本发明涉及烟草种植领域，更具体地，涉及一种特比萘芬制剂及其在提高烟叶角鲨烯含量中的应用。
背景技术：
角鲨烯是一种脂质不皂化物，为一种多不饱和烯烃(三十碳六烯)，最初是从鲨鱼的肝油中发现的，1914年被命名为Squalene，其化学名称为2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯，属开链三萜，又称鱼肝油萜，参与人体胆固醇合成并能促进新陈代谢，具有提高体内超氧化物歧化酶(SOD)活性、增强机体免疫能力、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤等多种生理功能，是一种无毒性的具有防病治病作用的海洋生物活性物质。
角鲨烯广泛存在于动植物体内。在动物中以深海鲨鱼肝脏中含量最高，主要是深海的铠鲨、小刺鲨、缘吻田氏鲨、新西兰乌鲨肝脏中，而其它江海鲨鱼的角鲨烯含量很低，普遍低于1.5％。在植物中则以橄榄油、苋菜子油和棕榈油中含量最高，如橄榄油含有角鲨烯150～700mg/100g，米糠油中其含量为332mg/100g。深海鲨鱼是珍贵的保护动物，再加上其低生长率和低繁殖力，易过度捕捞，导致含角鲨烯的动物资源缺乏。目前发现含有角鲨烯的植物资源蓄积量少，开发利用有一定的难度。因而限制了角鲨烯的生产和使用。
现有技术中已经有公开从罗汉果、尾巨桉、糯米香茶、烟草等植物中提取角鲨烯。也有人报道从烟草废料中提取出角鲨烯见201110058487.5；因此植物中提取角鲨烯将是未来获得角鲨烯的一个重要途径。然而在各种植物中，角鲨烯的含量不高，现有技术中还没有研究表明可以通过在植物生长阶段加入外源性物质，提高植物中角鲨烯含量的报道。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种特比萘芬制剂及其在提高烟叶角鲨烯含量中的应用。
在烟草的生长过程中，添加所述特比萘芬制剂，能够提高烟叶中角鲨烯的含量。
本发明提供的特比萘芬制剂，按重量百分数计组分组成为：特比萘芬10～20％；三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯5～8％；余量为乙醇。
优选地，特比萘芬制剂，由如下按重量百分数计算的组分组成：特比萘芬20％；三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯8％；余量为乙醇。
特比萘芬是一种烯丙胺类抗真菌药，具有广谱抗真菌作用。现有技术中，通过其抑制真菌细胞膜上的角鲨烯环氧化酶来发挥抗真菌作用。发明人意外发现在烟草的生长过程中，添加特比萘芬，能够提高烟叶中角鲨烯的含量。
本发明提供了特比萘芬制剂在提高烟叶角鲨烯含量中的应用。优选地，所述特比萘芬制剂的用量为30～50克/株。更优选为50克/株.
特比萘芬的添加方式不进行特殊的限定，优选地，更好地被植物吸收和利用，所述特比萘芬通过喷雾的形式添加。
优选地，所述特比萘芬制剂为用水稀释500～1500倍后叶面喷施。更优选为1500倍。
优选地，所述特比萘芬制剂在烟草株的快速生长期施用一次。
优选地，所述特比萘芬制剂在烟草株的打顶后1周内施用一次。
更优选地，所述特比萘芬制剂在烟草株的快速生长期和打顶后1周内各施用一次。
本发明所述的烟叶可以是晾晒烟或烤烟的烟叶，优选地，所述烟叶为烤烟烟叶。
烟叶除了主要用于香烟的制备外，其会产生大量的如烟末、废弃烟叶，不适用烟叶等废品，常常只能通过降解等方式进行处理，造成浪费。角鲨烯是一种具有经济价值的物质，提升烟叶中角鲨烯的含量，一定程度上也提升了烟叶的经济价值，使烟末、废弃烟叶等废品的利用价值得以提升。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
发明人发现，在烟草的生长过程中，添加一定量的特比萘芬制剂，能够提高烟叶中角鲨烯的含量，与空白对照组相比，在添加了特比萘芬后，烟叶中的角鲨烯含量明显提升，提升了烟叶的经济价值。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明做进一步详细说明。实施例仅用于解释本发明，并不对本发明的内容做任何形式的限定。
实施例中，所用特比萘芬制剂为自配，称取一定量的特比萘芬，溶于乙醇中，再加入一定量的表面活性剂三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯，搅拌均匀即可。
其中特比萘芬购自济南宏方德医药科技有限公司；三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯购自日光化学贸易(上海)有限公司。
对照处理：
选一小区田，烤烟品种为云烟87，栽烟60株，按照15株/行排列，行株距为1m×0.5m。整个生育期间未施用任何杀虫药剂，其它栽培管理措施同常规大田生产。随机选择烟草株进行如下处理，在快速生长期和打顶后1周仅喷施清水；每个处理的数量为30株。
实施例1
选一小区田，烤烟品种为云烟87，栽烟60株，按照15株/行排列，行株距为1m×0.5m。整个生育期间未施用任何杀虫药剂，其它栽培管理措施同常规大田生产。
对每株烟草株进行如下处理，在快速生长期喷施稀释500倍的特比萘芬制剂水溶液(稀释前特比萘芬制剂的用量为30g，由以下重量百分数计算的组分组成：特比萘芬10％、三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯5％、余量为乙醇)。随机选择30株。
烟叶成熟后，选取3株烟草，每株的全部叶片洗净，用纱布吸干表面水分，去掉中脉，105℃杀青15min，60℃烘干至恒重，粉碎，过40目筛，所得样品用于测定烟叶中角鲨烯含量。
烟叶中角鲨烯的绝对含量的测定
称取上述所得烟叶粉末20g用滤纸包裹装入索氏提取器内，同时水浴温度恒定为75℃，加入200mL石油醚(60～90℃)回流加热4h，用无水硫酸钠干燥石油醚层，取石油醚提取液用旋转蒸发仪旋转至干，得黄色烟叶提取物，用石油醚定溶至50mL，利用气相色谱，采用内标法测定出烟叶中角鲨烯的绝对含量(mg/Kg)。
气相色谱条件如下：HP-5MS毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)，柱温150℃，程序升温15℃/min至290℃，恒温15min；载气为高纯He；进口温度300℃；分流比20∶1；溶剂切除1.5min；进样量0.5μL。
烟气中角鲨烯的相对含量的测定
参照文献(GC/MS法检测24种烤烟烟气中角鲨烯含量[J].广东农业科学,2012,39(3):105-107.)，利用烟草热解吸装置获得烟叶粉末的烟气石油醚提取物：烟叶粉末在烟草热解吸装置中燃烧，燃烧时产生的烟气在真空泵的作用下被抽吸进密封的装有石油醚的锥形瓶中，烟气中的成分被石油醚吸收。
然后利用GC/MS对提取的烟气中的成分进行分析测定：根据Nist标准谱库检索到定性结果，根据质谱的总离子流图确定其百分含量，按照质谱仪自带的工作站软件进行归一化测定，得到烟气中角鲨烯的相对百分含量(％)。
其质谱条件如下：GC/MS接口温度290℃；离子源温度235℃；电离方式EI源；电离电压70eV；质量扫描范围30～500amu；SCAN(全扫描)检测。
测试结果如下表1所示。
实施例2
烟苗种植及角鲨烯提取和检测见实施例1。
对每株烟草株进行如下处理，在烟草打顶后1周喷施稀释1000倍的特比萘芬制剂(稀释前特比萘芬制剂的用量为40g，由以下重量百分数计算的组分组成：特比萘芬10％、三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯8％、余量为乙醇)。随机选择30株。
测试结果如下表1所示。
实施例3
烟苗种植及角鲨烯提取和检测见实施例1。
对每株烟草株进行如下处理，在烟草快速生长期和打顶后1周各喷施稀释1500倍的特比萘芬制剂(稀释前特比萘芬制剂的用量为50g，由以下重量百分数计算的组分组成：特比萘芬10％、三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯8％、余量为乙醇)。随机选择30株。
测试结果如下表1所示。
实施例4：
烟苗种植及角鲨烯提取和检测见实施例1。
对每株烟草株进行如下处理，在快速生长期喷施稀释500倍的特比萘芬制剂(稀释前特比萘芬制剂的用量为30g，由以下重量百分数计算的组分组成：特比萘芬20％、三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯8％、余量为乙醇)。随机选择30株。
测试结果如下表1所示。
实施例5：
烟苗种植及角鲨烯提取和检测见实施例1。
对每株烟草株进行如下处理，在烟草打顶后1周喷施稀释1000倍的特比萘芬制剂(稀释前特比萘芬制剂的用量为40g，由以下重量百分数计算的组分组成：特比萘芬20％、三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯8％、余量为乙醇)。随机选择30株。
测试结果如下表1所示。
实施例6：
烟苗种植及角鲨烯提取和检测见实施例1。
对每株烟草株进行如下处理，在烟草快速生长期和打顶后1周各喷施稀释1500倍的特比萘芬制剂(稀释前特比萘芬制剂的用量为50g，由以下重量百分数计算的组分组成：特比萘芬20％、三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯8％、余量为乙醇)。随机选择30株。
测试结果如下表1所示。
表1角鲨烯测试结果
可以看出，在烟草快速生长期和打顶后1周各喷施1次特比萘芬制剂后，烟叶中的角鲨烯含量得到显著提升。