本发明涉及种植技术领域,具体来说,涉及一种促进笋兰高效繁殖的组培方法。
背景技术:
笋兰(Thunia alba(Lindl.)Rchb.f.)属于兰科笋兰属药用植物,全草用药,在民族用药中多有体现,具有活血祛瘀、接骨生肌之功效,主要用于跌打损伤、骨折、刀枪伤。由于其具有观赏与药用于一体的优良性质,近几年人们对笋兰的关注越来越高,市场对笋兰的需求量也日益增大。当前市场需求主要依靠野生资源提供,而野生笋兰繁殖速度慢、繁殖系数低、种子难萌发,加上近年生态坏境恶化和人类连年采挖,导致笋兰野生资源不断减少,无法满足当前的市场需求。目前人工栽培主要采用分株繁殖法,繁殖速度慢,人工栽培技术也不成熟。为了在满足市场需求,同时更好地保护我国野生笋兰资源,本发明针对笋兰繁殖方面的问题进行研究,获得高产大量的笋兰植株。
技术实现要素:
有鉴于此,本发明对笋兰茎段进行激素诱导使其大量增殖,解决种源缺乏、繁殖系数低下等问题,获得高产大量的笋兰植株。
本发明通过以下技术方案解决上述技术问题:
一种促进笋兰高效繁殖的组培方法,包括以下步骤:
(1)预处理:将笋兰剪成茎段,用酒精进行消毒处理后,再用 水冲洗,冷藏待用;
(2)杀菌:将预处理后的笋兰茎段进行杀菌,待用;
(3)刺激:将杀菌后的笋兰茎段先进行消毒处理,清洗后再用氯化汞和次氯酸钠溶液浸泡一段时间,接着用水浸泡并冲洗,待用;
(4)培养:将刺激处理后的笋兰茎段放入装有培养基的培养箱中培养一段时间,即得。
所述步骤(1)中,将采集回来的笋兰进行预处理,剪成0.5~2cm长的茎段,用水冲洗20~40min后,用浓度为70~80%的医用酒精对笋兰茎段进行消毒处理,接着用无菌水冲洗3~4次,放入温度为4℃以下的冰箱中冷藏待用。
所述步骤(2)中,将预处理过的笋兰茎段放入无菌烧杯中,再将无菌烧杯放到超净台里,将超净台紫外灯打开杀菌25~35min。
所述步骤(3)中,对茎段进行无菌及刺激处理,将浓度为70~80%的乙醇倒入装有笋兰茎段的无菌烧杯中,处理1~2min,然后倒出乙醇溶剂,用无菌水冲洗3~4次,再倒入氯化汞和次氯酸钠的混合液浸泡3~8min,倒出溶液,再用无菌水浸泡1~3min,用无菌水冲洗3~4次。
所述氯化汞与次氯酸钠的体积比为(2~4):(0.5~1.5),且氯化汞的质量浓度为0.05~0.2%,次氯酸钠的质量浓度为5~15%。
所述步骤(4)中,笋兰的培养分三个阶段,依次为诱导愈伤组织、细胞分化和生根壮苗阶段,先将笋兰茎段放到诱导愈伤组织培养基中培养,25d后将诱导出的疏松、呈淡绿色的愈伤组织转移到细胞分化培养基中培养;培养20d后,愈伤分化出长1~2cm芽尖时,再将其转移到生根壮苗培养基中培养,20d后长出3~5条长为2~3cm根,即获得健壮笋兰幼苗。
所述诱导愈伤组织培养基、细胞分化培养基以及生根壮苗培养基的pH值均为5.5~6.5。
所述诱导愈伤组织培养基为:MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/L IBA+ 20g/L蔗糖+6g/L琼脂。
所述细胞分化培养基为:MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂。
所述生根壮苗培养基为:1/2MS+0.5mg/L NAA+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂。
所述步骤(4)中,三个阶段笋兰的培养均是在光照培养和暗培养环境下交替进行,具体培养条件为:光照培养时间10~15h、培养温度为20~30℃、光照强度为2500~3000lx,暗培养时间10~15h、培养温度为15~25℃。
本发明的有益效果在于:
首先,本发明通过将笋兰茎段进行多次杀菌消毒处理,有效的确保了后续培养出来的笋兰植株为无病毒植株。
其次,本发明通过采用氯化汞与次氯酸钠刺激笋兰茎段,有利于促进笋兰细胞分化,缩短笋兰的培养周期。
再次,本发明通过在笋兰培养过程中分三个阶段采用不同的培养基进行培养,有效的满足了笋兰茎段在各个生长时期的营养需求,促进笋兰茎段更快的生长,缩短了笋兰的培养周期。
最后,本发明有效的解决了自然情况下难以获得无病毒大量笋兰植株的技术问题,并且将笋兰的培养周期缩短至60~70d,获得健壮优质的幼苗。
具体实施方式
为了方便本领域的技术人员理解,下面将结合实施例对本发明做进一步的描述。实施例仅仅是对该发明的举例说明,不是对本发明的限定,实施例中未作具体说明的步骤均是已有技术,在此不做详细描述。
实施例一
一种促进笋兰高效繁殖的组培方法,包括以下步骤:
(1)预处理:将采集回来的笋兰进行预处理,剪成0.5cm长的茎段,用水冲洗20min后,用浓度为70%的医用酒精对笋兰茎段进行消毒处理,接着用无菌水冲洗3次,放入温度为4℃以下的冰箱中冷藏待用;
(2)杀菌:将预处理过的笋兰茎段放入无菌烧杯中,再将无菌烧杯放到超净台里,将超净台紫外灯打开杀菌25min,待用;
(3)刺激:对茎段进行无菌及刺激处理,将浓度为70%的乙醇倒入装有笋兰茎段的无菌烧杯中,处理1min,然后倒出乙醇溶剂,用无菌水冲洗3次,再倒入氯化汞和次氯酸钠的混合液浸泡3min,倒出溶液,再用无菌水浸泡1min,用无菌水冲洗3次,待用;
(4)培养:将刺激处理后的笋兰茎段放入装有培养基的培养箱中培养,笋兰的培养分三个阶段,依次为诱导愈伤组织、细胞分化和生根壮苗阶段,先将笋兰茎段放到诱导愈伤组织培养基中培养,25d后将诱导出的疏松、呈淡绿色的愈伤组织转移到细胞分化培养基中培养;培养20d后,愈伤分化出长1cm芽尖时,再将其转移到生根壮苗培养基中培养,20d后长出3条长为2cm根,即获得健壮笋兰幼苗。三个阶段笋兰的培养均是在光照培养和暗培养环境下交替进行,具体培养条件为:光照培养时间10h、培养温度为20℃、光照强度为2500lx,暗培养时间10h、培养温度为15℃。
所述氯化汞与次氯酸钠的体积比为2:0.5,且氯化汞的质量浓度为0.05%,次氯酸钠的质量浓度为5%。
所述诱导愈伤组织培养基、细胞分化培养基以及生根壮苗培养基的pH值均为5.5。
所述诱导愈伤组织培养基为:MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/L IBA+20g/L蔗糖+6g/L琼脂,该培养基的pH值为5.5。
所述细胞分化培养基为:MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+ 30g/L蔗糖+6g/L琼脂,该培养基的pH值为5.5。
所述生根壮苗培养基为:1/2MS+0.5mg/LNAA+0.1mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂,该培养基的pH值为5.5。
实施例二
一种促进笋兰高效繁殖的组培方法,包括以下步骤:
(1)预处理:将采集回来的笋兰进行预处理,剪成2cm长的茎段,用水冲洗40min后,用浓度为80%的医用酒精对笋兰茎段进行消毒处理,接着用无菌水冲洗4次,放入温度为4℃以下的冰箱中冷藏待用;
(2)杀菌:将预处理过的笋兰茎段放入无菌烧杯中,再将无菌烧杯放到超净台里,将超净台紫外灯打开杀菌25min,待用;
(3)刺激:对茎段进行无菌及刺激处理,将浓度为80%的乙醇倒入装有笋兰茎段的无菌烧杯中,处理2min,然后倒出乙醇溶剂,用无菌水冲洗4次,再倒入氯化汞和次氯酸钠的混合液浸泡8min,倒出溶液,再用无菌水浸泡3min,用无菌水冲洗4次,待用;
(4)培养:将刺激处理后的笋兰茎段放入装有培养基的培养箱中培养,笋兰的培养分三个阶段,依次为诱导愈伤组织、细胞分化和生根壮苗阶段,先将笋兰茎段放到诱导愈伤组织培养基中培养,25d后将诱导出的疏松、呈淡绿色的愈伤组织转移到细胞分化培养基中培养;培养20d后,愈伤分化出长2cm芽尖时,再将其转移到生根壮苗培养基中培养,20d后长出5条长为3cm根,即获得健壮笋兰幼苗。三个阶段笋兰的培养均是在光照培养和暗培养环境下交替进行,具体培养条件为:光照培养时间15h、培养温度为30℃、光照强度为3000lx,暗培养时间15h、培养温度为25℃。
所述氯化汞与次氯酸钠的体积比为4:1.5,且氯化汞的质量浓度为0.2%,次氯酸钠的质量浓度为15%。
所述诱导愈伤组织培养基、细胞分化培养基以及生根壮苗培养基 的pH值均为6.5。
所述诱导愈伤组织培养基为:MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/L IBA+20g/L蔗糖+6g/L琼脂,该培养基的pH值为6.5。
所述细胞分化培养基为:MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂,该培养基的pH值为6.5。
所述生根壮苗培养基为:1/2MS+0.5mg/LNAA+0.1mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂,该培养基的pH值为6.5。
实施例三
一种促进笋兰高效繁殖的组培方法,包括以下步骤:
(1)预处理:将采集回来的笋兰进行预处理,剪成1cm长的茎段,用水冲洗30min后,用浓度为75%的医用酒精对笋兰茎段进行消毒处理,接着用无菌水冲洗4次,放入温度为4℃以下的冰箱中冷藏待用;
(2)杀菌:将预处理过的笋兰茎段放入无菌烧杯中,再将无菌烧杯放到超净台里,将超净台紫外灯打开杀菌30min,待用;
(3)刺激:对茎段进行无菌及刺激处理,将浓度为75%的乙醇倒入装有笋兰茎段的无菌烧杯中,处理1.5min,然后倒出乙醇溶剂,用无菌水冲洗3次,再倒入氯化汞和次氯酸钠的混合液浸泡5min,倒出溶液,再用无菌水浸泡2min,用无菌水冲洗3次,待用;
(4)培养:将刺激处理后的笋兰茎段放入装有培养基的培养箱中培养,笋兰的培养分三个阶段,依次为诱导愈伤组织、细胞分化和生根壮苗阶段,先将笋兰茎段放到诱导愈伤组织培养基中培养,25d后将诱导出的疏松、呈淡绿色的愈伤组织转移到细胞分化培养基中培养;培养20d后,愈伤分化出长2cm芽尖时,再将其转移到生根壮苗培养基中培养,20d后长出4条长为3cm根,即获得健壮笋兰幼苗。三个阶段笋兰的培养均是在光照培养和暗培养环境下交替进行,具体培养条件为:光照培养时间12h、培养温度为26℃、光照强度为2800lx, 暗培养时间102h、培养温度为18℃。
所述氯化汞与次氯酸钠的体积比为3:1,且氯化汞的质量浓度为0.1%,次氯酸钠的质量浓度为10%。
所述诱导愈伤组织培养基、细胞分化培养基以及生根壮苗培养基的pH值均为6。
所述诱导愈伤组织培养基为:MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/L IBA+20g/L蔗糖+6g/L琼脂,该培养基的pH值为6。
所述细胞分化培养基为:MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂,该培养基的pH值为6。
所述生根壮苗培养基为:1/2MS+0.5mg/LNAA+0.1mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂,该培养基的pH值为6。