本发明涉及一种蓝雪花的组织培养方法。
背景技术：
蓝雪花(拉丁学名：Ceratostigma plumbaginoides)别称山灰柴、假靛(河南)，角柱花等，多年多年生直立草本，为白花丹科、蓝雪花属植物。蓝雪花富含白花丹素，对风湿关节疼痛、跌打损伤、肿毒恶疮以及癣具有治疗作用。同时，蓝雪花还具有极高的观赏价值。是一种集药用与观赏价值于一体的植株。
然而，蓝雪花播种繁殖，其种子自然结实率低，不易获得种子，国内引种栽培大多数是利用进口种子栽培，价格昂贵。而利用扦插繁殖的生根率较低，不易获得大量种苗。近年来，逐渐采用组织培养方法对蓝雪花进行培养，但是在培养过程中由于采用MS培养基等营养过于丰富的培养基，极易造成蓝雪花的大量污染，导致其成活率较低，且也造成资源浪费和环境污染。
技术实现要素：
本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种蓝雪花的组织培养方法。
本发明提供的技术方案为：
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本发明至少包含如下优点：
本发明采用纳米活性炭溶液对小段进行消毒，纳米活性炭颗粒能够吸附掉小段上的各种细菌，同时对细菌具有杀灭作用，能够保证对蓝雪花外植体的彻底消毒，不会污染后期的操作。
并且，本发明的培养基未采用传统的MS培养基，而采用香蕉发酵物和土豆泥等成分培养蓝雪花，由于蓝雪花对管理上的需求不高，在培养的过程中既能保证蓝雪花的正常生长，同时又不浪费资源，节约了生产成本，且在培养过程中不易染菌。本发明的生根培养基中含有绿萝叶提取物，其中含有的生根物质能够有效刺激蓝雪花植株生根，且安全无毒，原料易得。含有的甘草提取物和N-甲基牛磺酸等成分能够有效地刺激植株生根，使得到的蓝雪花植株的根数目较多，长度也较长，提高了移栽后的成活率。
本发明的培养基中含有大量的椰子乳，椰子乳中含有蛋白质、脂肪、维生素C及钙、磷、铁、钾、镁、钠等矿物质，同时含有较多的水分和驱虫物质，使得培养基的营养更加丰富，且能够促进蓝雪花外植体的生长，利于蓝雪花外植体的生根发芽。
本发明通过组织培养技术对蓝雪花进行组织培养快速繁殖，在短时间内培育出大量可供大田栽培的蓝雪花幼苗，提高了蓝雪花种苗的繁殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
采用本发明的方法，获得的组培苗生根率在95％以上，每株平均带5-10个根，根长为4-8厘米，实现蓝雪花组培种苗的规模化生产。
具体实施方式
下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
本发明提供一种蓝雪花的组织培养方法，包括：
步骤一、选取生长健壮的蓝雪花植株，捡取枝条的上半部分，将该上半部分枝条处理为3～5cm的小段，每个小段上保留1～2个叶芽，使用75％的乙醇浸润该小段，之后用无菌水漂洗2～3次，再置于质量体积分数为0.1～0.3的纳米活性炭水溶液中浸泡8～10min，之后用无菌水冲洗3-5次，除去表面水分得到蓝雪花外植体；
步骤二、分化培养：将步骤一中得到的蓝雪花外植体接种于分化培养基中培养25～35天直至蓝雪花外植体的侧芽分化长出丛生芽；
步骤三、壮苗培养：将步骤二中经过分化培养的蓝雪花外植体在壮苗培养基中培养35～45天得到健壮植株；
步骤四、生根培养：将经步骤三中得到的蓝雪花健壮植株置于生根培养基中培养45～55天得到带根的树苗；
其中，所述分化培养、壮苗培养和生根培养的培养条件为：培养温度为23-27℃，光照强度为2000-2500lux，光照周期为10-15小时/天；
所述分化培养基、所述壮苗培养基和所述生根培养基均包含：香蕉发酵物30～50g/L、土豆泥20～30g/L、蛋白胨3～5g/L、胰蛋白酶2～3g/L和酵母膏5～10g/L，
所述生根培养基还包含：10～20％(v/v)的绿萝叶提取物，绿萝叶提取物为将绿萝叶粉碎为粒度为200目的颗粒后，过300目筛得到的液体；
香蕉发酵物为将香蕉置于25～28℃的无氧条件下发酵3～5天得到的物质。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述步骤二中，所述分化培养基还包含：椰子乳30～40mg/L，0.3～1.2mg/L 6-BA，0.3-0.9mg/L NAA和4.8-5.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述步骤三中，壮苗培养基包含：椰子乳40～50mg/L，0.4-1.2mg/L 6-BA、0.3-0.9mg/L IAA和3.8-4.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述步骤四中，生根培养基还包含：椰子乳50～60mg/L，1.0-2.0mg/L NAA，0.1～0.3mg/L甘草提取物，1.5-2.5mg/L N-甲基牛磺酸和3.8-4.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，在所述步骤四之后还进行步骤五，所述步骤五包括：炼苗和移栽：先将步骤四中得到的带根的植株在温度25℃下炼苗3-7天，之后再移栽到沙土壤中生长40～50天，然后再移栽至大田生长，其中，大田的生长条件为：温度为25-30℃，相对湿度为75-80％，遮阳率为70％。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述椰子乳为椰子经100目纱布过滤之后得到的液体。
实施例1
一种蓝雪花的组织培养方法，包括如下步骤：
步骤一、选取生长健壮的蓝雪花植株，捡取枝条的上半部分，将该上半部分枝条处理为3cm的小段，每个小段上保留1个叶芽，使用75％的乙醇浸润该小段，之后用无菌水漂洗2次，再置于质量体积分数为0.1％的纳米活性炭水溶液中浸泡8min，之后用无菌水冲洗3次，除去表面水分得到蓝雪花外植体；
步骤二、分化培养：将步骤一中得到的蓝雪花外植体接种于分化培养基中培养25天直至蓝雪花外植体的侧芽分化长出丛生芽；
步骤三、壮苗培养：将步骤二中经过分化培养的蓝雪花外植体在壮苗培养基中培养35天得到健壮植株；
步骤四、生根培养：将经步骤三中得到的蓝雪花健壮植株置于生根培养基中培养45天得到带根的树苗；
其中，所述分化培养、壮苗培养和生根培养的培养条件为：培养温度为23℃，光照强度为2000lux，光照周期为10小时/天；
所述分化培养基、所述壮苗培养基和所述生根培养基均包含：香蕉发酵物30g/L、土豆泥20g/L、蛋白胨3g/L、胰蛋白酶2g/L和酵母膏5g/L，
所述步骤二中，分化培养基还包含：椰子乳30mg/L，0.3mg/L 6-BA，0.3mg/L NAA和4.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8
所述生根培养基还包含：10％(v/v)的绿萝叶提取物，绿萝叶提取物为将绿萝叶粉碎为粒度为200目的颗粒后，过300目筛得到的液体；椰子乳50mg/L，1.0mg/L NAA，0.1mg/L甘草提取物，1.5mg/L N-甲基牛磺酸和3.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
所述步骤三中，壮苗培养基包含：椰子乳40mg/L，0.4mg/L 6-BA、0.3mg/L IAA和3.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
香蕉发酵物为将香蕉置于25℃的无氧条件下发酵3天得到的物质。
步骤五、炼苗和移栽：先将步骤四中得到的带根的植株在温度25℃下炼苗3天，之后再移栽到沙土壤中生长40天，然后再移栽至大田生长，其中，大田的生长条件为：温度为25℃，相对湿度为75％，遮阳率为70％。
所述椰子乳为椰子经100目纱布过滤之后得到的液体。
实施例2
一种蓝雪花的组织培养方法，包括如下步骤：
步骤一、选取生长健壮的蓝雪花植株，捡取枝条的上半部分，将该上半部分枝条处理为5cm的小段，每个小段上保留2个叶芽，使用75％的乙醇浸润该小段，之后用无菌水漂洗3次，再置于质量体积分数为0.3％的纳米活性炭水溶液中浸泡10min，之后用无菌水冲洗5次，除去表面水分得到蓝雪花外植体；
步骤二、分化培养：将步骤一中得到的蓝雪花外植体接种于分化培养基中培养35天直至蓝雪花外植体的侧芽分化长出丛生芽；
步骤三、壮苗培养：将步骤二中经过分化培养的蓝雪花外植体在壮苗培养基中培养45天得到健壮植株；
步骤四、生根培养：将经步骤三中得到的蓝雪花健壮植株置于生根培养基中培养55天得到带根的树苗；
其中，所述分化培养、壮苗培养和生根培养的培养条件为：培养温度为27℃，光照强度为2500lux，光照周期为15小时/天；
所述分化培养基、所述壮苗培养基和所述生根培养基均包含：香蕉发酵物50g/L、土豆泥30g/L、蛋白胨5g/L、胰蛋白酶3g/L和酵母膏10g/L，
所述步骤二中，分化培养基还包含：椰子乳40mg/L，1.2mg/L 6-BA，0.9mg/L NAA和5.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8
所述生根培养基还包含：20％(v/v)的绿萝叶提取物，绿萝叶提取物为将绿萝叶粉碎为粒度为200目的颗粒后，过300目筛得到的液体；椰子乳60mg/L，2.0mg/L NAA，0.3mg/L甘草提取物，2.5mg/L N-甲基牛磺酸和4.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
所述步骤三中，壮苗培养基包含：椰子乳50mg/L，1.2mg/L 6-BA、0.9mg/L IAA和4.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
香蕉发酵物为将香蕉置于28℃的无氧条件下发酵5天得到的物质。
步骤五、炼苗和移栽：先将步骤四中得到的带根的植株在温度25℃下炼苗3-7天，之后再移栽到沙土壤中生长50天，然后再移栽至大田生长，其中，大田的生长条件为：温度为30℃，相对湿度为80％，遮阳率为70％。
所述椰子乳为椰子经100目纱布过滤之后得到的液体。
实施例3
一种蓝雪花的组织培养方法，包括如下步骤：
步骤一、选取生长健壮的蓝雪花植株，捡取枝条的上半部分，将该上半部分枝条处理为4cm的小段，每个小段上保留2个叶芽，使用75％的乙醇浸润该小段，之后用无菌水漂洗3次，再置于质量体积分数为0.2％的纳米活性炭水溶液中浸泡9min，之后用无菌水冲洗4次，除去表面水分得到蓝雪花外植体；
步骤二、分化培养：将步骤一中得到的蓝雪花外植体接种于分化培养基中培养30天直至蓝雪花外植体的侧芽分化长出丛生芽；
步骤三、壮苗培养：将步骤二中经过分化培养的蓝雪花外植体在壮苗培养基中培养40天得到健壮植株；
步骤四、生根培养：将经步骤三中得到的蓝雪花健壮植株置于生根培养基中培养50天得到带根的树苗；
其中，所述分化培养、壮苗培养和生根培养的培养条件为：培养温度为25℃，光照强度为2250lux，光照周期为12.5小时/天；
所述分化培养基、所述壮苗培养基和所述生根培养基均包含：香蕉发酵物40g/L、土豆泥25g/L、蛋白胨4g/L、胰蛋白酶2.5g/L和酵母膏7.5g/L，
所述步骤二中，分化培养基还包含：椰子乳35mg/L，0.75mg/L 6-BA，0.6mg/L NAA和5.3g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
所述生根培养基还包含：15％(v/v)的绿萝叶提取物，绿萝叶提取物为将绿萝叶粉碎为粒度为200目的颗粒后，过300目筛得到的液体；椰子乳55mg/L，1.5mg/L NAA，0.2mg/L甘草提取物，2.0mg/L N-甲基牛磺酸和5.3g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
所述步骤三中，壮苗培养基包含：椰子乳45mg/L，0.8mg/L 6-BA、0.6mg/L IAA和5.3g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
香蕉发酵物为将香蕉置于27℃的无氧条件下发酵4天得到的物质。
步骤五、炼苗和移栽：先将步骤四中得到的带根的植株在温度25℃下炼苗5天，之后再移栽到沙土壤中生长45天，然后再移栽至大田生长，其中，大田的生长条件为：温度为28℃，相对湿度为77％，遮阳率为70％。
所述椰子乳为椰子经100目纱布过滤之后得到的液体。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出的实施例。