本发明涉及硬壳柯无性繁殖技术，尤其是一种硬壳柯组培苗生根诱导方法。
背景技术：
硬壳柯（Lithocarpus hancei(Benth.)Rehd）又名赤皮杠（台湾），酒枹（江西），棒椆（湖南），石山槁（广西），系壳斗科（Fagaceae）柯属（Lithocarpus），乔木，高很少超过15米，除花序轴及壳斗被灰色短柔毛外各部均无毛。小枝淡黄灰色或灰色，常有很薄的透明蜡层。叶薄纸质至硬革质，卵形，倒卵形，宽椭圆形，倒卵状椭圆形，狭长椭圆形或披针形。花期4-6月，果次年9-12月成熟。树皮暗灰或褐灰色，厚6-10毫米，不规则纵向浅裂，小片状剥削，内皮淡棕色，木射线刀刃状。木质部的心材与边材区别分明。心材淡棕色，年轮呈菊花状。产于秦岭南坡以南各地。该种分布广，生于海拔约2600米以下的多种环境中。
目前，硬壳柯常见的栽培方式为播种造林。组织培养技术是一种快速无性繁殖技术，选择硬壳柯优良家系或者无性系为材料，通过组织培养方法繁殖苗木，既可以满足生产上的数量要求，又可保持母本性状。然而在组培过程中，常常出现生根率低、生根不统一、根系数量少以及根系不粗壮的问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种能提高硬壳柯组培苗的生根率，根系数量以及根系萌发整齐度的硬壳柯组培苗生根诱导方法。
为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
一种硬壳柯组培苗生根诱导方法，选取增殖继代硬壳柯小苗，先进行预生根培养，然后再进行生根培养，置于适宜环境中培养，获得带根组培苗，主要操作步骤如下：
（1）取材：选取经常规组培中壮芽培养35～40d的硬壳柯继代芽，消毒瓶子外表后，在超净工作台上的无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度1～2cm的单芽，于节下2～3mm处剪切，清除基部叶片和叶柄，备用；
（2）预生根培养：将步骤（1）修剪后的单芽接种于预生根培养基中,在特定的光温环境中进行预生根培养；
（3）生根培养：待步骤（2）中的单芽经过30～35d预生根培养后，将单芽转接入生根培养基，在特定的光温环境中进行生根培养。
以上所述的预生根培养基其原料含量为：1/2改良MS培养基+NAA 1.0～2.0mg/L+维生素C6g/L++VC 15mg/L+葡萄糖25g/L+琼脂5.0g/L。
以上所述的生根培养基其原料含量为：1/2改良MS培养基+IAA 1.0～2.0mg/L+ABT2#0.5～2.0 mg/L+葡萄糖25g/L+琼脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培养基的基本组成为：KNO3 910 mg/L；NH4NO3 870 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 350 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 390 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；维生素B1 1.0 mg/L；维生素B6 0.5 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。
以上步骤（2）和步骤（3）所述的光温环境为：温度20±1℃，湿度40～45%，光照强度2000～2500lux，光照15～16h/d。
本发明具有的优点及有益效果如下：
1、本发明采用1/2改良MS培养基作为基本培养基，同时重点调整了与硬壳柯生根的相关的微量元素和有机成分，使得培养基更科学，更有针对性，更易促使硬壳柯继代芽生根，效果显著。
2、本发明在生根诱导前采用低浓度NAA和抗坏血酸（VC）对继代单芽进行预生根培养，然后再进行生根培养，可使组培苗发根统一，发根速度快，根系粗壮且数量较多。
3、本发明在增殖继代单芽经过30～35d时间预生根培养后转入生根培养，即可达到预生根培养效果，又避免了小苗在预生根培养阶段长出根系而使后期生根培养发根不整齐。
4、本发明的在特定的光温条件下进行预生根和生根培养，适应硬壳柯组培苗的生长特性，促进苗木的生长。
5、本发明缩短了硬壳柯继代芽生根周期，生根率高，根系多，质量好，生根组培苗移栽成活率高，可实现硬壳柯组培产业化育苗，为人工无性系林的建设提供优质种苗，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：
选取经常规组培中壮芽培养35～36d的硬壳柯继代芽，消毒瓶子外表后，在超净工作台上的无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度1～2cm的单芽，于节下2～3mm处剪切，清除基部叶片和叶柄。将修剪后的单芽接种于预生根培养基中,置于温度20±1℃，湿度40%，光照强度2000lux，光照16h/d的条件下进行预生根培养。其中所述的预生根培养基其原料含量为：1/2改良MS培养基+NAA 1.0mg/L+维生素C6g/L++VC 15mg/L+葡萄糖25g/L+琼脂5.0g/L。
单芽经过30～35d预生根培养后，将单芽转接入生根培养基，置于温度20±1℃，湿度40%，光照强度2000lux，光照16h/d的条件下进行生根培养。所述的生根培养基其原料含量为：1/2改良MS培养基+IAA 1.0mg/L+ABT2#0.5 mg/L+葡萄糖25g/L+琼脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培养基的基本组成为：KNO3 910 mg/L；NH4NO3 870 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 350 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 390 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；维生素B1 1.0 mg/L；维生素B6 0.5 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。
实施例2：
选取经常规组培中壮芽培养36～37d的硬壳柯继代芽，消毒瓶子外表后，在超净工作台上的无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度1～2cm的单芽，于节下2～3mm处剪切，清除基部叶片和叶柄。将修剪后的单芽接种于预生根培养基中,置于温度20±1℃，湿度40%，光照强度2500lux，光照15h/d的条件下进行预生根培养。其中所述的预生根培养基其原料含量为：1/2改良MS培养基+NAA 1.5mg/L+维生素C6g/L++VC 15mg/L+葡萄糖25g/L+琼脂5.0g/L。
单芽经过30～35d预生根培养后，将单芽转接入生根培养基，置于温度20±1℃，湿度40%，光照强度2500lux，光照15h/d的条件下进行生根培养。所述的生根培养基其原料含量为：1/2改良MS培养基+IAA 1.0mg/L+ABT2#1.0 mg/L+葡萄糖25g/L+琼脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培养基的基本组成为：KNO3 910 mg/L；NH4NO3 870 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 350 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 390 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；维生素B1 1.0 mg/L；维生素B6 0.5 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。
实施例3：
选取经常规组培中壮芽培养37～38d的硬壳柯继代芽，消毒瓶子外表后，在超净工作台上的无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度1～2cm的单芽，于节下2～3mm处剪切，清除基部叶片和叶柄。将修剪后的单芽接种于预生根培养基中,置于温度20±1℃，湿度45%，光照强度2000lux，光照16h/d的条件下进行预生根培养。其中所述的预生根培养基其原料含量为：1/2改良MS培养基+NAA 2.0mg/L+维生素C6g/L++VC 15mg/L+葡萄糖25g/L+琼脂5.0g/L。
单芽经过30～35d预生根培养后，将单芽转接入生根培养基，置于温度20±1℃，湿度45%，光照强度2000lux，光照16h/d的条件下进行生根培养。所述的生根培养基其原料含量为：1/2改良MS培养基+IAA 2.0mg/L+ABT2#1.5 mg/L+葡萄糖25g/L+琼脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培养基的基本组成为：KNO3 910 mg/L；NH4NO3 870 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 350 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 390 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；维生素B1 1.0 mg/L；维生素B6 0.5 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。
实施例4：
选取经常规组培中壮芽培养39～40d的硬壳柯继代芽，消毒瓶子外表后，在超净工作台上的无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度1～2cm的单芽，于节下2～3mm处剪切，清除基部叶片和叶柄。将修剪后的单芽接种于预生根培养基中,置于温度20±1℃，湿度45%，光照强度2500lux，光照15h/d的条件下进行预生根培养。其中所述的预生根培养基其原料含量为：1/2改良MS培养基+NAA 2.0mg/L+维生素C6g/L++VC 15mg/L+葡萄糖25g/L+琼脂5.0g/L。
单芽经过30～35d预生根培养后，将单芽转接入生根培养基，置于温度20±1℃，湿度45%，光照强度2500lux，光照15h/d的条件下进行生根培养。所述的生根培养基其原料含量为：1/2改良MS培养基+IAA 2.0mg/L+ABT2#2.0 mg/L+葡萄糖25g/L+琼脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培养基的基本组成为：KNO3 910 mg/L；NH4NO3 870 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 350 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 390 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；维生素B1 1.0 mg/L；维生素B6 0.5 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。