地进行。

以上对本发明的一个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。